5xTBE (组份浓度：5xTBE, pH 8.3；配制量：1 L)：称取53.9 g Tris, 27.5 g硼酸，量取20 ml 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0),置于1 L烧杯中；加入约800 ml超纯水，充分搅拌溶解；加超纯水将溶液定容至1L；室温保存10%过硫酸铵(组份浓度：10% (W/V)过硫酸铵；配制量：10 ml)：称取1 g过硫酸铵，置于10〜50 ml烧杯中；加入约8 ml超纯水，搅拌溶解；加超纯水 将溶液定容至10 ml； 4 °C保存(保存时间为2周左右，超过期限过硫酸铵将失 去催化作用)30%丙烯酰胺(组份浓度：30% (W/V)丙烯酰胺；配制量：1 L)：称取290 g丙烯酰胺，10 g N,N'-亚甲基双丙烯酰胺，置于1L烧杯中；加入约600 ml超 纯水，水浴加热至37 C，充分搅拌至溶解；加超纯水将溶液定容至1 L，用0.45 Am滤膜过滤除去杂质；并检测该溶液pH值应不大于7；棕色瓶4 C保存0.1% AgNO3(组份浓度：0.1% (W/V) AgNO3；配制量：1 L)：称取 1g AgNO3， 置于1 L烧杯中；加入约800 ml超纯水，；加超纯水将溶液定容至1 L；棕色 瓶室温保存。
显色液(组份浓度：2% (W/V) NaOH，0.04% (W/V) Na2CO3, 0.4% (W/V) 37% 甲醛；配制量：1 L):称取20 g NaOH，0.4 g Na2CO3，置于1 L烧杯中；加入 约800 ml超纯水，充分搅拌溶解；加4 ml 37%甲醛溶液，加超纯水将溶液定容 至1 L；室温保存10%冰乙酸(组份浓度：10%冰乙酸；配制量：1 L)：量取100 ml冰乙 酸，置于1 L烧杯中；加入约800 ml超纯水，搅拌混匀；加超纯水将溶液定容 至1 L；室温保存2.2.6电泳检测2.2.6.1玻璃板清洗首先用去污粉将电泳用玻璃板、胶垫、梳子等反复清洗；然后用III级蒸馏水 漂洗2〜3次，直至玻璃板表面出现均匀水膜，既不聚成水滴，也不成股流下； 再用超纯水漂洗1次，晾干；最后用无水乙醇擦拭，晾干备用［74］2.2.6.2缓冲液贮液和凝胶母液的制备缓冲液贮液用5xTBE，具体配制方法见2.1.2.2，用时稀释5倍凝胶母液 用30%丙烯酰胺，具体配制方法见2.1.2.22.2.6.3聚丙烯酰胺凝胶的制备10%非变性聚丙烯酰胺凝胶(两块，约55 ml)各组分用量如下［58］：30%丙烯酰胺：18 ml5XTBE： 11 ml超纯水：25 mlTEMED： 36 pl10%过硫酸铵：385 pl具体操作步骤如下【75］：首先，按要求组装好垂直电泳板，两块玻璃板的底部用1.5%琼脂糖封边， 防止封闭不严而导致聚丙烯酰胺胶液漏出。
然后，灌胶分别量取配比用量的30%丙烯酰胺、5XTBE和超纯水置于 100 ml烧杯中，用玻璃棒搅拌混匀；然后用微量加样器加入配比用量的10%过 硫酸铵和TEMED，加入后聚合即开始，迅速摇匀；立即用玻璃棒引流，将混合 液灌注于两块玻璃板之间，灌胶过程一次性完成，避免产生气泡；灌胶完成后， 一次性平稳插入样梳以形成点样孔最后，待聚合完全后往电泳槽中加入1XTBE缓冲液直至没过点样孔，且正 负极槽内缓冲液高度应一致聚合时间一般在30〜60 min左右，凝胶聚合完全 的标志是点样孔附近形成清晰的界面，轻轻拔去样梳，避免破坏点样孔，并立即 用电泳缓冲液冲洗点样孔，以清除点样孔中的气泡和未凝固完全的胶液2.2.6.4 电泳取PCR扩增产物5 pl与1 pl上样缓冲液混合均匀后点入点样孔，用10%非 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，以20 bp DNA ladder (Takara)作为分子量标准， 缓冲液为1XTBE接通电源，恒压180〜200 V，电泳8〜10 h，直至漠酚蓝距离 凝胶边缘约1 cm时，停止电泳2.2.6.5银染、显色具体步骤如下地-78］：(1) 卸下玻璃板，用塑料薄片撬去上面一块玻璃板，并小心除去下方的琼 脂糖凝胶;然后将附有聚丙烯酰胺凝胶的玻璃板以凝胶面朝下浸入盛有约200 ml 超纯水的玻璃器皿中，凝胶即脱落于水中，轻轻摇晃15 sec，倒掉液体；(2) 加入约200 ml 0.1% AgNO3，置于摇床之上，以轻摇20 min左右，倒 掉液体；(3) 加入约200 ml超纯水，轻摇15 sec，倒掉液体；(4) 加入约200 ml显色液，轻摇5〜10 min，直至出现清晰带型，倒掉液 体；(5) 加入约200 ml超纯水，轻摇15 sec，倒掉液体;(6) 加入约200 ml 10% 冰乙酸，固定；(7)用Bio-Rad紫外凝胶成像系统观察，照相以记录电泳结果。
1.4.3聚丙烯酰胺凝胶改进的银染方法(1) 电泳结束后切断电源，从电泳槽中倒出缓冲液，然后取下胶板，将凝胶从玻 板中取出放入装有蒸馏水的瓷盘中，用蒸馏水漂洗2次2) 银染：加入染色液(0.2%的AgNO3、1%的冰醋酸、10%的无水乙醇)进行银染, 然后用蒸馏水漂洗2次20min⑶显影：加入显影液(3%的无水NaOH,每200 mL溶液加1 mL甲醛)进行显 色8min(4)凝胶摄影：用数码相机对凝胶进行照相。