浅谈薄层色谱的上样安徽省药物研究所 分析室：戴萍萍前言v 近年来，随着科技的突飞猛进，现代仪 器分析的方法已广泛用于中药的理化鉴定及 含量测定中薄层色谱法由于操作简便，色 谱结果直观，并具有分离鉴定双重功能，已 成为中药分析的常用手段但是薄层色谱技 术还存在某些缺陷，如由于是斑点的原位定 量带来了铺板质量、上样技术、展开技术， 显色等因素的影响，这些因素使测定结果偏 差较大因此在规范操作和提高自动化程度 方面提出了更高的要求n 上样是薄层色谱分析开始操作的第一 步，也是最关键的一步它既关系到能否 得到可以重现的分离度好的可鉴别性的薄 层色谱，更关系到定量测定结果的准确， 因为上样是最主要的误差来源n （一）如果在上样后和分离前不对原点 的样品采取“浓集”处理，在薄层板上样品容 积的负荷量是极为有限的，工作范围很窄 如果上样容积过大，将明显降低分离效 率中药供试液中欲测成分与“杂质”成分共 存，更限制了样品有效容积负荷量 n 我们在做中药薄层鉴别时习惯于加大点 样量，固然往往由于供试液中欲测成分的 低含量并混有较大量的干扰物质，不得不 加大上样容积，另一方面也许是由于对上 样溶剂超负荷的严重后果认识不足。
n 常规薄层板展距100mm，原点直径 3mm，展开后如斑点直径扩散到6mm，则 斑点容量或称分离数（SN）=10，而用高效 薄层板原点直径1mm，展开50mm，斑点直 径扩散为2mm，则SN=15但如果上样不适 当，原点也点成直径3mm，展开50mm后扩 散为4mm，则SN=6，由此可以看出即使用 高质量的薄层材料，如上样溶剂不适当的 扩大，同样也会大大降低分辨率，即使延 长展距至100mm，SN也仅仅是11，不可能 达到15 n （二）供试液的溶剂均有不同程度的洗 脱力，所以在上样的同时，样品在原点就 可以成圆形展开，原点直径的扩散促进了 这种展开，Kaiser称之为“上样圆形色谱效 应”如果样品在溶剂中的溶解度很大，原 点将变成空心圆这种效应对随后的先行 展开造成很不利的影响 n （三）供试液的溶剂在原点的残留，也 会改变展开的选择性，特别是供试液的溶 剂与展开剂的极性相差较大时更明显再 者，亲水性溶剂残留在原点吸收大气中的 水分（特别在高湿度环境）对色谱的影响 也不可低估因此，上样时的同步干燥或 继后干燥以除去原点残存的溶剂是需要的 n 但应尽可能避免高温加热，如用吹风 筒加热，样品变为固态后，部分或全部强 烈的吸附在吸附剂的颗粒上，而促进了硅 胶的有催化作用的活性表面故态化学反应 ，导致样品的变性（尤其热不稳定物质） ，至少移动相在展开时对这部分样品的溶 解速度比移动速度慢得多而形成拖尾（斑 点拖尾的原因之一）。
我们有时发现单一 的成分展开后在原点仍有部分滞留不能展 开，一个原因可能就是这种催化作用引起 n （四）上样装置（毛细管、注射器）对 薄层表面的机械损伤对定量分析将会带来 灾难性后果特别是已载有样品的表面颗 粒被划伤刮除就更严重一个壁厚0.02mm 外径0.3mm的注射针头在薄层表面施加5g的 机械力，表面局部承受的压力是30巴 n上述这些值得重视的问题对薄层色谱来说 不是不可克服的 n 因为有多种上样技术和上样后的“修复” 步骤，使平面色谱的上样问题比柱色谱更 少（柱色谱分离是在样品供试液的溶剂共 存的情况下进行的，所以样品在上样的容 积中的分布对最终的分离效率肯定有影响 ，而平面色谱不存在这一问题）因为平 面色谱是靠展开而不是靠洗脱来分离的， 其次，平面色谱是由吸附、溶剂、溶剂蒸 气参与的三维展开过程，不同于柱色谱的 一维展开，上样更具有灵活性 上样最常用的方法是用毛细管或注射器 靠毛细作用接触薄层板面，即点样上样最常用的方法是用毛细管或注射器 靠毛细作用接触薄层板面，即点样上样 工具很重要，用管状点样器械上样很容易 带来误差：薄层表面的损伤、“爬壁”效应造 成的外壁样品的沉积、样品的记忆效应等 ，此外还有管中的微小气泡。
目前，瑞士CAMAG厂的Nanomat点样 器配合定量毛细管上样可以等距离间隔定 位，并可避免手持毛细管点样时的用力不 匀，它靠机械控制接触板面，压力是恒定 的，点样误差可以<1%，这是一种相对来说 价格比较便宜质量优良的上样器械，最近 生产的Nanomat-III型可以用于手制板自 动点样器（如CAMAG的Auto Sampler - II） 不仅可以精确地定位（±0.05mm），精确地 上样（<1%），而且可以把操作者的双手解 放出来，不过这种精密仪器价格昂贵n 误差不可能完全消除，但是尽量减小 误差是可以做到的薄层色谱上样较之GC ，HPLC更容易产生系统误差，且误差的大 小与样品的溶解度、溶液的表面张力、溶 剂的捻度，挥发性和极性、上样耗费的时 间、薄层板的质量（颗粒大小，板厚度， 粘合剂种类，可湿性）等多种因素有关 但是这决不意味着定量测定结果的准确性 和重复性一定差，一个明显的例子是1987 年由西德W.Funk教授主持的7个国家的16个 实验室参加的胆固醇高效薄层色谱定量测 定所取得的与HPLC相比毫不逊色的结果 n 提高上样技术是获得质量良好的薄层 色谱的关键之一。
对于简单的样品（如大 多数化学药品）的鉴别，只要在同一薄层 板上样品与对照品在相同位置上显相同的 斑点，就基本上达到目的，或者进一步靠 薄层“指纹”图谱方能更准确地鉴别 n 因此高质量的上样不仅是定量分析的需要， 也常常是定性分析的要求除了上样工具外，一 般选用的溶剂应该尽可能避免溶解度最大的，粘 度应小，沸点不宜太低（如乙醚）或太高（如正 丁醇），在实践中，由于中药的许多成分未明， 又要尽可能“全成分”分析，用得最多的大概还是 甲醇和乙醇而未经处理的甲醇或乙醇萃取液却 经常由于杂质太多无法得到高质量的薄层色谱， 所以对于中药特别是复方中药制剂，样品的预处 理（净化）也是一个值得注意的步骤，而且有时 甚至是实验成败的关键.n 随着薄层色谱技术的广泛应用，还有 许多方面值得我们去深入的研究谢 谢！。