单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,小吞噬细胞吞噬功能测定,细菌计数法,2014,级麻醉学,1,班,张先刚,学号：,1410550160,实验目的,熟悉中性粒细胞的生物学特性及其意义、观察机体的非特异性免疫现象,掌握血液中的中性粒细胞体外吞噬异物能力的测定方法及用途,小吞噬细胞,即是中性粒细胞；,来源于骨髓造血干细胞；,占白细胞总数的,60%70%,；,生命周期短，不能分裂；,细胞核呈多叶状，胞质内含多种,颗粒,：,颗粒,内含,髓过氧化物酶,、防御素、溶菌酶、组蛋白酶、乳铁蛋白、碱性磷酸酶等中性粒细胞所特有，巨噬细胞没有这种酶，为中性粒细胞在细胞化学法上的标志中性粒细胞生物学特性：,A,、在抗化脓性细菌感染中起主要防御作用,B,、引起感染部位急性炎症反应,C,、参与超敏反应（如,型超敏反 应），引起机体免疫病理损伤实验原理,吞噬细胞可以通过,趋化、调理、吞入和杀菌等,步骤，能吞噬和消化,衰老、损伤,及,病原微生物,等异物，是机体固有免疫的重要组成部分在一定条件下，将白细胞悬液与细菌混合，保持一段时间后，取样涂片染色镜检，可以测定中性粒细胞吞噬细菌的百分率和吞噬指数。
该实验可助诊断,吞噬细胞功能障碍,的疾病实验材料,1、菌液：表皮葡萄球菌菌液（9亿/ml）,2、抗凝剂：3.8%枸缘酸钠或肝素（25U/ml）,3、毛细吸管、凹玻片、载玻片、牙签、甲醇、瑞特-吉姆萨染料、pH=6.4 PB、酒精棉球、采血针、显微镜、香柏油、洗镜油等实验流程,取凹玻片一张，在凹孔中加,1,滴（,0.4ml,）,3.8%,枸缘酸钠或者肝素（,25U/ml,）,酒精棉球消毒左手无名指后，用采血针在消毒部位取血,23,滴（约,0.2ml,），加入凹孔中混匀加表皮葡萄糖液,1,滴（,0.020.04ml,），后用牙签轻轻搅拌混匀将凹玻片放在湿盒内，置于,37,孵箱,3045min,取一滴于载玻片上，制成薄涂片，自然干燥置于瑞氏液中，,1min,后取出置于,pH=6.4 PB,中，,3min,后取出置于吉姆萨染液中，,510min,后取出,蒸馏水洗（平持玻片，在一端加水，使染液“漂走”），待干，镜检实验结果,在油镜下可,细胞核,及,被吞噬的细菌,被染成,紫色,，而,中性粒细胞的胞浆,被染成,淡红色,被吞入细菌,指标检测,1,、吞噬百分率,=,100,个中性粒细胞中吞噬了细菌的细胞数,100,2,、吞噬指数,=,100,个中性粒细胞吞噬的细菌总数,100,100%,人吞噬百分率正常参考值：62%76%,100%,人吞噬指数正常参考值：1.321.72,注意事项,1,、中性粒细胞吞噬活性在,37,时最好，温度过 高或者过低均会使其吞噬能力减低；,2,、个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能力不同；,3,、掌握好中性粒细胞与细菌的作用时间（中性粒细胞对细菌吞噬非常迅速，,5min,左右吞噬率达,45%,，,10min,左右接近,80%,，,20min,左右即达平台）。
4,、制片之前要混匀，涂片过薄、过厚都会影响观察Thats all.,Thank you!,。