非发酵菌检验非发酵菌检验第一节第一节 概述概述v 定义：定义：非发酵菌，指一大群非发酵菌，指一大群需氧或兼性厌需氧或兼性厌氧、无芽胞的氧、无芽胞的不发酵葡萄糖或仅以氧化形式不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的革兰阴性杆菌或球杆菌；多为利用葡萄糖的革兰阴性杆菌或球杆菌；多为条件致病菌条件致病菌革兰阴性杆菌O-F试验试验Fo/非发酵菌非发酵菌氧化酶试验氧化酶试验+弧菌科弧菌科肠杆菌科肠杆菌科O-F试验发酵型（发酵型（F）氧化型氧化型(O)产碱型产碱型(-)不发酵革兰阴性杆菌包括假单胞菌属、产碱不发酵革兰阴性杆菌包括假单胞菌属、产碱杆菌属、无色杆菌属、不动杆菌属、莫拉菌属、杆菌属、无色杆菌属、不动杆菌属、莫拉菌属、金氏杆菌属、黄杆菌属、艾肯菌属、土壤杆菌金氏杆菌属、黄杆菌属、艾肯菌属、土壤杆菌属、黄单胞菌属、丛毛单胞菌属等属、黄单胞菌属、丛毛单胞菌属等分类分群依据分群依据v氧化酶试验v葡萄糖氧化发酵试验v动力试验第二节、假单胞菌属v 假单胞菌属为专性需氧、有鞭毛、无芽胞、假单胞菌属为专性需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验阳性，无荚膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验阳性，DNA DNA G+CG+C为为58587 70 0molmol，包括，包括200200余种菌，代表菌株余种菌，代表菌株为铜绿假单胞菌，其他较为常见的菌种有嗜麦为铜绿假单胞菌，其他较为常见的菌种有嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。
大多为条件致病菌，产碱假单胞菌等大多为条件致病菌，这些菌这些菌种也是医院感染的主要病原菌，种也是医院感染的主要病原菌，人类非发酵菌人类非发酵菌感染中，假单胞菌占感染中，假单胞菌占7070 80 80生物学特性生物学特性 G-G-杆菌，无芽孢，无荚膜，多数菌有端鞭毛或丛杆菌，无芽孢，无荚膜，多数菌有端鞭毛或丛鞭毛，专性需氧菌，生长温度范围广，最适鞭毛，专性需氧菌，生长温度范围广，最适30-30-3737度，普通培养基上可以生长，可产各种水溶性度，普通培养基上可以生长，可产各种水溶性色素抵抗力强，多种抗生素耐药抵抗力强，多种抗生素耐药微生物检验微生物检验2.鉴定：氧化分解葡萄糖、产酸不产气，触酶氧化分解葡萄糖、产酸不产气，触酶氧化酶阳性，吲哚氧化酶阳性，吲哚、甲基红、甲基红、VP阴性阴性v分型分型 1.噬菌体分型噬菌体分型 2.血清分型血清分型 3.核糖体分型核糖体分型 4.PFGE分型分型v药敏试验的药物选择药敏试验的药物选择耐药机制耐药机制v分泌大量破坏细胞组织的胞外产物分泌大量破坏细胞组织的胞外产物v分泌分解抗生素的酶分泌分解抗生素的酶v粘附作用粘附作用v生物膜障碍生物膜障碍v主动外排主动外排v膜孔蛋白突变膜孔蛋白突变 铜绿假单胞菌（P.aeruginosa)铜绿假单胞菌广泛存在环境中，加之多种铜绿假单胞菌广泛存在环境中，加之多种传播途径和污染，因此易感染传播途径和污染，因此易感染,特别是免疫力特别是免疫力低下的患者。
引起低下的患者引起:1.1.皮肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、烧伤皮肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、烧伤感染2.2.菌血症、心内膜炎、囊性纤维变性菌血症、心内膜炎、囊性纤维变性3.3.感染眼部的铜绿假单胞菌，可以合成胶原酶，感染眼部的铜绿假单胞菌，可以合成胶原酶，以致引起角膜穿孔而失明以致引起角膜穿孔而失明一）临床意义（一）临床意义（二）生物学性状（二）生物学性状v1.形态与染色形态与染色：G-G-杆菌，多形性，有杆菌，多形性，有鞭毛、菌毛，无芽孢，鞭毛、菌毛，无芽孢，有类似荚膜样的外膜有类似荚膜样的外膜v2.2.培养特性：培养特性：专性专性需氧，需氧，4 4不生长不生长42 生长，在血平板上经生长，在血平板上经35353737，181824h24h培养培养可表现为：菌落大而扁可表现为：菌落大而扁平、湿润、边缘不齐平、湿润、边缘不齐,有有金属光泽金属光泽,有生姜样芳香有生姜样芳香气味气味,菌落周围有宽大的菌落周围有宽大的兰绿色透明溶血环兰绿色透明溶血环二）生物学性状（二）生物学性状v血平板，麦康凯平板上五种菌落血平板，麦康凯平板上五种菌落v1.典型型典型型-灰绿色，大小不一，扁平湿润，金属光灰绿色，大小不一，扁平湿润，金属光泽泽v2.大肠菌样型大肠菌样型-灰白色半透明灰白色半透明v3.黏液型黏液型-光滑突起，成粘液状光滑突起，成粘液状v4.侏儒型侏儒型-细小，无光泽，半透明细小，无光泽，半透明v5.粗糙型粗糙型-中央凸起，边缘扁平，表面粗糙中央凸起，边缘扁平，表面粗糙（二）生物学性状（二）生物学性状 2.2.培养特性培养特性普通普通琼脂培养基上能琼脂培养基上能产生水溶性绿色产生水溶性绿色素，使整个培养素，使整个培养基变为绿色。
基变为绿色MACMAC培养基上，培养基上，18-18-24h24h可形成微小无可形成微小无光泽半透明的菌光泽半透明的菌落SSSS平板上可平板上可形成类似沙门菌形成类似沙门菌的菌落中心黑中心黑色菌落）色菌落）（二）生物学性状（二）生物学性状荧光素v绿脓素绿脓素（二）生物学性状（二）生物学性状v生化反应：生化反应：氧化酶阳性，氧化酶阳性，触酶阳性，触酶阳性，O/FO/F氧化型，氧化型，精双（精双（+），还原硝酸盐还原硝酸盐v抗原构造和分型：抗原构造和分型：菌体菌体O,O,鞭毛鞭毛H,H,粘液粘液S S和菌毛抗原和菌毛抗原v抵抗力抵抗力:耐潮湿、干燥、紫外线，不耐热和消毒剂，耐潮湿、干燥、紫外线，不耐热和消毒剂，临床分离的菌株多耐药临床分离的菌株多耐药二）生物学性状（二）生物学性状 （三）铜绿假单胞菌检验（三）铜绿假单胞菌检验 v1标本采集标本采集 按按疾疾病病和和检检查查目目的的，分分别别采采取取不不同同的的标标本本：患患者者的的血血液液、脑脑脊脊液液、胸胸(腹腹)水水、脓脓液液、分分泌泌液液、痰痰、尿尿液液、十十二二指指肠肠引引流流液液、粪粪便便等等；医医院院病病区区或或手手术术室室的的空空气气、水水、地地面面、把把手手、医医疗疗诊诊断断器器械械及及生生活活用品。
用品2.检验方法检验方法v直接镜检：直接镜检：G-杆菌杆菌v分离培养分离培养：在普通培养基生长良好，经在普通培养基生长良好，经181824h24h形成圆形、扁平隆起、湿润菌落琼脂被染形成圆形、扁平隆起、湿润菌落琼脂被染成绿色或黄绿色，约成绿色或黄绿色，约8080-90-90产生绿脓素或荧产生绿脓素或荧光素在血平板上表现为：菌落大而扁平、湿在血平板上表现为：菌落大而扁平、湿润、边缘不齐；有金属光泽；有生姜样芳香气润、边缘不齐；有金属光泽；有生姜样芳香气味；菌落周围有宽大的兰绿色透明溶血环味；菌落周围有宽大的兰绿色透明溶血环三）铜绿假单胞菌检验（三）铜绿假单胞菌检验2.检验方法检验方法v鉴定鉴定：氧化酶阳性，触酶阳性，氧化酶阳性，触酶阳性，O-FO-F试试验氧化型、木糖产酸不产气，液化明胶，验氧化型、木糖产酸不产气，液化明胶，还原硝酸盐产生氮气，吲哚阴性，利用枸还原硝酸盐产生氮气，吲哚阴性，利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性三）铜绿假单胞菌检验（三）铜绿假单胞菌检验 （四）（四）铜绿假单胞菌快速鉴定要点：铜绿假单胞菌快速鉴定要点：v1 1、能能产产生生绿绿色色素素，普普通通平平板板琼琼脂脂被被染染成成绿绿色色或黄绿色。
或黄绿色v2 2、血血平平板板上上菌菌落落大大而而扁扁平平、湿湿润润、边边缘缘不不齐齐；有有金金属属光光泽泽；有有生生姜姜样样气气味味；菌菌落落周周围围有有宽宽大大的兰绿色透明溶血环的兰绿色透明溶血环v3 3、氧化酶阳性、氧化酶阳性 90%90%（五）检验结果分析与报告（五）检验结果分析与报告v1.1.结合感染症状，在血、尿及无菌体液中结合感染症状，在血、尿及无菌体液中检出特别是重复检出即可确定为病原菌检出特别是重复检出即可确定为病原菌v2.2.若无感染症状，特别是儿童，检出的若无感染症状，特别是儿童，检出的革兰阴性杆菌可视为正常菌群革兰阴性杆菌可视为正常菌群v3.3.注意铜绿假单胞菌的耐药性注意铜绿假单胞菌的耐药性第三节、窄食单胞菌属（一）、临床意义（一）、临床意义：v分布广泛，为条件致病菌，可引起抵抗力低分布广泛，为条件致病菌，可引起抵抗力低下患者菌血症、脑膜炎、尿道炎角膜炎、下患者菌血症、脑膜炎、尿道炎角膜炎、心心内膜炎内膜炎等通常从呼吸道标本中分离通常从呼吸道标本中分离在非发酵菌所致的感染中居第三位，仅次于铜绿发酵菌所致的感染中居第三位，仅次于铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌假单胞菌和鲍曼不动杆菌。
二）、微生物特性（二）、微生物特性vG-直或微弯曲杆菌，具有端鞭毛直或微弯曲杆菌，具有端鞭毛1-8根根2根或根或多根极端丛鞭毛，有动力，无芽孢多根极端丛鞭毛，有动力，无芽孢v该菌专性需氧，营养要求不高，可在普通平该菌专性需氧，营养要求不高，可在普通平板血平板和板血平板和MAC上生长血平板上培养上生长血平板上培养18-24小时，形成圆形、光滑、湿润、浅黄色菌小时，形成圆形、光滑、湿润、浅黄色菌落；培养落；培养48小时菌落，可呈黄色、绿色或灰小时菌落，可呈黄色、绿色或灰白色，菌落中心可有变透明的趋势，称为白色，菌落中心可有变透明的趋势，称为“猫猫眼眼”现象二）、微生物检验（二）、微生物检验v标本采集：血液标本先增菌后分标本采集：血液标本先增菌后分离培养，其他标本直接接种离培养，其他标本直接接种v分离培养：营养需求不高，在血分离培养：营养需求不高，在血平板和普通琼脂平板上生长良好，平板和普通琼脂平板上生长良好，经经35培养培养18-24h后可形成中等后可形成中等大小、圆形、光滑、湿润、不溶大小、圆形、光滑、湿润、不溶血的菌落，并可产黄色色素血的菌落，并可产黄色色素4不生长，不生长，42 近半数生长。
并在近半数生长并在MAC平板上生长良好平板上生长良好二）、微生物检验（二）、微生物检验v鉴定：氧化酶（鉴定：氧化酶（-），明胶液化试验（），明胶液化试验（+），），七叶苷（七叶苷（+），赖氨酸脱羧酶（），赖氨酸脱羧酶（+），），氧化分解葡萄糖氧化分解葡萄糖三）、药敏试验（三）、药敏试验v含含 内酰胺酶内酰胺酶v 临床治疗首选磺胺类和奎诺酮类抗生素（磺临床治疗首选磺胺类和奎诺酮类抗生素（磺胺嘧啶，环丙沙星）胺嘧啶，环丙沙星）v 对亚胺培南天然耐药对亚胺培南天然耐药 鉴定实验鉴定实验v 不用不用K-b法做药敏试验法做药敏试验四）、鉴定要点（四）、鉴定要点v在血平板和在血平板和MAC上生长良好上生长良好v氧化酶（氧化酶（-）v OF试验氧化型试验氧化型v 赖氨酸脱羧酶阴性赖氨酸脱羧酶阴性v 可产黄色色素可产黄色色素v 抗生素的敏感方式抗生素的敏感方式第四节、不动杆菌属v定义：为一群不发酵糖类、氧化酶阴性、不定义：为一群不发酵糖类、氧化酶阴性、不能运动的能运动的G-杆菌v属莫拉菌科属莫拉菌科v 临床分离最多的为鲍曼不动杆菌，排在非发临床分离最多的为鲍曼不动杆菌，排在非发酵菌的第二位，仅次于铜绿假单胞菌。
酵菌的第二位，仅次于铜绿假单胞菌一）、临床意义（一）、临床意义v分布广泛分布广泛v 条件致病菌条件致病菌v 医院感染的常见病原菌医院感染的常见病原菌v多重耐药和泛耐药菌株多重耐药和泛耐药菌株（二）、微生物学特性（二）、微生物学特性vG-球杆菌，常成对排列，球杆菌，常成对排列，也可单个存在无芽孢，也可单个存在无芽孢，无鞭毛，粘液型菌株有无鞭毛，粘液型菌株有荚膜莫拉菌科莫拉菌科v营养要求一般，在普通营养要求一般，在普通琼脂平板和琼脂平板和MAC平板上平板上均能生长均能生长SS平板上平板上部分菌株可生长部分菌株可生长三）、微生物检验v标本采集：对于含菌量较多的标本采取直接标本采集：对于含菌量较多的标本采。