1高纯度甜茶苷抗疲劳及免疫调节功能研 究作者：谢莹, 陈全斌, 罗达伟, 钟正贤【摘要】 目的探讨甜茶苷纯品的抗疲劳及免疫调节功能的作用方法对小鼠连续灌胃不同剂量的粗品和甜茶苷纯品,采用小鼠负重游泳实验，测定小鼠游泳耗竭时间,以及血中乳酸和尿素氮含量; 对正常小鼠免疫后测定其溶血素抗体生成和免疫器官重量,采用碳粒廓清法测定单核细胞的吞噬功能结果粗品和甜茶苷在大、小剂量下可明显延长小鼠游泳耗竭时间，减少血中乳酸和尿素氮含量；增加小鼠胸腺、脾脏等免疫器官重量，提高小鼠血清溶血素水平提高小鼠单核吞噬细胞的吞噬指数结论粗品和甜茶苷具有抗疲劳、免疫增强作用 【关键词】 甜茶提取物； 抗疲劳； 免疫调节甜茶 Rubus Suavissimus S．Lee 是蔷薇科悬钩子属的一种灌木目前人们对甜茶药理研究大部分局限于甜茶粗提物，研究表明甜茶粗提物能降低正常小鼠血糖水平；其对小鼠糖异生具有明显的抑制作用，并具一定的降血脂和抗氧化作用［1］，但对甜茶苷纯品的药理研究未见报道为此本文对高纯度甜茶苷（含甜茶苷98.5%，以下简称甜茶苷）和粗提取物（含甜茶苷 40%，以下简称粗品）进行研究，探索其抗疲劳、免疫增强和降血糖作用。
1 材料与仪器1.1 甜茶苷及粗品的制备甜茶苷和粗品的制备按文献［2］进行21.2 动物昆明种小鼠(清洁级)，体质量 18～22 g，雌雄各半，由广西医科大学实验动物中心提供(合格证号 SCXK 桂 2003-0003)小鼠分性别饲养于空调实验室内，室温（22±2）℃，相对湿度（60±2）％，喂颗粒标准饲料，自由饮水和摄食1.3 药物与试剂阳性药百年乐，广西中医学院制药厂产品(批号 20070809) 左旋咪唑，桂林制药厂产品(批号 20060301)乳酸试剂盒，南京建成生物工程研究所产品(批号 20071023)尿素氮试剂盒，长春汇力生物技术有限公司产品(批号2007017)1.4 仪器 722 型光栅分光光度计(上海分析仪器三厂)2 方法2.1 小鼠负重游泳实验及乳酸和尿素氮测定［3］取小鼠 60 只，雌雄各半随机分为空白对照组，阳性百年乐 (5.0 g/kg) 组，粗品大、小剂量组, 甜茶苷大、小剂量组，每组 10 只灌胃给药 1 次/d，连续 8 d第 8 天给药后 1 h，开始负重游泳实验给小鼠负重(负重量约为体质量的 10%)，放入水温 30℃水槽中游泳，并记录小鼠开始游泳至体力耗尽沉入水面下 8s 不能浮出水面为止的时间，为体力耗竭时间。
并在耗竭游泳实验后的各组小鼠立即从水中取出，让小鼠休息 30 min 后，摘除眼球取血，按临床试剂盒方法测定血液中乳酸和尿素氮的含量2.2 对小鼠溶血素抗体生成的影响［4］取小鼠 60 只，随机均分为 6 组分设空白对照组， 阳性药左旋咪唑（50 mg/kg）组，粗品大、小剂量组, 甜茶苷大、小剂量组，每组 10 只给药各组灌胃给药，空白对照组给予同体积蒸馏水于给药第 1天每只小鼠腹腔注射 5％鸡红细胞混悬液 0.2 ml 进行免疫，连续给药 7 d，1 次/d3末次给药后 40 min，摘眼球取血、离心，取血清用生理盐水稀释 100 倍，取稀释血清 lml 与 0.5 ml 5％鸡红细胞和 0.5 ml 10％新鲜豚鼠血清(1∶10)混合，在 37℃恒温箱中保温 30 min 后，置 0℃冰箱终止反应离心取上清液，分光光度计 540 nm 处测定其吸光度(A)值处死小鼠后称体质量，摘出胸腺及脾脏称重，以胸腺或脾脏重量（mg）与体质量(g)之比作为胸腺或脾脏指数2.3 单核巨噬细胞吞噬功能测定采用碳粒廓清法［5］取小鼠 60 只，雌雄各半，随机分为空白对照组，左旋咪唑（100 mg/kg）组，粗品大、小剂量组, 甜茶苷大、小剂量组，每组 10 只。
用药各组小鼠灌胃给药，正常对照组和模型对照组给予等体积蒸馏水，1 次/d，连续 7 d于末次给药 60 min 后，小鼠尾静脉注射 20% 印度墨汁 0.1 ml／10 g 体重，于注入后的 2 min 和 7 min 时分别从小鼠眼眶静脉丛用微量吸管取血 20 μl，溶于 2 ml 0.1% Na2 CO3 溶液中，分光光度计上 650 nm 处测定吸光度(OD 值)，按公式:K=(logOD1-logOD2)/(t2-t1)计算吞噬指数 K 值 2.4 统计学处理数据应用 SPSS11.5 软件分析，采用完全随机设计的单因素方差分析（one-way ANOVA），各样本均数间多重比较采用 LSD（least significant difference）t 检验P0.05 时有统计学意义3 结果3.1 对小鼠抗疲劳能力的影响阳性药百年乐，粗品大、小剂量组和甜茶苷大剂量组能明显延长小鼠游泳耗竭时间，并降低血乳酸和尿素氮含量，与对照组比较有统计学意义见表 1表 1 甜茶提取物对小鼠抗疲劳能力的影响(略)3.2 对小鼠溶血素抗体生成的影响阳性药左旋咪唑，粗品大、小剂量组和甜茶4苷大、小剂量组能提高小鼠溶血素抗体生成，并能增加小鼠胸腺指数和脾脏指数，与对照组比较，粗品和甜茶苷的高剂量组有统计学意义。
结果见表 2表 2 甜茶提取物对小鼠溶血素抗体生成及免疫器官重量的影响(略)3.3 对单核巨噬细胞吞噬功能的影响粗品和甜茶苷高剂量组与阳性药左旋咪唑均能显著提高单核巨噬细胞吞噬指数，低剂量组也有一定作用与对照组比较，粗品和甜茶苷的高剂量组有统计学意义结果见表 3表 3 甜茶提取物对单核巨噬细胞吞噬功能的影响(略)4 讨论本研究发现，甜茶粗品及高纯度甜茶苷大小剂量组均能明显延迟小鼠力竭状态的出现，反映动物抗运动疲劳能力的增强而乳酸堆积是肌肉产生疲劳的主要原因，也是影响肌肉活动能力的重要因素，血清尿素氮的含量与运动呈直线关系，其在体内的蓄积和机体能量物质的大量消耗，是引起运动性疲劳的一个重要原因我们研究发现甜茶苷具有降低血中乳酸及血清尿素氮的作用，提示其消除小鼠运动引起的肌肉疲劳，从而延长小鼠游泳耗竭时间，提高运动能力的可能因素鸡红细胞的定量溶血测定法反映了抗体分泌细胞产生和分泌抗体的能力，而溶血素水平反映了血清中抗体量的多少，两者是机体体液免疫功能的可靠性指标溶血素实验可了解机体抗体产生的情况，以反映机体体液免疫的功能状态胸腺和脾脏是机体主要的免疫器官，免疫器官指数可反映机体体液免疫和细胞免疫的功能状态。
本研究结果显示，粗品和甜茶苷能使小鼠胸腺、脾脏等免疫器官重量有一定增加，提高免疫器官的指数，提高小鼠血清溶血素水平，提示其具有免疫增强作用单核巨噬细胞系统是机体重要的防御系统，它具有强大而迅速的吞噬、廓清5异物颗粒以及清除机体内某些有害物质碳粒廓清法测定单核巨噬细胞功能是典型的一种观察免疫系统功能的方法本研究结果显示，粗品和甜茶苷可提高小鼠单核吞噬细胞的吞噬指数，提示粗品和甜茶苷对小鼠非特异性免疫功能具有增强作用参考文献】［1］孙斌,鲁力,陆继培.甜茶素对大鼠实验性高脂血症作用的研究［J］.广西医科大学学报,2001,18(5): 627.［2］陈全斌,张巧云,义祥辉. 高纯度甜茶甙的制备［J］.林业科技,2006,31(4):55.［3］黄欣,赵海龙.青海枸杞叶水提取液对小鼠耐缺氧及抗疲劳作用的研究［J］.中华实用中西医杂志,2007，20(15):1334.［4］刘兵,宋社吾,刘道芳,等.益气通便颗粒免疫增强作用研究［J］.中药药理与临床, 2005, 21(3): 47.［5］陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1993：757.。