蟹味菇液体发酵条件初探 王洪波 陈美霞 赵从凯 侯术海 韩磊 丁雪珍Reference：对适于蟹味菇（Hypsizygus marmoreus）液体培养基和培养条件进行了筛选研究，结果表明，其适宜的液体培养基组成为：3%玉米粉，1.5%麸皮水，0.3%维生素母液，KH2PO4 0.1%，MgSO4 0.5%；适宜摇瓶的培养条件为：培养基初始pH值为5.5，在25 ℃，160 r/min下，装料系数60%，接种量1.5管，振荡培养5 dKeys：蟹味菇；发酵条件；培养基TQ920.6：A：1002-1302（2014）01-0206-02收稿日期：2013-05-19基金项目：2010年山东省农业良种化重点项目作者简介：王洪波（1977—），男，山东淄博人，硕士，副教授，研究方向为微生物发酵与调控E-mail：[email protected]蟹味菇（Hypsizygus marmoreus）属担子菌亚门（Basidiomycotina）层菌纲（Hymenomycetes）伞菌目（Agaricales）白蘑科（Tricholomataceae）玉蕈属（Hypsizygus），是一种大型木质腐生真菌，主要分布于日本、欧洲、北美和西伯利亚地区。
蟹味菇为中低温和变温结实型菌类，营养丰富，包括8 种人体必需氨基酸，其中赖氨酸、精氨酸含量高于一般菇类，对于增智、增高起着重要作用，同时蟹味菇有防止便秘、抗癌、防癌，提高免疫力的独特功效因此，蟹味菇作为一种低热量、低脂肪的食品，受到人们的青睐，在国内外市场上供不应求1材料和方法1.1供试菌株蟹味菇菌种由潍坊职业学院发酵实验室提供1.2培养基（1）平板培养基：马铃薯20%，葡萄糖1%，红糖1%，酵母浸膏0.25%，牛肉膏3%，MgSO4 0.1%，KH2PO4 02%，维生素B1 10 mg/L，水 1 000 mL，pH值自然2）母种活化培养基（改良PDA培养基）：马铃薯200 g，蔗糖20 g，琼脂20 g，MgSO4 0.5 g，KH2PO4 1.0 g，维生素母液2 mL，水 1 000 mL，pH自然其中维生素母液配方为：盐酸硫胺素（维生素B1）0.05%，烟酸（维生素PP）0.25%，盐酸吡哆醇（维生素B6）005%，甘氨酸1% （3）碳源试验基础培养基为蛋白胨 20%，KH2PO4 01%，MgSO4 0.5%，维生素母液 2 mL/L，pH自然4）氮源试验基础培养基为葡萄糖2.0%，KH2PO4 01%，MgSO4 0.5%，维生素母液 2 mL/L，pH自然。
1.3方法1.3.1母种活化将蟹味菇母种接入母种活化培养基斜面，25 ℃，培养8～10 d，每隔1 d观察菌丝生长状况，待菌丝长满斜面，选择菌丝生长健壮的斜面备用1.3.2最佳碳氮源筛选1.3.2.1最佳碳源筛选[1]以碳源试验基础培养基为基础，分别将2%葡萄糖、绵白糖、玉米粉、淀粉、红糖、蔗糖加入到培养基，共设6个处理，每处理3次重复培养瓶装料系数为40%（250 mL培养瓶装培养液100 mL），于25 ℃，140 r/min培养每隔1 d镜检，振荡培养5 d，取整瓶发酵液并测菌丝干质量（105 ℃，烘干至恒质量）1.3.2.2最佳氮源筛选以氮源试验基础培养基为基础，分别将2%牛肉膏、蛋白胨、硝酸铵、尿素、麸皮水、酵母膏加入到培养基，共设6个处理，每处理3次重复培养瓶装料系数为40%（250 mL培养瓶装培养液100 mL），于25 ℃，140 r/min 培养每隔1 d镜检，振荡培养5 d，取整瓶发酵液并测菌丝干质量（105 ℃，烘干至恒质量）1.3.3培养基最佳配方筛选[2]对最佳碳氮源浓度及维生素母液浓度进行3因素3水平正交试验（表1）培养瓶装料系数为40%，于25 ℃，140 r/min培养。
每隔1 d镜检，振荡培养5 d，取整瓶发酵液并测菌丝干质量（105 ℃，烘干至恒质量）共计9个处理，每个处理3次重复表1蟹味菇液体发酵条件L9（33）正交试验因素和水平A：碳源浓度（%）1B：氮源浓度（%）1C：维生素母液（%）111.010.3211.510.4312.010.51.3.4培养温度筛选试验以最佳培养基配方为基础，培养瓶装料系数为40%（250 mL培养瓶装培养液100 mL），pH值自然设20、25、30 ℃3个处理，每处理3次重复 140 r/min 培养每隔1 d镜检，振荡培养5 d，取整瓶发酵液并测菌丝干质量（105 ℃，烘干至恒质量）1.3.5培养基初始pH值筛选试验[3]以最佳培养基配方为基础，培养瓶装料系数为40%，设pH值为4.5、5.0、5.5、60、6.5、7.0、7.5，7个处理，每处理3次重复于25 ℃下，140 r/min 培养每隔1 d镜检，振荡培养5 d，取整瓶发酵液并测菌丝干质量（105 ℃，烘干至恒质量）1.3.6摇床转速筛选试验以最佳培养基配方为基础，培养瓶装料系数为40%，自然pH设120 、140 、160 、180 r/min 4个处理，每处理3次重复。
于25 ℃培养每隔1 d镜检，振荡培养5 d，取整瓶发酵液并测菌丝干质量（105 ℃，烘干至恒质量）1.3.7培养时间筛选试验以最佳培养基配方为基础，培养瓶装料系数为40%，自然pH值设培养3、5、7 d，3个处理，每处理设3次重复于25 ℃，140 r/min培养每隔1 d镜检，振荡培养5 d，取整瓶发酵液并测菌丝干质量（105 ℃，烘干至恒质量）1.3.8装料系数筛选试验以最佳培养基为基础，分别设培养瓶装料系数为20% 、40%、60% 3个处理，每处理3次重复于25 ℃，140 r/min培养每隔1 d镜检，振荡培养5 d，取整瓶发酵液并测菌丝干质量（105 ℃，烘干至恒质量） 1.3.9接种量筛选试验以最佳培养基为基础，分别设接种量0.5管、1管、1.5管、2管、2.5管、3管6个处理，每处理3次重复培养瓶装料系数为40%，于25 ℃，140 r/min培养每隔1 d镜检，振荡培养5 d，取整瓶发酵液并测菌丝干质量（105 ℃，烘干至恒质量）2结果与分析2.1碳源对蟹味菇液体培养的影响由表2可知，蟹味菇菌丝在添加2%玉米粉的碳源试验基础培养基中生长相对较好，菌丝量最大其余碳源对蟹味菇菌丝生长影响大小依次为绵白糖>淀粉>红糖>葡萄糖>蔗糖。
表2碳源对蟹味菇液体培养的影响碳源1菌丝干质量（mg/mL）葡萄糖13.4eE绵白糖15.5bB淀粉14.2cC玉米粉19.0aA红糖13.8dD蔗糖13.2fE2.2氮源对蟹味菇液体培养的影响蟹味菇菌丝在添加2%麸皮水的氮源试验基础培养基中生长相对较好，菌丝量最大，其次为牛肉膏、蛋白胨、酵母膏而尿素、硝酸铵作为氮源的效果较差（表3）表3氮源对蟹味菇液体培养的影响氮源1菌丝干质量（mg/mL）牛肉膏14.0bB蛋白胨14.0bB尿素10.8dD硝酸铵10.7dD麸皮水15.3aA酵母膏13.3cC2.3培养基配方优化由表4可知，对蟹味菇菌丝生长影响大小的因素为玉米粉>麸皮水>维生素母液，即碳源浓度对蟹味菇菌丝生长的影响最大，其次为氮源浓度，维生素母液对蟹味菇菌丝生长的影响效果最小根据正交试验结果，蟹味菇液体培养的最佳配方为3%玉米粉，1.5%麸皮水，0.3%维生素母液2.4培养温度对蟹味菇液体培养的影响在25 ℃下，蟹味菇菌丝生长相对较好，其次分别为30 ℃，20 ℃（表5）2.5培养基初始pH值对蟹味菇液体培养的影响由表6可知，蟹味菇菌丝在培养基初始pH值为5.5的酸性环境条件下生长最好，菌丝生长量最大，其次为培养基初Reference：[1]杨荣玲，陈卫东，赵祥杰，等. 巴西虫草液体培养条件的优化[J]. 中国食用菌，2007，26（1）：50-54.[2]张文隽，吴亚召，雷萍，等. 桦树桑黄液体发酵培养基优化研究[J]. 中国食用菌，2010，29（6）：24-25.[3]江艳华，江晓路，王鹏，等. 白灵菇液体培养条件的研究及栽培试验[J]. 食用菌学报，2005，12（1）：37-41.孙勇，蒋继宏. 红缘拟层孔菌的培养条件[J]. 江苏农业科学，2014，42（1）：208-210. 1.3.9接种量筛选试验以最佳培养基为基础，分别设接种量0.5管、1管、1.5管、2管、2.5管、3管6个处理，每处理3次重复。
培养瓶装料系数为40%，于25 ℃，140 r/min培养每隔1 d镜检，振荡培养5 d，取整瓶发酵液并测菌丝干质量（105 ℃，烘干至恒质量）2结果与分析2.1碳源对蟹味菇液体培养的影响由表2可知，蟹味菇菌丝在添加2%玉米粉的碳源试验基础培养基中生长相对较好，菌丝量最大其余碳源对蟹味菇菌丝生长影响大小依次为绵白糖>淀粉>红糖>葡萄糖>蔗糖表2碳源对蟹味菇液体培养的影响碳源1菌丝干质量（mg/mL）葡萄糖13.4eE绵白糖15.5bB淀粉14.2cC玉米粉19.0aA红糖13.8dD蔗糖13.2fE2.2氮源对蟹味菇液体培养的影响蟹味菇菌丝在添加2%麸皮水的氮源试验基础培养基中生长相对较好，菌丝量最大，其次为牛肉膏、蛋白胨、酵母膏而尿素、硝酸铵作为氮源的效果较差（表3）表3氮源对蟹味菇液体培养的影响氮源1菌丝干质量（mg/mL）牛肉膏14.0bB蛋白胨14.0bB尿素10.8dD硝酸铵10.7dD麸皮水15.3aA酵母膏13.3cC2.3培养基配方优化由表4可知，对蟹味菇菌丝生长影响大小的因素为玉米粉>麸皮水>维生素母液，即碳源浓度对蟹味菇菌丝生长的影响最大，其次为氮源浓度，维生素母液对蟹味菇菌丝生长的影响效果最小。
根据正交试验结果，蟹味菇液体培养的最佳配方为3%玉米粉，1.5%麸皮水，0.3%维生素母液2.4培养温度对蟹味菇液体培养的影响在25 ℃下，蟹味菇菌丝生长相对较好，其次分别为30 ℃，20 ℃（表5）2.5培养基初始pH值对蟹味菇液体培养的影响由表6可知，蟹味菇菌丝在培养基初始pH值为5.5的酸性环境条件下生长最好，菌丝生长量最大，其次为培养基初Reference：[1]杨荣玲，陈卫东，赵祥杰，等. 巴西虫草液体培养条件的优化[J]. 中国食用菌，2007，26（1）：50-54.[2]张文隽，吴亚召，雷萍，等. 桦树桑黄液体发酵培养基优化研究[J]. 中国食用菌，2010，29（6）：24-25.[3]江艳华，江晓路，王鹏，等. 白灵菇液体培养条件的研究及栽培试验[J]. 食用菌学报，2005，12（1）：37-41.孙勇，蒋继宏. 红缘拟层孔菌的培养条件[J]. 江苏农业科学，2014，42（1）：208-210. 1.3.9接种量筛选试验以最佳培养基为基础，分别设接种量0.5管、1管、1.5管、2管、2.5管、3管6个处理，每处理3次重复培养瓶装料系数为40%，于25 ℃，140 r/min培养。
每隔1 d镜检，振荡培养5 d，取整瓶发酵液并测菌丝干质量（105 ℃，烘干至恒质量）2结果与分析2.1碳源对蟹味菇液体培养的影响由表2可知，蟹味菇菌丝在添加2%玉米粉的碳源试验基础培养基中生长相对较好，菌丝量最大其余碳源对蟹味菇菌丝生长影响大小依次为绵白糖>淀粉>红糖>葡萄糖>蔗糖表2碳源对蟹味菇液体培养的影响碳源1菌丝干质量（mg/mL）葡萄糖13.4eE绵白糖15.5bB淀粉14.2cC玉米粉19.0aA红糖13.8dD蔗糖13.2fE2.2氮源对蟹味菇液体培养的影响蟹味菇菌丝在添加2%麸皮水的氮源试验基础培养基中生长相对较好，菌丝量最大，其次为牛肉膏、蛋白胨、酵母膏而尿素、硝酸铵作为。