1近交系,重组近交系,同源导入近交系和同源突变近交系(1)近交系: 指通过连续20代以上兄妹交配之后培育而来的具有高度遗传同源性的动物,几乎具有与同卵孪生动物的遗传特点 关键为:近交;近交系的培育过程就是从动物群体多态杂合的遗传组成中,选择保留一小部,淘汰其它大部分的过程(2)重组近交系:将两个无关的近交系动物进行交配产生F2代后,经过连续20代以上的全同胞兄妹交配而育成的近交系,称为重组近交系为重组近交系提供亲代的两个近交称为祖系 祖系各个基因位点上的基因随机地固定于不同的重组近交系中 在这个过程中,相互连锁的基因同时固定于一个近交系的概率更大,这为研究基因的定位,提供了很好的实验材料3)同源导入近交系:简称同源导入系,通过基因导入的方法(主要指通过交配,按孟德尔定律对后代进行表型分析)将一个目的基因导入某个近交系的基因组内,有时又译为基因导入系这种培育方法导致育成近交系和原近交系之间几乎是同源的状态4)同源突变近交系:是指近交系在某个基因位点上发生突变而培育出来的新近交系;它和原近交系的差异只是突变基因位点上带有不同的基因,而其他位点上的基因完全;同源突变近交系有别于通常所说的近交系亚系分化,因为这里的突变相当明确地改变了原近交系的遗传组成,而且研究者更注意了突变基因的研究。
2产后发情与刺激性排卵3 3R概念(1)3R原则为了缓解动物保护主义者对动物实验的影响,同时也为了使动物实验更加准确,更加人道,近年来,欧美等国越来越多的人提倡3R原则该原则最早由英国动物学家William Russell和微生物学家Rex Bursh于1959年提出2) 3R主要内容;减少(reduction):就是要求在实验中尽可能减少实验动物的使用数量,提高实验动物的利用率和实验的准确性优化(refinement):即是确保动物在麻醉、镇痛和镇静剂或其它适当的手段作用下进行实验,不使其遭受不必要的伤害或痛苦替代(replacement):¡ 替代即替代方法,其原意指应用无知觉材料的科学方法来代替使用活的有知觉的脊椎动物的方法.¡ 这一概念的基本含义是任何的科学方法,只要是使用非生物材料或无知觉的低等生物(如无脊椎动物)材料来代替使用活的脊椎动物的方法,都属于替代.¡ 其范围应该包括用组织学、胚胎学、细胞学或计算机等方法取代整体动物实验,以低等动物取代高等动物等.(3)3R与我们的态度:¡ 只要人类存在,就要进行医学科学实验,就要应用实验动物,后者不可能为其它东西(电脑)所完全取代, “ 动物保护主义”对实验动物科技的态度,失之偏激。
¡ 尽管研制了一系列非动物性模型,然而,这类模型毕竟不可能完全模拟复杂的人类或动物的机体,在人类与动物的保健和福利的持续发展过程中,还仍然需要使用活体动物¡ 科学的、有效的、合理的使用动物,尽量减少实验过程中对动物造成的不必要的痛苦和伤害,这些要求是科学的、合理的,它既是动物实验3R发展的方向也是实验动物科学发展的趋势4实验动物与实验用动物实验用动物 实验动物,野生动物,经济动物实验动物 以科研或检验为目的,具有明确遗传背景,携带的微生物清楚的动物及相关材料 基本要求:具有类似的遗传背景;严格控制传染病;个体大小,符合实验要求;易于饲养、观察,并有规范饲养要求5必需氨基酸与非必需氨基酸:氨基酸又分为必需氨基酸和非必需氨基酸两大类前者是动物体内不能合成或合成速度及数量不能满足正常生长需要,必须由饲料中供给的氨基酸;后者是体内能合成,不需要由饲料中供给的氨基酸不同动物对必需氨基酸需求的种类存在差异7比较以下实验动物设施的优缺点:隔离设施,屛障设施,普通设施开放系统 :通常为单走廊专用房舍,采用自然通风或设有排风装置,有防虫、防鼠设施,要求笼具和垫料消毒、使用无污染的饲料,人员进出有一定的防疫措施。
这类设施仅适用于普通级动物该系统通常分为三个区域:前区,包括检疫室、办公室、休息室等;控制区,包括动物饲育室、或动物实验室、清洁走廊、清洁物品储存室等;后勤处理室,包括污染走廊、洗刷消毒室、污物处理设施等人员、动物和物品原则上按:前区--控制区--后勤处理区的走向运行亚屏障系统 :又称为清洁级屏障系统,用于清洁级动物的饲育一般设双走廊,也有用层流架作清洁级屏障系统其设施的结构及设备配置要求都与屏障系统大体相同,只是空气洁净度只要求达到10万级,管理上要求稍低于屏障系统,故称之为亚屏障系统也分三个区域,即清洁区、污染区和外部区清洁区包括动物饲育室或实验室、清洁走廊、清洁准备室、清洁物品储存室、检疫室等;污染区包括污染走廊、洗刷消毒室等;外部区包括接受动物室、饲料加工室、库房、更衣淋浴间、办公室、值班室、机房、焚烧炉等结构通常是双走廊,凡进入清洁区的人员、动物、和物品,甚至空气和水都要经过相应的处理,保证该区域不受微生物的侵染进入清洁区的人员、动物和物品要分别遵循一定的运行路线:人员:更衣--淋浴--更衣--清洁走廊--饲养室或动物实验室--污染走廊--洗刷消毒室--更衣--外部区域 物品:包装--高压消毒(已包装消毒的可经传递窗,清结笼具经有消毒液的渡槽)--清结准备室--清洁物品储存室--饲养室或动物实验室--(污物经包装处理)污染走廊--外部区域。
动物:动物(带专用包装)--传递窗--检疫室--清洁走廊--饲育室或实验室--(实验后或生产供应)--(经包装)污染走廊--外部区域 屏障系统 :主要是用于SPF级动物的饲育有正压屏障构造、负压屏障构造(生物安全屏障系统)也有用层流架(正压/负压)或隔离器作SPF级屏障系统屏障系统设施,要求与外界隔离,空气经三级过滤净化后才进入屏障设施之内,空气洁净度为10,000级除生物安全屏障系统为负压以外,通常应保持为正压,且不低于20--50Pa;出风口设有防空气倒流装置屏障系统设有清洁和污染走廊,进入系统的笼具、饲料、饮水、垫料、器械等一切物品都要经过严格的消毒灭菌,人员进入要经淋浴、更衣,使用专用的服装,进入的动物要有专用包装,也经严格的消毒处理系统内的人员、物品和空气等采用单向固定的流通路线,有呼吸系统疾病和皮肤病的人员不能进入系统内结构要求和进入系统内的人、动物和物品的运行等与亚屏障系统基本相同,但要求更为严格隔离系统 :主要设备是隔离器,分有正压和负压隔离器隔离器及其辅助装置共同组成的隔离系统,用于饲养SPF动物、无菌动物和悉生动物隔离器可置于亚屏障系统或开放系统内运转,如在开放系统内,则要严格控制系统内环境的温、湿度。
操作时,工作人员只能通过隔离器上的橡胶手套来进行饲养或实验物品是通过包装消毒后,由灭菌渡舱或传递窗传入;动物是经由无菌剖腹产的方法进入;进入隔离器的空气,应经高效过滤,保证隔离器内空气洁净度达100级,无菌并维持正压状态根据实验需要也可维持负压状态,但需要配置空气排放装置,保证空气排放符合标准另外,对实验动物设施的房舍设施的建设,如:地面、门窗、墙壁、天花板、走廊及空气净化调节设备与送排风系统等都有详细的要求,例如:地面要求平而不滑,一般不设排水口;墙壁要求保温和隔音,墙涂料耐酸碱,易于消毒清洗;有压力梯度的系统,门应开向压力高的一侧等总之,设施建设是从质量控制要求的角度,考虑到操作和成本等因素来提出相应的要求9指出以下近交小鼠名称中那些是正确的,那些是不正确的,不正确的请纠正并简述其理由 C57, 615, B6, DBA, BALB/c, AK,DBA/2B6F1,DBA正确,因为符合近交系命名法中的“一般均用一个或几个大写英文字母表示”的原则;615正确,虽然是非正规的命名,但是由于其已广泛为国际所共知,则保留沿用;C57错误,属于品系名称未书写完全,因为C57这个缩写可能意味着七、八个特征不同的品系,并且不同的品系又可以包含几个不同特征的亚系,因此要确切的书写,如C57BL/6N;B6正确,是品系名C57BL/6常用的小鼠近交系名称缩写;AK正确,是品系名AKR常用的小鼠近交系名称缩写;BALB/c正确,是小鼠近交系的品系名,符合命名原则,其缩写为C;DBA/2B6F1正确,表示此亚系是第1代时引入的。
10谈谈实验动物学与你所在专业的关系11兔的胸腔结构和颈部神经与其它动物比较有何不同?利用这一特点可做哪些实验?(1)家兔的胸腔内构造与其它动物不同胸腔由纵膈分为互不相通的左右两部分肺被肋胸膜和肺胸膜隔开,心脏又被心包胸膜隔开因此,开胸后打开心包胸膜暴露心脏进行实验操作时,动物不需作人工呼吸其它动物如犬、猫等开胸后一定要作人工呼吸才能进行心脏操作2)家兔颈部有减压神经独立分支,和迷走神经、交感神经完全分开而人、马、牛、猪、狗、猫,此神经并不单独行走而是行走于迷走、交感干或迷走神经之中13在某一小鼠群中,一个偶然的机会发现了m突变基因,该基因是个隐性致病基因由于它的突变使小鼠的某一个酶蛋白(m)发生了结构改变, 进而导致了小鼠的一种疾病,这种疾病不论是从临床上,还是从实验室检查上,与人类的相应疾病类似,可以作为人类疾病极有价值甚至是“革命”性的动物模型但这个基因(m)原发在封闭群小鼠中,由于遗传背景复杂等原因,使每次实验结果不稳定,重复性不好此外,这种基因的突变使雌性小鼠在纯合子状况下,母性不好请设计一种方案,解决这些问题,并论述在解决这一问题时应注意的要点¡ 用实验方法将外源性基因或特定DNA片断,导入到动物的受精卵内,进而改造原来动物的生物学特性。
¡ 由于打破了物种之间的生殖隔离,找到了一种按照人们意愿定向改造哺乳类动物遗传性状的有效途径;开辟了一条用四维体系研究特定基因的新手段 15人类疾病动物模型分为哪几类,简述其主要特征怎样用比较医学的观点和方法来评估动物模型一)按产生原因分类1、诱发性动物模型(experimental animal model) 又称为实验性动物模型,指通过使用物理、化学、生物等致病手段,人为制造的疾病模型 优点:制作方法简便,实验条件比较简单,其他因素容易控制,短时间内可大量复制 缺点:诱发的疾病模型与自然产生的疾病在某些方面有所不同而且有些人类疾病不能用人工方法诱发出来物理因素诱发:如手术致骨折、放射线致免疫抑制化学因素诱发:如高油脂饲料致兔动脉粥样硬化、化学毒物中毒生物因素诱发:如微生物感染复合因素诱发:如豚鼠慢支用致病菌加寒冷或加SO2生物技术制作的动物模型:如嵌合体动物、转基因动物、克隆动物等2、自发性动物模型指不加任何人工诱发,在自然条件下动物自然产生的疾病,或者由于基因突变的异常表现,通过遗传育种保留下来的动物疾病模型以肿瘤遗传性疾病居多优点:在一定程度上减少了人为的因素,更接近自然的人类疾病。
缺点:种类有限,疾病动物饲养条件要求高,发病率低,发病时间长自发肿瘤模型因动物种系、品种不同,其肿瘤所发生的类型和发病机制有差异自发性动物模型应用价值很高,特别是在遗传性疾病、免疫缺陷病、肿瘤等的研究上得到了广泛应用近几十年来科学界十分重视自发性动物模型的开发 如与人类心脏病相似的加拿大犬;与儿童碳水化合物、氨基酸代谢失调相似的猫;自发性高血压和脑中风大鼠;青光眼兔;自发性糖尿病地鼠;肥胖症小鼠;裸鼠等等3、抗疾病型动物模型是指特定的疾病不会在某种动物身上发生因此可借以探讨为何该种动物对该疾病有天然的抵抗力 如哺乳类动物均感染血吸虫病,而洞庭湖流域的东方田鼠却不能复制血吸虫病,故可用于血吸虫感染和抗病的研究4、生物医学动物模型是指利用健康正常的动物生物学特征来提供人类疾病相似表现的。