L061 红豆杉多糖的分离、纯化与初步分析 L061 红豆杉多糖的分离、纯化与初步分析 郑宝华 吴绵斌 （浙江大学材化学院生物工程所，杭州 310027） 摘 要 摘 要 经水提醇沉法获得粗多糖， 经活性炭脱色后先后用DEAE-Sepharose FF和Sephacry S-100分离 分离组分用 GPC 和红外光谱分析，知其 Mw=3143.7，含羰基、羟基等官能团 关键词 关键词 红豆杉 多糖 分离纯化 理化性质 THE SEPARATION、、PURIFICATION AND ANALYZE OF POLYSACCHARIDES FROM TAXUS ZHENG baohua and WU mianbin (Institute of Bioengineering, Zhejiang University, Hangzhou 310027, China) Abstract A polysaccharide was isolated from the branches and leaves of Taxus chinensis Rehd.var.maivei with the use of DEAE-Sepharose FF and Sephacry S-100. The structure and the molecular weight of the new compound was elucidated by spectroscopic techniques and GPC. Keywords Taxus chinensis Rehd.var.maivei, polysaccharide, purification 引 言 红豆杉是一种珍贵的药用植物资源， 目前红豆杉抗癌的研究主要集中于对紫杉烷类化合 物特别是紫杉醇的研究。
最近的研究发现红豆杉中除紫杉醇外， 红豆杉多糖对癌症也有一定 的辅助治疗作用 为促进对红豆杉的综合利用， 因此有必要对红豆杉多糖进行进一步的研究 1 材料和方法 1.1 材料材料 红豆杉（由桐庐红豆杉种植基地提供） 、乙醇（分析纯） 、石油醚（分析纯） 、葡聚糖标 样（分子量为 1000、5000、1 万、4 万、48 万）、浓硫酸(分析纯，98%)、蒽酮（分析纯） 1.2 实验方法实验方法 1.2.1 红豆杉多糖的初步提取 红豆杉经石油醚脱脂，水煮得水提液加入乙醇，静置，过滤得粗糖浸膏浸膏水溶， 处理后进行纳滤、冻干 1.2.3 红豆杉多糖的活性炭脱色 将粗多糖溶液进行全波段扫描，选择在 400nm 处测量色素吸光度 20%的醋酸溶液浸泡活性炭，煮沸 30min，过滤并用清水洗涤至中性即得激活活性炭 然后从不同用量、温度、吸附时间进行单因素优化来考察活性炭脱色的最佳条件 1.2.4 DEAE-Sepharose FF 阴离子柱交换层析 将脱色后的多糖溶液过 DEAE—Sepharose FF 分离，用 1mol/L NaCl 溶液洗脱洗脱液 用自动收集器收集（2ml/管） ，作洗脱曲线。
1.2.5 Sephacryl S-100 凝胶过滤层析 将Sephacryl S-100凝胶颗粒溶胀， 然后装柱、 平衡 加样后用去Nacl洗脱， 流速1.0ml/min, 自动收集器收集（1ml/管） ，作洗脱曲线，合并主峰并冻干得白色粉末 1.3 分析方法分析方法 1.3.1 多糖含量的测定 按照文献方法[1]制作标准曲线，并以标准曲线计算多糖含量 1.3.2 GPC 检测 检测条件：柱温为 25ºС；流动相为双蒸水；流速为 0.6 mL/min；进样量为 20μL 1.3. 3 红外检测 取干燥精多糖 1mg，与适量干燥 KBr 粉末混后在研钵中研磨至极细，经压片后，测定 红外光谱 2 结果与讨论 2.1 红豆杉粗多糖物理性质红豆杉粗多糖物理性质 红豆杉粗多糖冻干后呈絮状，颜色为红褐色溶于水，易溶于热水，不溶于有机溶剂， 无味经实验做标准曲线，测得粗多糖含糖量为 75.8% 2.2 活性炭最佳脱色条件活性炭最佳脱色条件 2.2.1 全波段扫描图谱 由图 1 可知，在 400nm 处色素有最大吸光度，故选择在 400nm 处测量色素 2.2.2 最佳脱色条件 经单因素优化，得起最佳脱色条件为：温度 70ºC；活性炭含量 3%；时间 60min 2.3 DEAE-Sepharose FF 阴离子柱交换层析 阴离子柱交换层析 收集图 2 中第二个峰（30min-60min） ，然后用 Sephacryl S-100 凝胶过滤层析分析。
-0.5 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 01530456075 时间（min） 图2 DEAE-Sepharose洗脱曲线 戏光值（Abs） -0.2 -0.1 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 -101030507090110 时间（min） 图3 Sephacry1 s-100洗脱曲线 吸光值（Abs） 2.4 Sephacryl S-100 凝胶过滤层析 凝胶过滤层析 收集图 3 中的第一个峰（20min-40min） ，冻干得组分 A 2.5 GPC 检测检测 组分 A 的 GPC 图谱（图 4）： 图4 组分A的GPC 图谱 通过与葡聚糖标样（分子量为 1000、5000、1 万、4 万、48 万）进行对照，经计算得组 分 A 的分子量为 Mw=3143.7 2.6 红外分析红外分析 红外吸收峰及与其对应的基团： 3425.18： 3425.18： -OH 的吸收峰；2925.79：2925.79：-CH2- 的反对衬伸缩峰；2859.13：2859.13：-CH2- 的对衬 伸缩峰；1576.25：；1576.25：羰基的吸收峰；1416.88：1416.88：-CH3 的反对称弯曲振动；1384.68：1384.68：-CH3 的 对称弯曲振动,异丙基和叔丁基的吸收峰；1122.39：1122.39：C-O 单键伸缩振动；C-C 键的吸收峰； 1027.89：1027.89：C-O 单键伸缩振动。
因此可以判断含有： 羰基、羟基、亚甲基、甲基、碳碳单键、叔丁基、异丙基等基团 3 结论 分离所得红豆杉多糖分子量 Mw=3143.7，其纯度很高，含有羰基、羟基、亚甲基、甲基、 碳碳单键、叔丁基、异丙基等官能团 参参 考考 文文 献献： 1 张惟杰等 主编 糖复合生化研究技术 1994 年版 浙江：浙江大学出版社 2 Magdalen Lopez-barajas, Lopez-Tamames,, Susana Buxaderas, Improved size-exclusion high-performance liquid chromatographic method for the simple analysis of grape juice and wine polysaccharides, Journal of chromatography,A, 1998, 823:339-347. 3 J.warrand P.Michaud，L.Pichon. Large-Scale Purification of Water-SolublePolysaccharides from Flaxseed Mucilage and Isolation of a New Anionic Polymer. Chromatographia, 2003, 58, September(N0.5/6). 。