文件名称液相色谱仪校验规程文件编号SOPQC-JY013-01替代原文件编号SOPQM2-027-5-2起草人日期发放部门：审核人日期质量控制部、质量批准人日期保证部、办公室制订部门质量控制部生效日期变更记载：增加附件，校验记录格式1 流速准确度校验1.1 仪器及试剂1.1.1仪器 秒表，50mL容量瓶，25mL容量瓶1.1.2 试剂 水1.2 校验过程连接泵和管道，接通电源，设置流速2.0ml/min,开启泵，同时在流路出口处用50 ml 容量瓶进行收集，至刻度，读取收集时间，计算流速，误差应不超土 0.02ml/min再次设置流速1.0ml/min,开启泵，同时在流路出口处用25ml容量瓶进行收集，至 刻度，读取收集时间，计算流速，误差应不超过土 0.02ml/min2 温度准确度的校验2.1 仪器及试剂2.1.1 仪器 标准铂电阻温度计2.1.2 试剂 甲醇2.2 校验过程设定柱温箱温度40°C，待柱温箱温度稳定后，每间隔1分钟测定一次柱温箱温度, 并记录下变化情况判断标准，连续测定6个点，任一点温度误差不得超过±1°C，报 告以6点中最大误差报告3 波长准确度校验3.1 仪器及试剂3.1.1 仪器 50ml 容量瓶，分析天平（十万分之一），液相色谱仪3.1.2 试剂 氢化可的松标准品 甲醇：水（1:1）3.2 校验过程3.2.1 校验溶液3.2.1.1精密称取氢化可的松标准品10mg，用甲醇：水（1:1）溶液溶解并稀释至 50ml，精密吸取5.0ml于50mL容量瓶中，用甲醇：水（1:1 ）溶液稀释至刻度备用。
3.2.1.2 校验过程用甲醇：水（1:1）为流动相（不接色谱柱），流速1.0ml/min,紫外检测器Waters2487, 在仪器冲洗平衡后，将装有氢化可的松溶液的1cm石英比色皿放入Waters2487的扫描 池，设定扫描速度50nm/min,扫描范围200nm-400nm,按SCAN扫描，并同时记录下 扫描图谱，最大吸收波长应为242nm,如有误差，误差不得超过±2nm4 定量定性重复性校验4.1 仪器及试剂4.1.1仪器 液相色谱仪，25ml、50ml容量瓶，10》l定量管，分析天平（十万分 之一）4.1.2 试剂 氢化可的松标准品，氢化可的松含量用流动相，甲醇：水（1:1）溶液4.2 校验过程精密称取氢化可的松标准品25mg于25ml容量瓶中，用甲醇：水（1:1）溶液溶解 并稀释至刻度，精密吸取2.0ml于50ml容量瓶中并用甲醇：水（1:1）溶液稀释至刻度， 设定波长254nm,氢化可的松含量用流动相洗脱，流速1.0ml/min,准确吸取10》l连续 进样5次，记录峰响应及保留时间，峰响应RSD应不超过2.0%,保留时间RSD应不超 过 1.0%5 检测器线性校验5.1 仪器及试剂5.1.1 仪器 液相色谱仪， 100ml、 50ml 容量瓶， 10ul 定量管， 2ml， 5ml， 10ml， 15ml， 20ml 移液管，分析天平（十万分之一）5.1.2试剂 氢化可的松标准品，氢化可的松含量用流动相，甲醇：水（1:1）溶液。
5.2 校验过程精密称取氢化可的松标准品25mg于100ml容量瓶中，用甲醇：水（1:1）溶液溶解 并稀释至刻度，备用，并分别吸取2.0ml, 5.0ml, 10.0ml, 15.0ml, 20.0ml，置50ml容 量瓶，甲醇：水（1:1）溶液稀释至刻度，配制成 0.010mg/ml， 0.025mg/ml， 0.050mg/ml， 0.075mg/ml, 0.100mg/ml 的浓度设定波长254nm,氢化可的松含量用流动相洗脱，流速1.0ml/min,在仪器稳定状 态下，各溶液进样10p l,记录各浓度下氢化可的松的峰响应，并计算相关系数，应不 小于 0.99956 进样器线性校验6.1 仪器及试剂6.1.1 仪器液相色谱仪，25ml, 50ml容量瓶，2mL移液管,2》l, 5p l, 10》l, 20 p l, 50》l定量管6.1.2 试剂 氢化可的松标准品，氢化可的松含量用流动相，甲醇：水（1:1）溶液6.2 校验溶液精密称取氢化可的松标准品25mg用甲醇：水（1:1）溶液溶解并稀释至25ml，精 密吸取2.0ml于50ml容量瓶中，用甲醇：水（1:1）溶液稀释至刻度备用。
6.3 校验设定波长254nm,氢化可的松含量流动相洗脱，流速1.0ml/min,在仪器稳定状态 下，分别更换2》l, 5》l, 10》l, 20》l, 50》l定量管测定样品，并分别记录峰响应， 计算相关系数，应不小于 0.99957 残留量取定量定性重复性项下的氢化可的松标准品溶液，进样10ul,记录峰响应，用同一 注射器吸取甲醇：水（1:1）溶液清洗进样器5次，再吸取10》l甲醇:水（1:1）溶液进 样，如有氢化可的松峰出现,记录峰响应，并计算残留量，应不大于 0.2%8 最低检测限配制不同浓度的氢化可的松溶液，分别吸取10》l进样，记录峰响应以S/N23, 计算最低检测限，应不大于5.0X10-10go9 校验周期：每年校验一次10 附件10.1 记录格式液相色谱仪校验记录1、流速准确度校验1.1 仪器及试剂1.1.1仪器 秒表，50ml容量瓶，25ml容量瓶1.1.2 试剂 水1.2 校验过程50 ml容量瓶进行收集，至刻度，读取收集时间，计算流速，误差应不超土0.02ml/min 再次设置流速1.0ml/min，开启泵，同时在流路出口处用25ml容量瓶进行收集，至 刻度，读取收集时间，计算流速，误差应不超过土 0.02ml/min。
设定值(ml/min)收集体积(ml)实测时间(min)实测流速(ml/min)误差(ml/min)2.050.01.025.02、温度准确度的校验2.1 仪器及试剂2.1.1 仪器 标准铂电阻温度计2.1.2 试剂 甲醇2.2 校验过程设定柱温箱温度40°C，待柱温箱温度稳定后，每间隔1分钟测定一次柱温箱温度, 并记录下变化情况判断标准，连续测定6个点，任一点温度误差不得超过±1°C，报 告以 6 点中最大点误差报告间隔时间t(min)设定值(°C)实测值(°C)误差(°C)140234563、波长准确度校验3.1 仪器及试剂3.1.1仪器50ml容量瓶，分析天平(十万之一)，液相色谱仪3.1.2 试剂 氢化可的松标准品 甲醇：水(1:1)3.2校验过程3.2.1 检验溶液3.2.1.1精密称取氢化可的松标准品10mg，用甲醇：水（1:1）溶液溶解并稀释至 50ml，精密吸取5.0ml于50ml容量瓶中，用甲醇：水（1:1）溶液溶解稀释至刻度备用3.2.1.2 校验过程用甲醇：水（1:1）为流动相（不接色谱柱），流速1.0ml/min,紫外检测器Waters2487, 在仪器冲洗平衡后，将装有氢化可松溶液的1cm石英比色皿放入Waters2487的扫描池， 设定扫描速度50nm/min，扫描范围200nm-400nm，按SCAN扫描，并同时记录下扫描 图谱，最大吸收波长应为242nm。
如有误差，误差不得超过±2nm氢化可的松标准品称重量： g标准值（nm）实测值（nm）误差（nm）2424、定量定性重复性校验4.1 仪器及试剂4.1.1仪器 液相色谱仪，25ml、50ml容量瓶，10》l定量管，分析天平（十万分 之一）4.1.2 试剂 氢化可的松标准品，氢化可的松含量用流动相，甲醇：水（1:1）溶液4.2 校验过程精密称取氢化可的松标准品25mg，于25ml容量瓶中，用甲醇：水（1:1）溶液溶 解并稀释至刻度，精密吸取2.0ml于50ml容量瓶中并用甲醇：水（1:1）溶液稀释至刻 度，设定波长254nm，氢化可的松含量用流动相洗脱，流速1.0ml/min，准确吸取10》l 连续进样5次，记录峰响应及保留时间，峰响应RSD应不超过2.0%，保留时间RSD应 不超过 1.0%氢化可的松标准品称重量： g进样次数（#）峰面积保留时间（min）峰面积RSD%保留时间RSD%123455、检测器线性校验5.1 仪器及试剂5.1.1 仪器 液相色谱仪，100ml、50ml容量瓶，10 m l定量管，2ml, 5ml, 10ml, 15ml， 20ml 移液管，分析天平（十万分之一）。
5.1.2 试剂，氢化可的松标准品，氢化可的松含量用流动相，甲醇：水（1:1）溶液5.2 校验过程精密称取氢化可的松标准品25mg于100ml容量瓶中，用甲醇：水（1:1）溶液溶解 并稀释至刻度，备用，并分别吸取2.0ml, 5.0ml，10.0ml，15.0ml，20.0ml，置50ml容 量瓶，用甲醇：水（1:1）溶液稀释至刻度，配制成 0.010mg/ml， 0.025mg/ml， 0.050mg/ml， 0.075mg/ml, 0.100mg/ml 的浓度设定波长254nm,氢化可的松含量用流动相洗脱，流速1.0ml/min,在仪器稳定状 态下，各溶液进样10ul,记录各浓度下氢化可的松的峰响应，并计算相关系数，应不小 于 0.9995氢化可的松标准品称重量： g浓度(mg/ml)峰面积（平均）相关系数r0.0100.0250.0500.0750.1006、进样器线性校验6.1 仪器及试剂6.1.1 仪器 液相色谱仪，25ml, 50ml容量瓶，2ml移液管，2ul, 5ul, 10ul, 20ul, 50ul 定量管6.1.2 试剂 氢化可的松标准品，氢化可的松含量用流动相，甲醇：水（1:1）溶液。
6.2 校验溶液精密称取氢化可的松标准品25mg用甲醇：水（1:1）溶液溶解并稀释至25ml，精 密吸取2.0ml于50ml容量瓶中，用甲醇：水（1:1）溶液稀释至刻度备用6.3 校验设定波长254nm,氢化可的松含量用流动相洗脱，流速1.0ml/min,在仪器稳定状 态下，分别更换2p 1，5p 1，10p 1，20p 1，50》l定量管测定样品，并分别记录峰响应， 计算相关系数，应不小于 0.9995氢化可的松标准品称重量：定量管体积（》1）峰面积（平均）tn *条如251020507、残留量取定量定性重复性项下的氢化可的松标准品溶液，进样 10》 1，记录峰响应，用同 一注射器吸取甲醇：水（1:1）溶液清洗进样器 5 次，再吸取 10》 1甲醇：水（1:1）溶 液进样，如有氢化可的松峰出现，记录峰响应，并计算残留量，应不大于 0.2%标准品溶液主峰面积进样器残留主峰面积残留量（％）8、最低检测限配制不同浓度的氢化可的松溶液，分别吸取10》1进样，记录峰响应以S/N23, 计算最低检测限，应不大于5.0X10-Kg配制浓度：进样量：最低检测限为： g校验人 核验人 。