单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,*,,*,,,,,,,,,,单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,*,,*,电喷雾质谱,ESI-MS,姚鋆,,2024年10月12日,,标准蛋白质组学流程,电喷雾是一种离子化方法，可以用作质谱仪的离子源,,质谱仪擅长测定生物大分子,,分子量,,多肽序列,,翻译后修饰,,历史,1914,年 第一次详细地描述,,Zeleny,,1964-1969,年 深入地研究,,Taylor,,Dole,,1989,年 用于生物大分子,,2002,年诺贝尔化学奖（,1/4,）,Fenn,,1996,年 纳升级电喷雾（,nanoESI,）,,Mann,喷雾,参数：电压、溶液组成、相对位置,谱图,Myoglobin,,多电荷使得样品谱图复杂,质荷比,mass-to-charge ratio,原理,电喷雾的原理有两种主流解释,,库仑爆炸,,离子蒸发,,核心是,去溶剂,nanoESI,流速,,小于,500nl/min,,使用拉尖的石英或不锈钢毛细管,,末端小于,30,m,m,,电压,,小于,2500V,,没有辅助气或者极低的辅助气,,常与,nanoHPLC,或者毛细管电泳（,CE,）联用,nanoHPLC,电喷雾产生的质谱信号强度与被测物质的浓度相关,（,nano,）,HPLC,与质谱仪联用,使用电喷雾的,ORBITRAP,质谱仪,ORBITRAP,质谱仪能精确地测定质荷比,,CID,、,PQD,、,ETD,、,HCD,都能够将多肽碎裂成碎片离子,,速度与精度的平衡,CID, PQD & ETD,LTQ,detector,ORBITRAP,detector,HCD,ORBITRAP,检测器,精确测定质荷比,,ppm,级,,,,,,,,LTQ,检测器,较精确地测定质荷比,,擅长多肽的碎裂,,,,（,nano,）,HPLC,联用质谱仪测定多肽,HPLC,用反相模式,,C8,、,C12,、,C18,（,ODS,）,,0.1%TFA,、,0.1%FA,、,0.5%Hac,,蛋白质组学大量使用胰酶,trypsin,,N-term,、,K,、,R,,分子量,400-6000,串级质谱,时间串联,,离子阱,,,,,空间串联,,三重四极杆,ORBITRAP,从本质上来说是时间串联,,将生成第一张谱图的任务交给,ORBITRAP,检测器,多肽的碎裂,a/x,、,b/y,、,c/z,某四肽的碎裂,多肽碎裂的谱图,这是一张用,LTQ,检测器采集的,CID,碎裂谱图,谱图的解析,结合第一张谱图，主要信号峰都得到归属,翻译后修饰,第一张谱图,,,D,Mass,,,第二张谱图,42,42,42,42,42,42,42,42,42,42,More to go,，,but not today,质谱仪可以定量地测定蛋白质,,质谱仪的硬件构成,,质谱仪的软件操作、方法的建立,,（,nano,）,UHPLC,、,CE,联用质谱仪,,谱图解析、蛋白质定量自动化软件,,,,新西兰爱恩思奶粉 鲍丽华涹,。