细菌的荚膜染色、 芽孢染色及其运动性观察实验报告马子午生命科学学院食品科学与工程专业 14101 班 02 号1. 引言1.1实验目的学习荚膜染色技术，观察和分辨细菌的荚膜形态，进一步理解细菌细胞的特殊结构；了解细菌芽孢染色的原理意义，掌握芽孢染色的方法学习水浸片的制作方法，观察细菌的运动1.2实验原理芽孢染色法： 芽孢具有厚而致密的壁，通透性低， 对各种不利因素如高温、冷冻、射线、干燥、 化学药品和染料等具有很强的抵抗力因此，当用一般染色方法染色时，只能使菌体着色，芽孢不易着色（芽孢呈透明）或仅显很淡的颜色威力使芽孢着色便于观察，需采用特殊染色法——芽孢染色法先用一弱碱性染料，如孔雀绿或碱性品红在加热条件在进行长时间染色， 此染料不仅可以进入菌体，也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经睡洗脱掉，而进入芽孢的染料则难以透出若再用复染液 （如番红染液） 或衬托染液 （如黑色素液） 处理，芽孢和菌体就呈现不同的颜色，借此将芽孢与菌体区别开荚膜染色法：荚膜的主要成分是多糖，多糖与染料亲和力差，不易着色，但荚膜通透性较好， 某些染料可通过荚膜使菌体着色，正因如此， 染色后呈浅色或无色的菌体就形成了一个明显的色差， 荚膜染色常采用负染法，即将背景染成淡蓝色，此法使菌体和背景显色以衬托无色的荚膜。
细菌的运动性观察：细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定的主要特征之一，因鞭毛较细，在普通光学显微镜下不易观察，但有鞭毛的细菌在液体中能借助鞭毛的旋转和摆动使菌体能定向的运动，可以借此判断细菌是否有鞭毛2. 材料与方法2.1材料与试剂枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） ，孔雀绿，番红染液，无菌水，6%的葡萄糖，胶质芽孢杆菌（ Bacillus mucilaginosus ） ，黑色素液，甲醇，甲基紫染液，香柏油，二甲苯2.2仪器与设备显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯，接种环，镊子，试管，凹玻片，擦镜纸，吸水纸2.3方法与步骤2.3.1 细菌的芽孢染色法取一支试管，滴一滴无菌水，用接种环取2~3 环枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis ）充分混合成菌悬液，再滴加两滴孔雀绿，沸水浴15~20 分钟后用接种环取3~5 环菌悬液涂抹在载玻片上，自然干燥，固定，冷却后水洗至水流无色，用吸水纸吸干后滴加番红染液复染5分钟，用吸水纸吸干多余染料，在显微镜下镜检 2.3.2 细菌的荚膜染色法滴一滴6%的葡萄糖溶液于洁净载玻片，用接种环取2~3 环胶质芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus）涂抹在葡萄糖溶液中，于涂片的一端滴少许黑色素液，用另外一张载玻片以45 度角顺势将黑色素液向涂片一端滑动，使黑色素成为一均匀涂层后自然干燥。
滴加甲醇 固定 1 分钟后倾去多余甲醇，晾干， 滴加甲基紫染液染色1~2 分钟， 水洗晾干， 在显微镜下进行镜检 2.3.3 细菌运动性的观察取一片干净的凹玻片，在凹室内滴加无菌水，在用接种环取2~3 环枯草芽孢杆菌（ Bacillus subtilis ）涂抹在无菌水中，盖上盖玻片，将玻片置于显微镜下，在暗视野下用40 倍物镜观察3. 结果与分析3.1细菌的荚膜染色法100x ，胶质芽孢杆菌荚膜染色3.2细菌的芽孢染色法：背景为紫色中间显示显色或无色的透明 圈 为 胶 质 芽 孢 杆 菌（ B.mucilaginosus） 的荚膜被 染 成 红 色 的 枯 草 芽 孢 杆 菌B.subtilis被 染 成 绿 色 的 枯 草 芽 孢 杆 菌B.subtilis100x，枯草芽孢杆菌芽孢染色3.3细菌的运动性观察40x，枯草芽孢杆菌运动性观察4. 讨论与结论4.1 注意事项1）所有的细菌接种都必须在酒精灯的火焰上方完成2）细菌芽孢染色实验中，进行沸水浴时，要注意不能让试管内的菌悬液干涸3）使用油镜后要用擦镜纸蘸取二甲苯对物镜头进行清洗4.2思考芽孢染色加热的目的是因为芽孢壁厚，透性低， 不易着色， 一般染色只能使菌体着色而芽孢不着色，加热可促进芽孢着色。
4.3结论1）细菌的芽孢染色中，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）会被染成红色，芽孢被染成绿在较暗的视野下，观察到有亮光快速地窜动色，而为释放出芽孢的枯草芽孢杆菌会被染成一半红一半绿2）细胞的荚膜染色中，采用负染法，背景和细胞都较暗，胶质芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus）周围呈现出明亮的透明圈，即荚膜3）细菌运动性观察的实验中，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）在无菌水中缓缓移动，说明枯草芽孢杆菌具有鞭毛，并能借助鞭毛的旋转及摆动完成定向运动参考文献[1] 樊明涛，赵春燕，朱丽霞.食品微生物学实验[M]. 北京 :科学出版社,2015.2,27--31.。
