Four short words sum up what has lifted most successful individuals above the crowd: a little bit more.------------------------------------------author------------------------------------------date紫外分光光度法测定苯甲酸含量紫外分光光度法测定苯甲酸含量紫外分光光度法测定苯甲酸含量一、实验目的1．了解紫外分光光度法基本原理并学会紫外分光光度计的使用操作2．掌握吸收标准曲线的绘制方法及样品含量的测定方法二、基本原理研究物质在紫外、可见光区的分子吸收光谱的分析方法称为紫外-可见分光光度法紫外—可见分光光度法是利用某些物质的分子吸收200～800 nm光谱区的辐射来进行分析测定的方法这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，广泛用于无机和有机物质的定性和定量测定 物质对辐射的吸收遵循朗伯-比尔定律当一束平行的单色光通过溶液时，溶液的吸光度 (A) 与溶液的浓度 (C) 和厚度 (b) 的乘积成正比，这个定律通常称为朗伯－比尔定律。
它是分光光度法定量分析的依据，适用于能量不同的各种电磁辐射，也适用于稀溶液、气体和均质固体含有苯环和共轭双键的有机化合物在紫外区有特征吸收未知结构不同对紫外及可见光的吸收曲线不同苯甲酸及其盐对紫外光有选择性吸收，其吸收光谱的最大吸收波长在225nm左右 三、仪器与试剂1．仪器：UV-2401PC 紫外可见分光光度计 日本岛津1cm石英比色皿：2个；容量瓶：50mL，11只；500ml，1只；250ml，1只；移液管：10ml、20ml、 25mL 各 1支；2．试剂①1mg/ml苯甲酸储备液：称取0.5克苯甲酸，加水加热溶解，用水稀释至500ml，摇匀后备用②取苯甲酸储备液25.00ml，置于250ml容量瓶中，用水稀释至250ml，摇匀后备用此标准溶液含苯甲酸100μg/ml四、实验步骤1．标准溶液的配制取50mL容量瓶10只，分别加入100μg/ml的苯甲酸溶液1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00 ml、5.00 ml、6.00 ml、7.00ml、10.00 ml、20.00 ml、30.00 ml，用去离子水稀释至刻度，摇匀后备用2．测定波长的确定 测定条件：氢灯，1cm石英比色皿，空白溶液为参比，以苯甲酸标准溶液为测定溶液。
① 开启电脑和紫外分光光度仪，启动软件进行检测设置参数：扫描波长从210nm到240nm止，狭缝宽度为1.0nm，吸光度记录范围从0到1.0②将参比池和样品池各放一只1cm石英比色皿，比色皿中装空白溶液，然后进行基线调零③以空白溶液为参比，4.00 ml的苯甲酸标准溶液为测定溶液，开始扫描以苯甲酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收标准曲线扫描得到最大吸收波长λmax确定为测定波长3、 吸收标准曲线的绘制 用1cm石英比色皿，以空白溶液为参比，测定1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00 ml、5.00 ml、6.00 ml、7.00ml、10.00 ml、20.00 ml、30.00 ml苯甲酸标准溶液在λmax处的吸光度，以及未知样品的吸光度以苯甲酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收标准曲线根据绘制的吸收标准曲线，求取标准曲线线性回归方程五、 实验记录、数据处理及结果计算实验序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11苯甲酸标准溶液体积（100μg/ml）1 2 3 4 5 6 7 10 20 30 未知样品苯甲酸含量（μg/ml）由标曲求得Aλmax 标准曲线线性回归方程Conc=K1A+Ko K1=？ K0=-？ 六、 未知浓度样品的测定 用1cm石英比色皿，以空白溶液为参比，在相同的条件下测定未知溶液λmax处的吸光度，并根据吸收标准曲线回归方程或者吸收标准曲线，求取测得样品吸光度所对应的苯甲酸浓度。
七、思考1．本实验中，能否用普通光学玻璃比色皿进行测定？为什么？2．若测得的样品吸光度高于吸收标准曲线，能否将标准曲线外延求取样品的苯甲酸浓度？--------------------------------------------------。