第5部分黄酮类化合物

第5部分黄酮类化合物￿￿￿￿Still￿waters￿run￿deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深￿￿￿￿Where￿there￿is￿life,￿there￿is￿hope有生命必有希望有生命必有希望黄酮类化合物的波谱学特征•色谱法对黄酮类化合物的检识•紫外光谱特征•1H-NMR•13C-NMR•EI-MS：R-DA开裂，判断A、B环取代基团一、色谱法在黄酮鉴别中应用•PC•TLC–硅胶–聚酰胺1、PC法•双向色谱–第一相：醇性展开剂•BAW: n-BuOH-HAc-H2O (4:1:5, 上层)•TBA: t-BuOH-HAc-H2O (3:1:1)–第二相：水或水性展开剂 •2%～6% HAc•3%NaCl•HAc-浓HCl-H2O（30：3：10）–检 视：UV / 氨熏色变 / 2%AlCl3–用于分离黄酮类及其苷的混合物Rf值•醇性展开剂–BAW: 苷元 (>0.7) 〉单糖苷 〉双糖苷 (<0.7)•水性展开剂–2%-8% HAc、3%NaCl•苷元 (≈ 0) < 单糖苷 < 双糖苷 (>0.5)–3%-5%HAc•游离黄酮（醇）、查尔酮：Rf < 0.02•游离二氢黄酮（醇）、二氢查尔酮：Rf 0.1-0.32、硅胶TLC•黄酮苷元–CHCl3-MeOH（85：15， 70：5）–甲苯-甲酸甲酯-甲酸（5：4：1）——常用–苯-甲醇 （95：5）–苯-甲醇-醋酸（35：5：5）–甲苯-氯仿-丙酮（40：25：35）–丁醇-吡啶-甲酸 （40：10：2）• 黄酮衍生物（甲醚化或乙酰化）–苯-丙酮（9：1）–苯-乙酸乙酯（75：25） 3、聚酰胺TLC•乙醇-水 (3:2)•水-乙醇-乙酰丙酮 (4:2:1)•水-乙醇-甲酸-乙酰丙酮（5:1.5:1:0.5）•水饱和的正丁醇-醋酸（100:1，100:2）•丙酮-水（1:1） •丙酮-95%乙醇-水（2:1:2）•95%乙醇-醋酸（100:2）•苯-甲醇-丁酮（60:20:20）二、黄酮类化合物的紫外光谱•基本峰带–峰带I：300~400 nm，源于桂皮酰体系的π→ π*跃迁–峰带II：220~280 nm，源于苯甲酰体系的π→ π*跃迁峰带II峰带I1、在MeOH中的UV特点•黄酮及黄酮醇类•查尔酮及橙酮类•异黄酮、二氢黄酮及二氢黄酮醇类1) 黄酮及黄酮醇类•共性：带Ⅰ、带Ⅱ均较强•区别：带Ⅰ位置不同–黄酮：304~350 nm–黄酮醇•3-OH游离：352~385 nm•3-OH取代：328~357 nm2) 查尔酮及橙酮类•共性–带Ⅰ很强，为主峰–带Ⅱ较弱，为次强峰•区别：带Ⅰ峰位不同–查儿酮：340～390nm–橙酮： 370～430nmⅠⅠⅡⅡ3) 异黄酮、二氢黄酮(醇)类•共性–带Ⅱ为主峰–带Ⅰ很弱，为主峰的肩峰•区别：带Ⅱ峰位不同–异黄酮：245~278 nm–二氢黄酮 (醇)：270~295 nm Ⅰ ⅠⅡⅡ小结：确定黄酮类化合物的骨架类型ⅠⅠ、、ⅡⅡ均较强均较强峰带峰带ⅠⅠ　黄酮：304~350 nm　黄酮醇：352~385 nmⅠⅠ主峰，主峰，ⅡⅡ为次强为次强峰带峰带ⅡⅡ　查儿酮：340～390 nm 橙酮： 370～430 nmⅡⅡ为主峰，为主峰，ⅠⅠ为肩峰为肩峰峰带峰带ⅠⅠ　异黄酮：245~278 nm 二氢黄酮 (醇)：270~295 nm 引入-OH对UV的影响•对峰形的影响–7-OH黄酮：类似于二氢黄酮类(峰带II强)–4’-OH黄酮：类似于查耳酮类(峰带I强)–4’, 7-二羟基黄酮：正常–即：7-OH引入使峰带II增强，4’-OH引入使峰带I增强•对波长的影响–A环引入-OH，带II红移，尤以5,7-OH影响大–B环引入-OH，尤其以2’, 4’, 6’-OH，带I红移–C环引入-OH (3-OH)：带I红移30~50 nm，带II影响小–OH→OCH3：相就峰带紫移15~20 nm2、黄酮类化合物的紫外诊断试剂•CH3ONa–强碱，使所有-OH变为O-，相应峰带红移•NaOAc–弱碱，不能使5-OH离子化•NaOAc /H3BO3–能与邻二酚OH (不包括5,6-二羟基)络合，使相应峰带红移•AlCl3/HCl–AlCl3能与邻二酚OH及5-OH与4-CO络合–HCl则能破坏邻二酚OH与Al3+的络合1) NaOMe碱性强，解离所有Ar-OH　带Ⅰ， +40~60 nm，强度不降：示有4’-OH 　带Ⅰ， +50~60 nm，强度下降：示有3-OH, 无4’-OH200 300 400 500MeOH -MeOH -NaOMe -NaOMe -+50nm, 强度增加强度增加 (不降不降)有有4 -OH200 300 400 500MeOH -MeOH -NaOMe -NaOMe -碱性强，解离所有Ar-OH　带Ⅰ， +40~60 nm，强度不降：示有4’-OH 　带Ⅰ， +50~60 nm，强度下降：示有3-OH, 无4’-OH+50nm, 强度降低强度降低有有3-OH，无，无4 -OH2) NaOAc (未熔融)200 300 400 500MeOH -MeOH -NaOAc -NaOAc - 碱性较弱，酸性强的Ar-OH解离 　带Ⅱ，+5~20 nm：有7-OH+12nm有有7-OH3) NaOAc/H3BO4•带Ⅱ ，+5～10nm–A环有邻二Ar-OH–(不包括5,6-二羟基)•带Ⅰ，+12～30nm–B环有邻二Ar-OH4) AlCl3及AlCl3/HClAlCl3及AlCl3/HCl紫外图谱的应用稳定性稳定性3-OH,4-C=O3-OH,4-C=O5-OH,4-C=O5-OH,4-C=O邻二邻二Ar-OHAr-OHAlClAlCl3 3络合物络合物络合物络合物HClHCl 不分解不分解 不分解不分解 分解分解AlClAlCl3 3/HCl AlCl/HCl AlCl3 3 MeOH MeOH判断邻二判断邻二Ar-OHAr-OH的有无、位置的有无、位置判断分子中判断分子中3-OH,5-OH3-OH,5-OH的有无的有无AlCl3/HCl ＝ AlCl3　无邻二Ar-OHAlCl3/HCl ≠ AlCl3　 有邻二Ar-OH　带Ⅰ：- 30~40nm：B环有　　　　- 50~60nm：A、B环均可能有3-OH,5-OH有无的判断3-OH,4-C=O3-OH,4-C=O5-OH,4-C=O5-OH,4-C=O邻二邻二Ar-OHAr-OHAlClAlCl3 3络合物络合物络合物络合物HClHCl 不分解不分解 不分解不分解 分解分解稳定性稳定性AlCl3/HCl AlCl3/HCl ＝＝ MeOH MeOH 无无3-OH3-OH，无，无5-OH5-OHAlCl3/HCl ≠ MeOH AlCl3/HCl ≠ MeOH 可能有可能有3-OH3-OH、、5-OH5-OH 带带Ⅰ + 35Ⅰ + 35~50nm 50nm 只有只有5-OH5-OH + 60nm + 60nm 只有只有3-OH3-OH + 50 + 50~60nm 60nm 可能同时有可能同时有3-OH3-OH、、5-OH5-OH + 17 + 17~20nm 20nm 除除5-OH,5-OH,尙有尙有6-O-6-O-例AlClAlCl3 ——3 ——AlClAlCl3 3/HCl …/HCl …-43nm-43nmB B环有邻二环有邻二Ar-OHAr-OH三、黄酮类化合物的MS•苷元：EI-MS•苷：ESI-MS，FD-MS，FAB-MS1、EI-MS (苷元)•M-28：－C=O或－CO•R-DA开裂:可用于判断A、B环上的取代基RDA-IRDA-II[M-28]+特点•M+较强，常为基峰•Ⅰ、Ⅱ两条主要裂解途径 –黄酮类以Ⅰ为主–黄酮醇类以Ⅱ为主•A1、B1、B2的m/z: 推断A环、B环的取代式样–A1+· 、B1+· 、B2+保留了A、B环的结构•A1、B1 互补–即二者质荷比之和等于M+的质荷比 1) 黄酮类的EI-MS•以裂解途径Ⅰ为主•M+常为基峰•主要碎片为A1+· 、B1+· ，中等强度 •[M-CO]+、[A1-CO]+也较突出化化 合合 物物A1+·B1 +·黄酮黄酮1201025，，7-二羟基黄酮二羟基黄酮1521025，，7，，4’-三羟基黄酮三羟基黄酮1521185，，7-二羟基，二羟基，4’-甲氧基黄酮甲氧基黄酮1521322) 黄酮醇类的EI-MS•以裂解途径Ⅱ为主 •M+常为基峰•主要碎片为B2+ 、[B2-CO]+，尚有[A1+ H]+2、黄酮苷的FD-MS、FAB-MS•准分子离子峰：[M+H]+、[M+Na] +、[M+K] +•准分子离峰从末端依次失去糖基的碎片峰六碳醛糖六碳醛糖甲基五碳糖甲基五碳糖五碳糖五碳糖。