多酚类物质的提取与含量测定一、实验原理 酒石酸亚铁分光光度比色法的原理：过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应生成稳定的紫褐色络合物，溶液颜色的深浅与溶液中多酚含量成正比测定总多酚时所用的标准物则需根据样品中所含多酚的种类而定，比如测定茶叶中茶多酚含量时，儿茶酚能较好地代表茶多酚，则以儿茶酚作标准物；而测定藤茶多酚时，则以没食子酸作标准物较合适二、实验材料、试剂与仪器材料：茶叶；仪器：水浴锅，分光光度计，三角瓶，容量瓶，吸管等；试剂：（1）酒石酸亚铁溶液：称取硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和酒石酸钾钠(C4H4O6NaK·4H2O）,混合后加蒸馏水溶解,定容到1000mL；（2）pH 7.5磷酸盐缓冲液：称取 Na2HPO4·12H2O和 NaH2PO4·12H2O， 混合后加蒸馏水溶解,定容到1000mL三、操作步骤（一）标准曲线的制作或茶多酚含量经验值的应用# 标准曲线的制作参照GB-8313-87《茶—茶多酚测定》方法为简化操作，可用在一定操作条件下“吸光度值为1.00时，供试液中茶多酚的浓度为7.826 mg/mL”这一经验值，直接由待测液的吸光度值计算样品中茶多酚的含量。
二）样品总多酚的提取准确称取磨碎并混匀的茶叶样品于200mL三角瓶中，加入80mL沸水，并在沸水浴中保温浸提30min，然后过滤、洗涤滤渣，将滤液合并、冷却、加蒸馏水定容至100mL二）样品多酚提取液的多酚总量测定 吸取1mL样品多酚提取液于25mL容量瓶中，加入4mL蒸馏水和5mL酒石酸亚铁溶液，摇匀，再用pH 7.5磷酸盐缓冲液稀释至刻度，混匀同是以蒸馏水代替样品提取液，加入与样品测定同样的试剂作空白，用比色皿在540nm波长处测定吸光度 4.3 测定步骤 试液的制备 按GB 8305-87《茶 水浸出物测定》中3.4.1的规定,制备试液 4.3.2 测定 准确吸取上述(4.3.1)试液1mL,注入25mL的容量瓶中,加水4mL和酒石酸亚铁溶液 (3.1)5mL,充分混合,再加pH7.5的缓冲液(3.2)至刻度,用10mm比色杯,在波长540nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A) 四、计算7.826—吸光度为1.00时,茶多酚含量的经验值 (mg/mL) 如果制作标准曲线，则样品提取液的测定与标准曲线制作步骤相同，并根据标准曲线和相应公式，求得样品中茶多酚的含量计算方法和公式 茶叶中茶多酚的含量,以干态质量百分率表示,按下式计算: A×1.957×2 L1 茶多酚(％)＝——————×—————×100 100 L2×M×m式中: L1--试液的总量,mL; L2--测定时的用液量,mL; M--试样的质量,g; m--试样干物质含量百分率,％； A--试样的吸光度; 10mm比色杯,当吸光度等于0.50时,每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。
如果符合重复性(5.2)的要求,则取两次测定的算术平均值作为结果 5.2 重复性 同一样品的两次测定值之差,每100g试样不得超过。