实验一可溶性还原糖、脂肪 、蛋白质的鉴定一、实验原理v可溶性还原糖 ＋v蛋白质 ＋v脂肪 ＋斐林试剂双缩脲试剂砖红色沉淀苏丹Ⅲ染液苏丹Ⅳ染液橘黄色红色紫色颜色反应二、几种重要的试剂v斐林 试剂甲液（0.1g/mL的NaOH溶液）乙液（ 0.05g/mL的CuSO4溶液）现配现用 混合均匀v双缩脲 试剂A液（0.1g/mL的NaOH溶液）B液（ 0.01g/mL的CuSO4溶液）现配现用 先加A液 再加B液v苏丹Ⅲ（ Ⅳ）染液：用来鉴定脂肪的存在四、实验方法与步骤v1、可溶性还原糖的鉴定(1)制备组织样液：苹果洗净、去皮、切 块→取5g加少许石英砂研磨→加5mL水再 研磨→漏斗垫纱布后过滤，得到样液(2)鉴定样液：取2mL样液于试管中→注入 2mL刚配制的斐林试剂，振荡混合（淡蓝色） → 水浴煮沸2min左右，观察溶液颜色变化（ 先变为棕色，再变为砖红色）制备生物 组织样液取材、研磨、过滤取样取2ml组织样液注入试管注入试管中注入试剂向试管中注入2 ml刚配制的斐林试剂 加热和观察 (将4—5滴乙液滴入2ml甲液中)v2、脂肪的鉴定 (1)切片制作(2)染色：在花生子叶切片上滴2～3滴苏丹Ⅲ 染液→2～3min中后，吸去染液→ 滴体积分数 为50％的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精，再 滴1～2滴蒸馏水，盖上盖玻片(3)镜检鉴定：在低倍物镜下观察，找到花生 子叶切片的最薄处，移至视野中央→转动转换 器，换用高倍物镜观察（脂肪滴:橘黄色的圆形 小颗粒）制备实验 材料去种皮、削平面、切片染色滴2—3滴苏丹Ⅲ染液染色2—3分钟去浮色在玻片上滴1—2滴体积分数为 50%酒精溶液，洗去浮色制作临 时装片放在显微镜下观察（先低倍后高倍 ）v2、蛋白质的鉴定(1)制备组织样液：浸泡黄豆1～2d→去皮、切 成薄片，加少许石英砂及5mL水研磨→漏斗垫 纱布后过滤，得到样液（用蛋清要稀释10倍以 上，否则实验后黏住试管壁不易洗净）(2)鉴定样液：取2mL样液于试管Ⅰ中→加入 2mL双缩脲试剂A液摇匀（造成一个碱性环境） → 加入双缩脲试剂B液3～4滴，摇匀，注意颜 色变化（溶液变为紫色）。
另取 清水于试 管Ⅱ中→加入 摇匀→ 颜色变化，作为 2mL （A液、B液） 无对照制备生物 组织样液取材研磨过滤或制备蛋清液注入组织 样液取一支试管注入黄豆组织液（或蛋清液） 2ml注入试剂A加入2ml双缩尿试剂A加入双 缩尿试 剂B观察颜 色变化五、注意事项[1]斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂 甲液（0.1g/ml的NaOH溶液）和乙液（0.05 g/ml 的硫酸铜溶液 ）分别配制、储存，使用 时再临时配制，将4—5滴乙液滴入2 ml 甲液 中，配完后立即使用[2] 双缩尿试剂的使用，应先加A（0.1g/ml的 NaOH溶液），造成碱性的反应环境，再加B 液（ 0.01g/ml 的硫酸铜溶液 ）[5]在鉴定脂肪的实验中，若用花生作实验 材料，必须提前浸泡3—4个小时，浸泡时间短， 不易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的 薄片不易成型，染色时间不易过长[4]在蛋白质的鉴定试验中，若用蛋白质作实 验材料，必须稀释，以免实验后粘住试管，不易 洗刷[3]在鉴定可溶性还原糖的实验中，对试管中 的溶液进行加热时，试管底部不要触及烧杯底部， 另外，试管口不要朝向实验者，以免沸腾的熔液冲 出试管，造成烫伤。
课堂练习1、用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时， 溶液颜色的变化过程是（ ）A、无色→砖红色（沉淀）B、浅蓝色→砖红色（沉淀） C、浅蓝色→蓝色→砖红色（沉淀） D、浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀） D2、在用双缩尿试剂鉴定蛋白质实验时，正确的操 作是（ ）A、2ml蛋白质稀释液先加0.1g/ml的NaOH，再 加3—4滴0.01 g/ml CuSO4溶液B、 2ml蛋白质稀释液先加3—4滴0.01 g/ml CuSO4溶液，再加0.1g/ml的NaOH C、2ml蛋白质稀释液，同时加3—4滴0.01 g/ml CuSO4和0.1g/ml的NaOH 混合液D、在NaOH和 CuSO4混合液中加入蛋白质稀释 液A3、用苏丹Ⅲ染液对脂肪组织进行染色时 ，可用来冲洗浮色的药品是（ ）A、HCI； B、H2 O；C、50%的酒精； D、无水酒精4、下列哪个实验用到显微镜（ ）A、可溶性还原糖的鉴定；B、蛋白质的 鉴定；C、脂肪的鉴定；D、淀粉的鉴定CC5、下列哪种试剂在使用过程中，必须经过加 热（ ）A、斐林试剂鉴定可溶性还原糖的过程中； B、苏丹Ⅲ 在鉴定动物组织中的脂肪时； C、双缩尿试剂鉴定蛋白质时；D、碘化钾溶液鉴定淀粉时。
6、下列糖中能与斐林试剂反应产生砖红色沉 淀的是（ ）A、淀粉；B、果糖；C、蔗糖；D、纤维素 AB在蛋白质鉴定实验中，必须先加A液再 加B液的原因是:为什么加入3—4滴B液而不能过量？在碱性溶液中，蛋白质容易与Cu2+ 发生紫 色反应，否则就容易生成蓝色Cu (OH) 2沉 淀对实验现象有遮蔽作用加入过量的双缩尿试剂 B液，CuSO4在 碱性溶液中生成大量的蓝色Cu (OH) 2 沉淀会遮蔽所产生的紫色。