第第13章章 生物药物分析概论生物药物分析概论 本章主要内容v生物药物种类与生物药物种类与特点特点v生物药物质量检验的生物药物质量检验的基本程序与方法基本程序与方法v生物药物理化测定法：生物药物理化测定法：HPLC法、酶法、法、酶法、电泳法电泳法 一、概述1. 生物药物生物药物 biopharmaceuticals 利用生物体、生物组织和器官制得的天然活性物质及其类似物 分类没有严分类没有严格的界限格的界限 主要包括： 生化药物 生物制品 （生物技术药物） 2. 生化药物生化药物 biochemical drugs 生命基本物质及其衍生物等动植物及微生物提取、分离的天然生物活性物质及半合成得到生化药物氨基酸、Pr类酶、辅酶类多糖类脂类 核酸类 人纤维蛋白原凝血酶、胰蛋白酶肝素、玻璃酸鹅脱氧胆酸、谷固醇 3. 生物制品生物制品 biological products 应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的药品 分类：菌苗、疫苗、类毒素免疫血清诊断制品其他（包括血液制品、组织制品等） 自动免疫制品自动免疫制品 4. 基因工程药物基因工程药物 biotechnology drugs 利用重组DNA等生物技术生产的药物发现并确定有治疗作用的Pr分离或合成控制该Pr合成的基因将该基因导入受体细胞受体细胞表达该Pr分离纯化基因工程药物 胰脏胰脏(A)n胰岛素原胰岛素原mRNAcDNA重组质粒重组质粒转化细菌转化细菌mRNA反转录酶反转录酶胰岛素原基因胰岛素原基因与质粒与质粒连接连接感染感染E.coli胰岛素原胰岛素原重组胰岛素原的合成 基因工程药物主要类别基因工程药物主要类别蛋白质多肽类： 激素类及神经递质类 细胞因子类 酶及凝血因子类核酸类： 反义寡核苷酸 等人生长激素释放抑制因子（Human Somatotin）干扰素（Human Interferons）链激酶（Streptokinase） 5. 生化药物和基因工程药物特点生化药物和基因工程药物特点1）共同特点：活性强，毒副作用小2）分子量大，结构确证难3）全过程的质量控制：从原料、菌种到生产设备、中间体、产品5）生物活性检查6）安全性检查：异常毒性检查、过敏物质检查、外源性DNA残留量、宿主菌蛋白残留量等 7）效价（含量）测定 二、检验的程序和方法收录于《中国药典》和《中国生物制品规程收录于《中国药典》和《中国生物制品规程》》程序和方法包括： 鉴别、杂质检查、安全性检查、含量（效价）测定 1）理化鉴别法：UV、肽图等反应序列信息反应序列信息RP-HPLC法分析重组人胰高血糖素类多肽－1（7－36）肽图谱《药物分析杂志》2005，25(1)24-26标准品样品胰蛋白酶酶解 V8蛋白酶酶解rhGLP-1(7-36)由30个氨基酸组成，结构中含2Lys、1Arg、1Asp、3Glu 2）生化鉴别法：免疫法、酶法、电泳法等3）生物鉴别法：动物试验等专属性强，应用广泛专属性强，应用广泛免疫双扩散法SDS-PAGEMarker Sample116.0k66.2k45.0k35.0k25.0k18.4k14.4k 2. 杂质检查1）一般杂质：氯化物、重金属、水分等2）特殊杂质：有关物质等 高效凝胶过滤色谱法(High Performance Gel Filter ，HPGFC）、RP-HPLC 萄聚糖凝胶立体网状结构图 标准蛋白色谱图标准蛋白色谱图时间(min)04812165432 1. 重组人肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体（rhTRAIL）质控方法和质量标准的研究 《药物分析杂志》2005，25（3）253-257 Synmetry 300 C18柱（3.9×150mm） 3. 安全性检查1）热原检查 家兔法、鲎试剂法2）降压物质检查3）过敏试验4）异常毒性试验 豚鼠、大鼠存活试验5）无菌试验6）宿主细胞蛋白残留、DNA残留 ELISA法 1）理化分析法： 重量法、滴定法、 电化学法、光谱法 色谱法（HPLC法）4. 4. 含量（效价）测定含量（效价）测定例：蛋白质含量测定（ChP2005三部） 凯氏定氮法 Lowry法 双缩脲法 2）生化分析法v 酶法： v免疫分析法酶活力测定法 以酶为分析对象进行分析酶分析法 以酶为分析工具或分析试剂 的分析方法 3）生物检定法 药物对生物体或离体器官所起的生物活性 测定效价时采用参考品，体内、体外方法测定活性，计算效价IU 同时测定蛋白含量，计算特异比（比活性，IU/mg） 例：冻干基因工程例：冻干基因工程α1b干扰素制造及检定规程干扰素制造及检定规程 本品系用从健康人白细胞中获得的α1b干扰素基因重组质粒，传染大肠杆菌，使之高效表达人α1b干扰素，经高度纯化后冻干制成。
用于治疗慢性乙型肝炎、丙型肝炎和毛细胞白血病等疾病 主要包括以下内容：1 菌种 2 发酵 3 收菌 4 菌体裂解与粗制干扰素制备5 浓缩与纯化 6 稀释、除菌过滤 7 半成品检定8 除菌半成品检定 9 成品检定 10规格 11保存与效期12 冻干基因工程α1b干扰素使用说明书 检查：检查：Ø纯度： 1电泳纯度 2高效液相色谱纯度ØpH值Ø水分鉴别：鉴别：Ø分子量测定Ø肽图测定Ø等电聚集Ø紫外光谱扫描Ø外观半成品和成品的检验项目包括： 安全性检查：安全性检查：Ø残余外源性DNA含量Ø残余IgG含量Ø残余工程菌蛋白含量Ø抗生素活性Ø无菌试验Ø热原质试验Ø异常毒性含量：含量：Ø效价测定：细胞病变抑制法Ø蛋白含量Ø比活性 。