Chapter 3: DNA Replication 一、一、DNA复制的复杂性复制的复杂性（（The complexity of DNA replication) 自我增殖是生物的最重要特征，生物的这种增殖是能够忠实地自我增殖是生物的最重要特征，生物的这种增殖是能够忠实地把亲代的遗传物质传给后代把亲代的遗传物质传给后代 DNA分子复制的分子复制的 复杂性，主要表现在：复杂性，主要表现在：（（1）复制时的能量供应复制时的能量供应2）已经解开的双链如何避免再复性形成氢键已经解开的双链如何避免再复性形成氢键3）有多种酶系的参加有多种酶系的参加4）有校正保障系统有校正保障系统5）环形）环形DNA和线性和线性DNA的复制6）多个复制起始点的调控系统多个复制起始点的调控系统7））DNA复制与细胞周期复制与细胞周期 二、二、DNA复制的原点和方向复制的原点和方向（（The origins and direction of DNA replication)1、、DNA复制的原点复制的原点（（Origins)和终止点和终止点（（Terminus)lOrigin is the DNA sequence where initiates its replication. 复制叉（复制叉（fork）：）：lTerminus is the DNA sequence where usually stops its replication 二、二、DNA复制的原点和方向复制的原点和方向（（The origins and direction of DNA replication)原核生物通常只有一个复制原点原核生物通常只有一个复制原点 原核生物复制原点的原核生物复制原点的DNA序列中，富含序列中，富含AT，，具有强烈的具有强烈的呼吸作用呼吸作用。
如大肠杆菌中的如大肠杆菌中的Ori，，AT含量达含量达56％ 二、二、DNA复制的原点和方向复制的原点和方向（（The origins and direction of DNA replication)lAll prokaryotic chromosomes and many bacteriophage and viral DNA molecules are circlular and comprise single replicons. l There is a single termination site roughly 180o opposite the unique origin. 二、二、DNA复制的原点和方向复制的原点和方向（（The origins and direction of DNA replication)真核生物有多个染色体，且每个染色体真核生物有多个染色体，且每个染色体上有多个复制原点上有多个复制原点已在酵母中克隆到一个已在酵母中克隆到一个11bp的序列的序列 ATTTAT Pu TTTA TAAATA Py AAAT 称为酵母的称为酵母的ARS(Autonomous replication sequence) 二、二、DNA复制的原点和方向复制的原点和方向（（The origins and direction of DNA replication)2、复制子、复制子（（replicon) Replicon is any piece of DNA which replicates as a single unit. It contains an origin and terminus.OriOriOrireplicon 二、二、DNA复制的原点和方向复制的原点和方向（（The origins and direction of DNA replication)lProkaryotic genome: a single circular DNA = a single repliconlEukaryotic genome: multiple linear chromosomes & multiple replicons on each chromosome，，一般一个复制子约有一般一个复制子约有40－－－－200kb. 二、二、DNA复制的原点和方向复制的原点和方向（（The origins and direction of DNA replication)lA typical mammalian cell has 50000-100000replicons with a size range of 40-200 kb. Where replication forks from adjacent replication bubbles meet, they fuse to form the completely replicated DNA. No distinct termini（（ 没有明显的没有明显的界限）界限）are required 二、二、DNA复制的原点和方向复制的原点和方向（（The origins and direction of DNA replication)3.DNA复制的复制的 方向：方向：（（1））DNA新链的延伸方向：新链的延伸方向： 5‘ 3’；必须有自由；必须有自由的的3‘ –OH . (2) 双向或单向复制。
双向或单向复制 三、三、DNA的半保留复制和半不连续复制的半保留复制和半不连续复制 （（semi-conservative and semi-discontinous DNA replication））1、、 DNA的半保留复制的半保留复制（（semi-conservative DNA replication）） : 1958年年Meselson和和Stahl的实验首次有力地支持了半的实验首次有力地支持了半保留复制方式保留复制方式 Semi-conservative mechanism15N labeling experiment1.15N labeling: grow cells in ??2.Collect DNA: grow cells in ??3.Separation: method ??4.Result interpretation15N labeled DNAunlabeled DNA 三、三、DNA的半保留复制和半不连续复制的半保留复制和半不连续复制 （（semi-conservative and semi-discontinous DNA replication））2、、 DNA的半不连续复制的半不连续复制 （（ semi-discontinous DNA replication））Discovery of Okazaki fragments Evidence for semi-discontinuous replication Semi-discontinuous replicationSemi-discontinuous replicationLigation Okazaki fragments 华中科技大学2004年生物化学与分子生物学硕士研究生入学试题名词解释 ：冈崎片段（3分）武汉大学2003年硕士研究生入学分子生物学试题：Replicon、 semi-conservative replication 华中科技大学2004年生物化学与分子生物学硕士研究生入学试题 原核DNA合成酶中（ ）的主要功能是合成前导链和冈崎片段A、DNA聚合酶Ⅰ B、DNA聚合酶Ⅱ C、DNA聚合酶Ⅲ D、引物酶 四、四、DNA复制的几种主要方式复制的几种主要方式 （（The mode of semi-conservative DNA replication））1、、θ复制复制（（Replicating θ structure) 多数多数为等速双向，少数等速双向，少数为不等速不等速单向或双向复制向或双向复制如：如：E.coli :等速双向等速双向 枯草杆菌：不等速双向复枯草杆菌：不等速双向复制制 四、四、DNA复制的几种主要方式复制的几种主要方式 （（The mode of semi-conservative DNA replication））2、滚环复制、滚环复制（（Rolling circles replication)如：如：ФX174病毒的复制病毒的复制 四、四、DNA复制的几种主要方式复制的几种主要方式 （（The mode of semi-conservative DNA replication））3、、D－－环复制环复制（（Displacement loop)如：线粒体如：线粒体DNA的复制的复制 龟鳖动物的线粒体基因组龟鳖动物的线粒体基因组复制原点复制原点 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote））（一）、参与原核生物（一）、参与原核生物DNA的复制的酶类：的复制的酶类：Replisome（（复制体）复制体）: in vivo, DNA polymerase holoenzyme dimer（（全全酶二聚体）酶二聚体）, primosome （（引发体）引发体）(helicase解螺旋酶解螺旋酶) are physically associated in a large complex to synthesize DNA at a rate of 900 bp/sec. 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote））1、原核生物、原核生物DNA聚合酶（聚合酶（DNA polymerase) 1957年，由年，由Kornberg首先发现首先发现DNA pol I，， 后又相继发现后又相继发现DNA pol II 和和 DNA pol III，， 因此，原核生物共有三种因此，原核生物共有三种DNA聚合酶聚合酶 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote））（（1）：）：DNA polymerase III holoenzyme: 结构特点：结构特点： l有多个亚基有多个亚基, 但其生物活性形式为二聚体，但其生物活性形式为二聚体， one half synthesizing the leading strand and the other lagging strand. 可保证先导链和后滞链同时进行可保证先导链和后滞链同时进行lcontain an a-subunit---，，ε-subunit---3’5’ proofreading exonuclease，， β-subunit---clamp the polymerase to DNAl 其它还有多个亚基其它还有多个亚基. 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote）） 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote））（（1）：）：DNA polymerase III功能特点：功能特点： 无无5‘ 3’外切核酸酶活性外切核酸酶活性 有有3‘ 5’外切核酸酶活性外切核酸酶活性 在有在有3‘－－OH 时，按模板合成新时，按模板合成新DNA（（先先导链和后滞链）导链和后滞链） 是细胞中是细胞中DNA合成的主要酶合成的主要酶 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote））主要功能主要功能:是从是从3‘→5’方向识别和切除不配对的方向识别和切除不配对的DNA生长链末端生长链末端的核苷酸。
的核苷酸 举例举例:在某些在某些T4噬菌体突变株中噬菌体突变株中DNA复制的真实性降低，而复制的真实性降低，而易发生突变，从此突变株分离得到的易发生突变，从此突变株分离得到的T4DNA聚合酶的聚合酶的3‘→5’外外切酶活性很低相反，另外一些具有抗突变能力的切酶活性很低相反，另外一些具有抗突变能力的T4突变株中突变株中的的T4DNA聚合酶的聚合酶的3'→5'外切酶活性比野生型高得多，因此，外切酶活性比野生型高得多，因此，其其DNA复制真实性好，变异率低复制真实性好，变异率低 byE. coli polymerase Proofreading 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote）） 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote））（（2）：）：DNA polymerase I：： 单链分子，在细胞中含量很高单链分子，在细胞中含量很高功能特点：功能特点： 有有5‘ 3’外切核酸酶活性外切核酸酶活性 有有3‘ 5’外切核酸酶活性外切核酸酶活性 在有在有3‘－－OH 时，按模板合成新时，按模板合成新DNA 在细胞中主要进行在细胞中主要进行DNA的损伤修复的损伤修复 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote）） 5‘→3’外切酶活性就是从外切酶活性就是从5‘→3’方向水解方向水解DNA生生长链前方的长链前方的DNA链，主要产生链，主要产生5‘-脱氧核苷酸。
脱氧核苷酸 这种酶活性只对这种酶活性只对DNA上配对部份上配对部份(双链双链)磷酸二酯磷酸二酯键有切割活力作用，方向是键有切割活力作用，方向是5‘→3’每次能切除每次能切除10个个核苷酸，而且核苷酸，而且DNA的聚合作用能刺激的聚合作用能刺激5‘→3’外切酶活外切酶活力达力达10倍以上 因此，这种酶活性在因此，这种酶活性在DNA损伤的修复中可能起损伤的修复中可能起着重要作用着重要作用对冈崎片段对冈崎片段5'末端末端DNA引物的去除依赖引物的去除依赖此种外切酶活性此种外切酶活性 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote）） 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote）） 用用DNA polymerase I 进行分子探针（进行分子探针（prob)的标记的标记: 切口平移方法（切口平移方法（Nick translation) 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote））（（3）：）：DNA polymerase II：：功能特点：功能特点： 无无5‘ 3’外切核酸酶活性外切核酸酶活性 有有3‘ 5’外切核酸酶活性外切核酸酶活性 在细胞中的功能不详，可能起损伤修复作用在细胞中的功能不详，可能起损伤修复作用 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote））功能功能polⅠpolⅡpolⅢ聚合作用5'→3'+ +外切酶活性3'→5'+++外切酶活性5'→3'+--焦磷酸解和焦磷酸交换作用+-+模板及引物的选择 完整的DNA双链---带引物的长单链DNA+--带缺口的双链DNA+--双链而有间障的DNA+++一般性质 分子量109KD120KD＞140KD每细胞中的分子量40017-10010-20结构基因polApolBpolC 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote））2、引发酶（、引发酶（primase)和和RNA聚合酶：聚合酶：由由RNA聚合酶合成的聚合酶合成的RNA引物引物由引发酶合成的由引发酶合成的RNA引物引物 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote））为什么为什么DNA合成时要用合成时要用RNA作为引物呢？作为引物呢？ Crucial for high fidelity of replication DNA最初合成时，容易出错，用最初合成时，容易出错，用RNA做引物，做引物，可使后面的聚合酶识别，再实行切除。
从而使可使后面的聚合酶识别，再实行切除从而使DNA复制高度保真复制高度保真 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote））3、、DNA解链酶（解链酶（DNA helicase)：： A、用于解开、用于解开DNA双链，形成单链其沿后滞链模板双链，形成单链其沿后滞链模板的的5‘→3’方向，并随着复制叉的前方向，并随着复制叉的前进而移而移动 如：如：DnaB蛋白蛋白 B、与、与SSBP(single-stranded DNA binding protein) 配合，防止解开的双链再退火配合，防止解开的双链再退火 C、还有一种解链蛋白、还有一种解链蛋白——Rep 蛋白，在前导链处解蛋白，在前导链处解开双链形成单链，其沿先导链模板的开双链形成单链，其沿先导链模板的3’ → 5‘方向移方向移动 DNA helicases unwind the double helix in advance of the replication fork 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote））4、单链结合蛋白、单链结合蛋白SSBP(single-stranded DNA binding protein)：： 结构和作用：结构和作用：4聚体，聚体，177 A.A, 可发挥协同作用可发挥协同作用 A、、防止单链再退火防止单链再退火 B、、防单链降解防单链降解 C、、伸展模板伸展模板DNA Single-stranded binding proteins (SSBs) stabilize single-stranded DNAØCooperativeCooperative bindingbindingØSequence-independent manner(electrostatic interactions) 五、原核生物五、原核生物DNA复制的酶学复制的酶学 （（The enzymes of DNA replication in prokaryote））5、依赖于、依赖于DNA的的ATPase：： 水解水解ATP提供能量提供能量6、、DNA连接酶：连接酶： 连接冈崎片断连接冈崎片断7、、DNA拓扑异构酶拓扑异构酶 Positive supercoiling: caused by removal of helical turns at the replication fork. Resolved by a type II topoisomerase called DNA gyrase Topoisomerase removes supercoils produced by DNA unwinding at the replication fork 六、大肠杆菌六、大肠杆菌DNA的复制的复制（一）体外实验系统（（一）体外实验系统（In vitro ）：）：1.Purified DNA: smaller and simpler bacteriophage or plasmid DNA molecules (ФX174, 5 Kb)2.All the proteins and other factors for its complete replications3.Put DNA and protein together and ask replication question 六、大肠杆菌六、大肠杆菌DNA的复制的复制（二）（二） DNA合成的起始（合成的起始（Initiation）） 大肠杆菌的大肠杆菌的 origin locus—— oriC ，，可把其可把其克隆进入质粒，从而容易进行相应的研究。
克隆进入质粒，从而容易进行相应的研究 这种质粒在细胞中的复制与大肠杆菌染色这种质粒在细胞中的复制与大肠杆菌染色体的行为一样体的行为一样 六、大肠杆菌六、大肠杆菌DNA的复制的复制The DNA replication of E.coli1、、oriC区包括区包括4个个9bp的的DnaA蛋白起始结合位点，蛋白起始结合位点， DnaA蛋白的合成是与细胞的生长相偶合的，因此，蛋白的合成是与细胞的生长相偶合的，因此，复制的起始也是与细胞的生长相偶合的复制的起始也是与细胞的生长相偶合的2、首先是、首先是DnaA 蛋白结合蛋白结合DNA形成一个形成一个30——40个分个分子的复合体，其集合到子的复合体，其集合到oriC区，区，以促进前端的以促进前端的3个个13bp的的AT丰富区重复序列的解开，便于与丰富区重复序列的解开，便于与DnaB蛋蛋白的结合白的结合oriC区，区，4个个9bp的重复的重复3个个13bp的的AT丰富区丰富区DNA 六、大肠杆菌六、大肠杆菌DNA的复制的复制The DNA replication of E.coli3、、 DnaB蛋白是解螺旋酶，蛋白是解螺旋酶，可利用可利用DNA水解的能量进水解的能量进一步融解双链一步融解双链DNA成为单成为单链链DNA。
有两类有两类解螺旋酶解螺旋酶，，一类结合前导链的模板一类结合前导链的模板(Rep蛋白）蛋白）；另一类结合；另一类结合后滞链的模板（后滞链的模板（helicase)4、、 SSB蛋白结合已解开的蛋白结合已解开的单链单链DNA 六、大肠杆菌六、大肠杆菌DNA的复制的复制The DNA replication of E.coli5、前导链的引发合成由、前导链的引发合成由RNA聚合酶合成一段聚合酶合成一段RNA引引物开始6、后滞链的引发则需要引发体（、后滞链的引发则需要引发体（primosome),引发体引发体由由6种蛋白（种蛋白（n、、n’、、 n’’、和、和DnaB、、 DnaC、、 DnaI））以及引发酶（以及引发酶（primase)组成，后者进行引物组成，后者进行引物的合成 复制的起始和细胞的生长速复制的起始和细胞的生长速率相偶合，当细胞生长快时，率相偶合，当细胞生长快时，Re-initiation of bacterial replication at new origins before completion of the first round of replication 六、大肠杆菌六、大肠杆菌DNA的复制的复制The DNA replication of E.coli 六、大肠杆菌六、大肠杆菌DNA的复制的复制The DNA replication of E.coli（三）（三）DNA合成的延伸合成的延伸（（Elongation）） 由由DAN聚合酶聚合酶III来完成。
来完成按照回环模型进行前导链和后滞链的合成按照回环模型进行前导链和后滞链的合成 Figure 8-20 The composition of the DNA Pol III holoenzyme Other some enzymes during Elongation 1.Removal of RNA primer with RNase H, and gap filling with DNA pol I2. Ligation of Okazaki fragments are linked by DNA ligase.六、大肠杆菌六、大肠杆菌DNA的复制的复制The DNA replication of E.coli Elongation: lagging strand replication Polymerase III holoenzyme(DNA pol III)DNA pol I (5’3’ polymerase activity)DNA ligase由由RNase H 和和 DNA pol I 的的5 3 的外切活性切除的外切活性切除 六、大肠杆菌六、大肠杆菌DNA的复制的复制The DNA replication of E.coli（四）（四）DNA合成的中止合成的中止 （（Termination and Segregation））lTerminus（（终止子）终止子）: containing several terminator sites (ter) approximately 180o opposite oirC.lTus protein: ter binding protein, an inhibitor of the DnaB helicase Terminationter 七、原核生物线性七、原核生物线性DNA的复制的复制 （（The DNA replication of Linear DNA in prokaryote））末端问题末端问题 线性线性DNA的复制（的复制（Linear DNA replication)：： 为解决线性为解决线性DNA复制时，末端引物的去除，产生复制时，末端引物的去除，产生了多种方式：了多种方式：（（1）环化：）环化：如如 噬菌体噬菌体粘性末端粘性末端 （（2）多联体形式：）多联体形式：如如T4和和T7病毒病毒3’3’DNA聚合酶填满，再经连接聚合酶填满，再经连接酶连接，形成二联体酶连接，形成二联体特异性内切核酸酶特异性内切核酸酶切割切割T7DNA聚合酶进行链置换聚合酶进行链置换分离、再延长分离、再延长 （（3）） 其它形式：其它形式：Ф290病毒病毒 依靠末端结合依靠末端结合蛋白，合成其蛋白，合成其中的一条中的一条另一条链则另一条链则形成，平锅形成，平锅底结构，再底结构，再合成合成 4）腺病毒的复制方式：）腺病毒的复制方式： 八、真核生物八、真核生物DNA的复制的复制 （（The DNA replication of eukaryote））1、真核生物真核生物DNA的复制的复制：： （（1）有多个染色体，每个染色体上有多个复制起始）有多个染色体，每个染色体上有多个复制起始点。
点 （（2）每个复制起始点受到严格的统一控制每个复制起始点受到严格的统一控制 （（3）存在核小体的组装问题存在核小体的组装问题 （（4）有多种）有多种DNA聚合酶，每种酶分子有多个亚基，聚合酶，每种酶分子有多个亚基，结构复杂结构复杂 1.Small animal viruses (SV40病毒病毒, 5 kb) are good mammalian models for elongation (replication fork) but not for initiation. 2. Yeast (裂殖酵母裂殖酵母): 1.4 X 107 bp in 16 chromosomes, 400 replicons, much simpler than mammalian system and can serve as a model system3. Cell-free extract （（无细胞提取物）无细胞提取物）prepared from Xenopus (frog) eggs containing high concentration of replication proteins and can support in vitro replication. 2、研究真核生物、研究真核生物DNA复制的几种系统：复制的几种系统： 3: 细胞周期（细胞周期（Cell cycle）） When to replicate2n4nG1SG2M第第1个周期个周期第第2个周期个周期 G1G1 preparing for DNA replication (cell growth)S SDNA replicationG2G2a short gap before mitosisM Mmitosis and cell divisionCell cycleCell cycleEntry into the S-phase:CyclinsCyclin-dependent protein kinases (CDKs)signaling 4、、真核生物真核生物DNA的复制的聚合酶：的复制的聚合酶： Five different DNA polymerases are involved. 真核生物真核生物DNA的复制的聚合酶：的复制的聚合酶：lDNA pol : 由由4个亚基构成，在细胞内活性很个亚基构成，在细胞内活性很高，是高，是DNA复制的主要酶类之一。
复制的主要酶类之一 该酶通常与该酶通常与primase 结合，在前导链和后滞结合，在前导链和后滞链的每个片断上具有合成链的每个片断上具有合成RNA引物的作用，其引物的作用，其起始引物（约起始引物（约10bp)合成后，再合成合成后，再合成20-30bp的的DNA，然后脱落下来然后脱落下来 该酶没有没有3‘ 5’外切外切酶活性，因此，一定有活性，因此，一定有其它的其它的酶在在DNA复制中复制中发挥作用 真核生物真核生物DNA的复制的聚合酶：的复制的聚合酶：lDNA polδ: on the leading strand that replaces DNA pol can synthesize long DNA. δ酶酶由由2个个亚基构成基构成，其与，其与 酶不同点酶不同点（（1））该酶有有3‘ 5’外切外切酶活性2）分子量不同分子量不同3）与抗）与抗体的交叉反体的交叉反应不同4））对抗生素的反抗生素的反应不同 其主要作用是其主要作用是进行前行前导链和后随和后随链的合成。
的合成 真核生物真核生物DNA的复制的聚合酶：的复制的聚合酶：lDNA pol ε: on the lagging strand that replaces DNA pol synthesized Okazaki fragments 该酶的亚基数目尚未确定，其作用是用于后滞链的冈该酶的亚基数目尚未确定，其作用是用于后滞链的冈崎片段的合成崎片段的合成 外切核酸酶外切核酸酶MF1负责切开冈崎片段的负责切开冈崎片段的RNA引物，引物，RNAase H降解降解RNA产生缺口，由产生缺口，由DNA pol ε来填充DNA pol : 在核内起损伤修复的作用在核内起损伤修复的作用DNA pol ：：粒体内起粒体内起mtDNA的复制作用的复制作用 5、、Iniation of multiple replicons（（1）一般情况下，有）一般情况下，有 20-50 replicons 在在S期时同时起始，期时同时起始，以大量复制以大量复制DNA：：•Early S-phase: euchromatin replication•Late S-phase: heterochromatin replication•Centromeric and telomeric DNA replicate last （（2）可能有一种许可因子）可能有一种许可因子（（Licensing factor））在起在起作用，其在每个细胞周期仅仅允许起始作用，其在每个细胞周期仅仅允许起始1次。
次 Licensing factorInitiation （3）、Initiation: origin1.单个酵母细胞的复制起始点单个酵母细胞的复制起始点(ARS)已被克隆进入已被克隆进入 原核生物的原核生物的质粒中，这些质粒可在酵母细胞质粒中，这些质粒可在酵母细胞(a eukaryote)中得以复制中得以复制 ARSs: autonomously replicating sequencesMinimal sequence: 11 bp [A/T]TTTAT[A/G]TTT[A/T] (TATA box)2.原点识别复合体原点识别复合体ORC (origin recognition complex) binds to ARS, upon activation by CDKs, ORC will open the DNA for replication.(CDKs:周期蛋白依赖性蛋白激酶）周期蛋白依赖性蛋白激酶） 5、复制过程中核小体结构的形成：、复制过程中核小体结构的形成： 目前有两种不同的说法目前有两种不同的说法 Replication fork 可用蛋白质合成的抑制剂可用蛋白质合成的抑制剂放线菌酮放线菌酮试验证明，核小体八聚试验证明，核小体八聚体的组装是全保守的。
即老的组蛋白结合到先导链，而新合体的组装是全保守的即老的组蛋白结合到先导链，而新合成的组蛋白结合到后滞链成的组蛋白结合到后滞链 Replication factories: all the replication enzymes, DNA associated with the replication forks in replication BUdR labeling of DNAVisualizing by immunoflurescence using BUdR antiboby 6、、DNA复制时，末端复制时，末端DNA的合成的合成 （（1）端粒酶的化学性质）端粒酶的化学性质 （（2）端粒酶作用）端粒酶作用 telomerase Crystal structure of phage T7 DNA polymeraseExonuclease domaintemplate 。