实验七、人类细胞实验七、人类细胞巴氏小体巴氏小体(Barr body)的观察的观察 一、一、 实验目的：实验目的： 学习和掌握人体Barr小体的制片技术；观察Barr小体；了解Barr小体数目与人类性别畸形的关系；了解异固缩现象 二、二、 实验原理：实验原理：• 巴氏小体是由于女性两个X染色体中的一个失活形成的 • Lyon的剂量补偿学说认为：女性虽然有两个X染色体，但所表达的绝大部分遗传物质，与只有1个X染色体的男性是一样多的 •1949年，Barr等在雌猫的神经元细胞中发现一种浓缩小体，称Barr小体而雄猫无•1955年，Barr在女性的口腔细胞中发现Barr小体•1959年，人们把性染色体异常造成的畸形与巴氏小体的研究联系起来•1971年， Barr小体被称为X染色质• 食道癌病人巴氏小体出现率低于10%；• 正常人细胞出现率为20-45% 女性的X染色体中只有1个保持活性，而另一个晚复制，没有活性该失活的X染色体在形态上呈异染色质状态，即DNA螺旋压的很紧，染色深而致密 XYXX •X染色质的失活只是部分失活，仍然有部分基因具有转录活性，目前已知的大约有十几个基因有活性。
•Barr小体的数目 = n-1 (n为X染色体数目) 性染色体类型巴氏小体数目正常男性XY0正常女性XX1Turner’s syndromeXO0Klinefelter’s syndromeXXY1超雌综合症XXX2 雌性染色体类型雄性染色体类型果蝇XXXY线虫XXXO雌性染色体类型雄性染色体类型果蝇XXXY线虫XXXO在果蝇中，雌性中的两条X染色体都有活性，而在雄性XY或XO中唯一的一条X染色体超活性;线虫的剂量补偿机制是在XX个体为雌雄同体，两条X染色的连锁基因的转录活性同时减弱，使之处于低活性状态，即每条X染色体基因的表达水平是单条X染色体（雄性中）的表达水平的一半，以便实现与雄性（XO）个体的，只具一条X染色体上连锁基因活性的剂量补偿 巴氏小体鉴别特征1.一般出现在细胞分裂周期的间期；2.直径为1μm左右；3.一般位于核膜内侧边缘；4.形状多样，多为半圆形，三角形等形状；5.材料不同，观察结果可能有不同，且必须和核仁区别开来（核仁往往离核膜较远或接近核中央部位） 3. 观察观察 •在女性间期细胞核内侧靠近核膜处有约在女性间期细胞核内侧靠近核膜处有约1微微米大小的反光极强的颗粒状亮点，即为巴米大小的反光极强的颗粒状亮点，即为巴氏小体。
材料不同，观察结果可能有不同，氏小体材料不同，观察结果可能有不同，且必须和核仁区别开来（核仁往往离核膜且必须和核仁区别开来（核仁往往离核膜较远或接近核中央部位）较远或接近核中央部位） 三、三、 实验材料：实验材料： 男、女性口腔颊部粘膜上皮细胞、头发根部的毛囊细胞 粘膜上皮细胞个体较大，容易观察，但易污染细菌等杂质； 头发毛囊细胞个体稍小，观察稍困难，优点是不受细菌污染四、四、 实验器具及用品：实验器具及用品： 实验器具：显微镜、载玻片、盖玻片、无菌牙签等 实验药品和试剂： 1、1N或5N盐酸，或浓盐酸和95％乙醇 1：1的混合液 2、改良苯酚品红染色液 五、五、 实验步骤实验步骤 ：：（一）口腔粘膜细胞Barr氏小体显示方法： 1、取材与固定取材与固定：实验前用可食用水漱口，然后以无菌牙签刮取口腔颊部粘膜(第一次的刮取物弃去)，将刮取物均匀涂于载玻片上，放在空气中干燥5-10min滴加1N盐酸水解3-5min水洗3次 2、染色与观察染色与观察：用改良苯酚品红染液染色1-2分钟，倾斜载玻片，倒掉染液。
用吸水纸轻轻擦拭干载玻片上的染液加盖玻片后放于显微镜下观察也可以考虑用Giemsa染色：用Gimsa染液染色8-10分钟，勿干燥，用水冲洗后，晾干，镜检 五、五、 实验步骤实验步骤 ：：（二）发根毛囊细胞Barr氏小体显示方法： 1、取材取材：取带有发根的头发，围绕发根部的1圈长2-3mm的白色物体，即是毛囊细胞团，将其放置于载片上在毛囊细胞处滴加一滴浓盐酸和95％乙醇1：1的混合液约10min以后，可使毛囊细胞得到充分软化以清水冲洗2-3遍，将酸解液冲洗干净拿起上述发根的梢部，将其上毛囊细胞轻轻蹭于另一干净载片上即可达到转移的目的 2、染色染色：可滴加1滴染液于待测细胞上，注意染液不可过多，以免细胞流失约2-3min后，加盖玻片即可进行观察 六、注意事项：六、注意事项：1. 在制备口腔粘膜细胞时，一定刮取细胞膜、核膜完整的、细胞核未解体的口腔粘膜细胞2. 取清洁的毛囊；一根发根的毛囊细胞可以转移到1-2张载片上，以达到充分利用实验材料的目的3.酸洗后，要将盐酸清洗干净4.染色时间不要太长，否则核质着色深，X染色质不易区分5. 低倍镜下检出典型的可数细胞，其标准是： -- 细胞周围无细菌污染； -- 细胞轮廓清楚、核膜清晰； -- 核无缺损；核染色清晰适度；核质呈网状或细颗粒状。
6. 今天需要使用油镜，用后请搽拭干净 七、实验结果和作业：七、实验结果和作业： 1. 分别观察50个男、女性可数的细胞，计算各自的 带有Barr小体的细胞所占的百分比 2. 在观察中画出1个典型细胞，标明Barr小体的部位八、思考题：八、思考题： 1．男性没有巴氏小体的理论基础 2．男变女的变性手术后，该女性有无巴氏小体？ 3．性别畸形的染色体模式可能有几种？ 2024/9/1517女性细胞1 2024/9/1518女性细胞2 2024/9/1519女性细胞3 讲座信息讲座信息题题 目：目：Imaging Life at High Spatiotemporal Resolution.讲座人讲座人：Eric Betzig时时 间：间：3月24日（周四）上午9:00-10:30题题 目：目：Wavefront Shaping for in vivo Brain Imaging.讲座人：讲座人：Na Ji时时 间：间：3月24日（周四）上午10:30-12:00地地 点：点：思明校区化学报告厅 。