种子生活力的快速测定种子生活力的快速测定种子生活力测定简介种子生活力测定简介种子发芽率种子发芽率是指在适宜的条件下、在规是指在适宜的条件下、在规定的时间内种子发芽的百分数定的时间内种子发芽的百分数它是衡量它是衡量种子品质种子品质的主要依据，在的主要依据，在确定确定播种量及种子生理研究播种量及种子生理研究方面具有重要的作方面具有重要的作用用用直接发芽的方法直接发芽的方法测定种子发芽率所需时间测定种子发芽率所需时间长，尤其是对于处于深度休眠状态的种子，几乎长，尤其是对于处于深度休眠状态的种子，几乎难以应用难以应用而利用而利用快速测定快速测定的方法，则能在的方法，则能在较短的时间较短的时间内测得种胚的生活力，以内测得种胚的生活力，以了解种子是否具有发芽了解种子是否具有发芽的潜力的潜力学习三种快速测定种子生活力的方法：学习三种快速测定种子生活力的方法：ⅠⅠ. .氯化三苯基四氮唑（氯化三苯基四氮唑（TTCTTC）法）法ⅡⅡ. .溴麝香草酚蓝法（溴麝香草酚蓝法（BTBBTB法）法） ⅢⅢ. .红墨水染色法红墨水染色法实验目的实验原理实验原理ⅠⅠ. .氯化三苯基四氮唑（氯化三苯基四氮唑（TTCTTC）法）法TTCTTC还原反应还原反应TTC（无色）TPF（红色）当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱 凡有生命活力的种胚，在呼吸过程中都有氧化还原反应种胚红色TTCTTC还原反应还原反应TTCTTC还原反应还原反应种胚染色不明显由染色程度推 知种子的生活 力强弱ⅡⅡ. .溴麝香草酚蓝法（溴麝香草酚蓝法（BTBBTB法）法）凡活细胞必进行呼吸作用，吸收凡活细胞必进行呼吸作用，吸收OO2 2、、放出放出COCO2 2，，CO2CO2溶于水成为溶于水成为H H2 2COCO3 3，，H H2 2COCO3 3解离成解离成H H＋＋和和HCOHCO3 3- -，使种胚周围环境的酸，使种胚周围环境的酸度增加，用溴麝香草酚蓝（度增加，用溴麝香草酚蓝（BTBBTB）可以测定）可以测定酸度的改变，从而确定种子的生活力。
酸度的改变，从而确定种子的生活力 活种子活种子BTBBTB呈呈黄色黄色（（6.06.0≤ ≤ pH pH＜＜7.17.1））BTBBTB呈绿色（呈绿色（pH=7.1pH=7.1））BTBBTB呈蓝色（呈蓝色（7.17.1≤ ≤ pH pH＜＜7.67.6））死种子或死种子或生活力较生活力较弱的种子弱的种子BTBBTB的变色范围为的变色范围为pH6.0pH6.0～～7.67.6ⅢⅢ. .红墨水染色法红墨水染色法凡有生活力的细胞其原生质膜均具有选凡有生活力的细胞其原生质膜均具有选择性吸收的能力，而死种子胚的细胞原生择性吸收的能力，而死种子胚的细胞原生质膜丧失这种能力，染料可以进入死细胞质膜丧失这种能力，染料可以进入死细胞，胚被红墨水染成红色，而活细胞则否胚被红墨水染成红色，而活细胞则否所以可根据种子胚部是否染色来判断种子所以可根据种子胚部是否染色来判断种子的生活力的生活力材料、设备与试剂材料、设备与试剂 1.材料玉米种子2.设备恒温箱；电子天平；烧杯；滤纸；漏斗； pH试 纸；培养皿（直径9cm）；单面刀片；眼科镊子；白 铁皮；棕色试剂瓶3.试剂（1） 0.5%TTC溶液。
避光保存，若溶液发红时不能 再用 （（2 2）） 0.1%BTB0.1%BTB溶液溶液；； （（3 3）） 琼脂琼脂；； （（4 4）） 0.1%BTB0.1%BTB琼脂凝胶琼脂凝胶：取：取0.1%BTB0.1%BTB溶液溶液100mL100mL置置 于烧杯中，加入于烧杯中，加入1.0 g1.0 g琼脂，用小火加热，并不断琼脂，用小火加热，并不断 搅拌，待琼脂完全溶解后，趁热倒入洁净的培搅拌，待琼脂完全溶解后，趁热倒入洁净的培 养皿中，使其成为一均匀的薄层（约养皿中，使其成为一均匀的薄层（约6~7mm6~7mm）） ，冷却后备用冷却后备用 （（5 5）） 5%5%红墨水红墨水：红墨水：红墨水5mL5mL；加自来水；加自来水95mL95mL方法与步骤方法与步骤1. 1.浸种浸种将玉米的新种子，用将玉米的新种子，用3030～～3535℃℃温水浸温水浸 种种24h24h，使其充分吸涨，以增强种胚的呼吸，使其充分吸涨，以增强种胚的呼吸速率2. 2.显色（染色）与观察显色（染色）与观察 ⅠⅠ. .氯化三苯基四氮唑（氯化三苯基四氮唑（TTCTTC）法）法显色显色 （（1 1）随机取吸涨的种子）随机取吸涨的种子2020粒，用单面刀片沿种胚中粒，用单面刀片沿种胚中 心线纵切为二半心线纵切为二半; ; （（2 2）将其中的一半置于培养皿中，将另一半在沸水）将其中的一半置于培养皿中，将另一半在沸水 中煮中煮5min5min杀死种胚，作同样处理（作为对照）杀死种胚，作同样处理（作为对照）; ; （（3 3）加入适量的）加入适量的0.5%TTC0.5%TTC溶液（以覆盖种子为度）溶液（以覆盖种子为度）; ; （（4 4）分别做标记）分别做标记; ; （（5 5）在）在4040℃℃的恒温箱中放置的恒温箱中放置30min30min。
观察观察倒出倒出TTCTTC溶液，再用清水将种子冲洗溶液，再用清水将种子冲洗1 1～～2 2次，次，然后进行观察，区分如下三种情况：然后进行观察，区分如下三种情况：（（1 1）活种子：胚全部或大部分被染成红色；）活种子：胚全部或大部分被染成红色；（（2 2）死种子：种胚不被染色；）死种子：种胚不被染色；（（3 3）不能正常发芽的种子：种胚中非关键性部位（）不能正常发芽的种子：种胚中非关键性部位（如子叶的一部分）被染色，而胚根或胚芽的尖端如子叶的一部分）被染色，而胚根或胚芽的尖端不染色ⅡⅡ. .溴麝香草酚蓝法（溴麝香草酚蓝法（BTBBTB法）法）显色显色（（1 1）取准备好的）取准备好的BTBBTB琼脂凝胶，在培养皿底部用记琼脂凝胶，在培养皿底部用记 号笔沿培养皿底部直径划线将号笔沿培养皿底部直径划线将BTBBTB琼脂凝胶二等琼脂凝胶二等 分；分； （（2 2）将吸涨的玉米种子）将吸涨的玉米种子1010粒，种子胚部向下整齐地粒，种子胚部向下整齐地 插入其中一半插入其中一半BTBBTB琼脂凝胶中（种子间距至少琼脂凝胶中（种子间距至少1cm1cm ）；）； （（3 3）用沸水杀死种子作同样处理插入另一半）用沸水杀死种子作同样处理插入另一半BTBBTB琼琼 脂凝胶中（作为对照），分别做好标记。
脂凝胶中（作为对照），分别做好标记 （（4 4）然后将培养皿置于）然后将培养皿置于4040℃℃下保温下保温40min40min观察观察在蓝色背景下观察，区分如下两种情况：在蓝色背景下观察，区分如下两种情况：（（1 1）活种子）活种子: : 种胚附近呈现深黄色晕圈；种胚附近呈现深黄色晕圈；（（2 2）死种子或生活力较弱的种子）死种子或生活力较弱的种子: : 种胚附近无深黄种胚附近无深黄色晕圈ⅢⅢ. .红墨水染色法红墨水染色法染色染色 （（1 1）） 取已吸涨的玉米种子取已吸涨的玉米种子2020粒，沿胚的中线切成粒，沿胚的中线切成 两半；两半； （（2 2）将一半置于培养皿中，加入）将一半置于培养皿中，加入5%5%红墨水（以淹红墨水（以淹 没种子为度），室温下染色没种子为度），室温下染色0.5min0.5min （（3 3）染色时间到后，倒去红墨水，用自来水冲洗多）染色时间到后，倒去红墨水，用自来水冲洗多 次，至冲洗液无色为止次，至冲洗液无色为止 （（4 4）） 用沸水杀死种子作同样处理（作为对照）用沸水杀死种子作同样处理（作为对照）分别做标记分别做标记。
观察观察区分如下两种情况：区分如下两种情况：（（1 1）活种子）活种子: : 胚不着色或着色很浅胚不着色或着色很浅; ;（（2 2）死种子）死种子: : 种胚的着色度和胚乳相同种胚的着色度和胚乳相同3. 3.记录及计算记录及计算统计上述统计上述3 3种方法胚部有生活力种子的数目，将种方法胚部有生活力种子的数目，将 观察判断结果记入下表（观察判断结果记入下表（P79 P79 ，表，表1-25-1 1-25-1 ）内，并求）内，并求 出发芽率出发芽率 项目项目方法方法种子名称种子名称供试粒数供试粒数/ / 个个有生活力有生活力 的种子粒的种子粒 数数/ /个个无生活力无生活力 的种子粒的种子粒 数数/ /个个有生活力有生活力 种子占供种子占供 试粒数的试粒数的 百分数百分数/%/%表1-25-1 种子生活力的快速测定记录表ⅠⅠ. .氯化三苯基四氮唑（氯化三苯基四氮唑（TTCTTC）法）法（1）TTC溶液最好现用现配，如要贮藏则必须放在棕色瓶中，并放在阴凉黑暗处，用完之后要回收2）显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中3）显色温度一般以25～35℃为宜，提高温度至40 ℃ ，可加快反应速度4）显色结束后要立即进行鉴定，放久会褪色。
5）不同作物种子发芽率的测定，所用试剂的浓度、染色时间、浸泡时间均不同注意事项1. 1.琼脂凝胶不能太厚或太薄琼脂凝胶不能太厚或太薄2. 2.种子胚部一定要插入琼脂凝胶培养基中种子胚部一定要插入琼脂凝胶培养基中3. 3.可提高温度至可提高温度至4040℃℃以缩短反应时间以缩短反应时间ⅡⅡ. .溴麝香草酚蓝法（溴麝香草酚蓝法（BTBBTB法）法）ⅢⅢ. .红墨水染色法红墨水染色法（（1 1）染色时要使漂浮的种子全部浸入红墨水中染色时要使漂浮的种子全部浸入红墨水中2 2）染色温度一般以）染色温度一般以2525～～3535℃℃为宜，为宜，提高温度至提高温度至4040℃℃ 可缩短反应时间可缩短反应时间3 3）染色时间不能太长，因膜透性具有相对性，染）染色时间不能太长，因膜透性具有相对性，染色后一定要反复冲洗才可以观察色后一定要反复冲洗才可以观察。