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谷物淀粉含量的测定(旋光法)

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谷物淀粉含量的测定(旋光法)_第1页
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谷物淀粉含量的测定(旋光法)淀粉(starch)是植物的主要贮藏物质,大部分贮存于种子、块根和块茎中淀粉不仅是重要的营养物 质,并且在工业上的应用也很广泛测定谷物中淀粉的含量对于鉴定农产品的品质和改进农业生产技 术有很大的意义 一、原理: 酸性氯化钙溶液与磨细的含淀粉样品共煮,可使淀粉轻度水解同时钙离子与淀粉分子上 的羟基络合,这就使得淀粉分子充分地分散到溶液中,成为淀粉溶液淀粉分子具有不对称碳原子, 因而具有旋光性,可以利用旋光仪测定淀粉溶胶的旋光度(α) ,旋光度的大小与淀粉的浓度成正比, 据此可以求出淀粉含量溶提淀粉溶胶所用的酸性氯化钙溶液的 pH 值必须保持 2.30,密度须为 1.30,加时间的长短也要控制在一定范围因为只有在这些条件下,各种不同来源的淀粉溶液的比旋 度[α]才都是 203°,恒定不变样品中其他旋光性物质(如糖分)须预先除去 二、材料、仪器设备及试剂: (一)材料:面粉或其他风干样品 (二)仪器设备:1. 植物样品粉碎机;2. 离心机;3.分析天平;4. 粗天平;5. 旋光仪及附件;6. 三 角瓶;7. 分样筛(100 目) ;8. 布氏漏斗、抽滤瓶及真空泵;9. 离心管;10. 小电炉。

(三)试剂: 三、实验步骤: 1. 样品准备: (1)称取样品:将样品风干、研磨、通过 100 目筛,精确称取约 2.5g 样品细粉(要求含淀粉约 2g, 请参考附注估计) ,置于离心管内 (2)脱脂:加乙醚数 ml 到离心管内,用细玻棒充分搅拌,然后离心倾出上清液并收集以备回收乙 醚重复脱脂数次,以去除大部分油脂、色素等(因油脂的的存在会使以后淀粉溶液的过滤困难) 大 多数谷物样品含脂肪较少,可免去这个脱脂手续 (3)抑制酶活性:加含有氯化高汞的乙醇溶液 10ml 到离心管内,充分搅拌,然后离心,倾去上清液, 得到残余物 (4)脱糖:加 80%乙醇 10ml 到离心管中,充分搅拌以洗涤残余物(每次都用同一玻棒) ,离心,倾 去下清液重复洗涤数次以去除可溶性糖分2. 溶提淀粉: (1)加醋酸-氯化钙:先用醋酸氯化钙溶液约 10ml 加到离心管中,搅拌后全部倾入 250ml 三角瓶内, 再用醋酸氯化钙溶液 50ml 分数次洗涤离心管,洗涤液并入三角瓶内,搅拌玻棒也转移到三角瓶内 (2)煮沸溶解:先用蜡笔标记液面高度,直接置于加有石棉网的小电炉上,在 4min~5min 内迅速煮 沸,保持沸腾 15min~17min,立即将三角瓶取下,置流水中冷却。

煮沸过程中要时加搅拌,勿令烧焦; 要调节温度,勿使泡沫涌出瓶外;常用玻璃将瓶侧的细粒擦下;并加水保持液面高度 3. 沉淀杂质和定容: (1)加沉淀剂:将三角瓶内的水解液转入 100ml 容量瓶,用醋酸氯化钙溶液充分洗涤三角瓶瓶,并入 容量内,加 30%ZnSO41ml 混合后,再加 15%K4Fe(CN)61ml,用水稀释至接近刻度时,加 95%乙 醇一滴以破坏泡沫,然后稀释到刻度,充分混合,静置,以使蛋白充分沉淀 (2)滤清:用布氏漏斗(加一层滤纸)吸气过滤先倾清溶液约 10ml 于此滤纸上,使其完全湿润, 让溶液流干,弃去滤液,再倾清溶液进行过滤,用干燥的容器接受此滤液,收集约 50ml,即可供测定 之用4. 测定旋光度:用旋光测定管装满滤液,小心地按照旋光仪使用说明,进行旋光度的测定淀粉 (%)=α×N×100/{[α]20D×L×(W-K)}×100 式中:α:用钠光时观测到的旋光度;[α]20D:淀粉的比旋度,在这种方法条件下为 203°; L:旋光管长度(cm) ;W:样品质量(g) ;K:样品水分含量(%) ;N:稀释倍数;100:换算为百 分率也可以不用上列公式计算,改用工作曲线来求得淀粉含量,这样准确度高些。

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