［摘要］:0的:研究人孔树脂分离纯化甘草总黄酮的最佳树脂和最冇工艺，为甘草总黄酮 的工业化生产提供实验依据方法：分别对DS-401、D-101、AB-8、HPD-100四种大孔 树脂进行静态吸附、静态解吸实验筛选用于甘草总黄酮分离的最佳树脂，采用紫外分 光光度法测定总黄酮质量浓度，以总黄酮吸附率、洗脱率、收率、纯度等指标评价AB- 8人孔树脂分离纯化甘草总黄酮工艺种上样量、上样液质量浓度、吸附流速、洗脱剂乙 醇体积分数极其用量对吸附和解吸效果的影响，从而确定最佳工艺结果：AB-8型大 孔树脂为分离甘草黄酮类组分最佳树脂，其分离的最佳工艺为：总黄酮浓度为9.20mg*mL的样液，吸附流述为2ml*mirf，洗脱剂50%乙醇用量为4倍树脂体积，利用该 工艺精制后的干草总黄酮纯度和收率分别为74.45%、35.31%结论：获得的样品总黄 酮纯度达70 %以上，但收率较低，综合各方方面因素，该工艺简单可［关键字］甘草；总黄酮；分离纯化；大孔树脂AbstractAbstract: Objective: To study the optimum macroporous resin separation and purification of total flavonoids from licorice resin and the process, to provide the experimental basis for the industrial production of flavonoids. Methods: DS-401, D-101, AB-8, HPD-100 four kinds of macroporous resin by static adsorption, static desorption experiment screening for licorice flavonoids isolated optimal resin, total flavonoids was determined by UV spectrophotometry, mass concentration, with total flavonoids adsorption, elution rate, yield, purity and evaluation AB-8 macroporous resin separation and purification of total flavonoids of Glycyrrhiza process for the sample volume, sample solution concentration, the velocity of adsorption, elution volume fraction of ethanol extremely dosage on the adsorption and desorption effect, so as to determine the optimum process. Result: the AB-8 macroporous resin for separation of licorice flavonoid components the best resin, the optimum process for the separation of the total flavonoid concentration of sample solution: 9.20 mg • mL-1, adsorption velocity is 2ml* min-1, 50% ethanol elution agent amount was 4 times of resin volume, the purification process of total flavonoids purity of hay and the yield were 74.45%, 35.31%. Conclusion: the total flavone of sample purity was more than 70%, but the yield is low, the parties to the comprehensive factors, the process is simple and can be.keyword licorice; flavonoids; separation and purification; macroporous resin 引言甘草（Radix Glycyrrhiza）为豆科植物的干燥根及根茎［11。
甘草含冇多种化学成分，主要成分有甘草酸、甘草黄酮类等甘草黄酮类化合物具有抗肿瘤、抗心律失 常、抗溃疡、保肝、解痉、抗菌、抗炎和抗变态反应、抗氧化、酶抑制、调血脂、镇 痛、镇咳祛痰等多种生物活性I17221,被广泛应用于医药、保健及美容等行业传统的总黄酮分离纯化方法冇萃取法、柱层析法、铅盐沉淀法等随着社会的发展，大孔树脂吸附法成为近年来的较新分离纯化方法，与传统方法相比，采用大孔树脂分 离提纯甘草总黄酮具有吸附性好、效率高、再生简便、成本低、洗脱剂毒性小使用周 期长等优点，被广泛用于天然产物的富集和分离I241王芸芸1141等以膜通量为指标讨论了不同温度、压力、吋间、浓度下膜通量的变化，确 定了在0.6Mp, 25-30C,提取液浓度在原液基础稀释3倍后，操作30min冇较大膜通 量本试验拟研究大孔树脂分离纯化甘草总黄酮的动态吸附-解吸条件，并进行工艺验 证试验，综合确定较优工艺参数，为生产高纯度甘草总黄酮工业化生产提供试验参 考1. 材料与方法1.1 材料与仪器材料：市售甘草、芦丁标准品、各型大孔树脂（DS-401、D-101、AB-8、HPD-100）、 显色剂（5%亚硝酸钠、10%偏铝酸钠、4%氢氧化钠）以及其他化学试剂。
仪器：T6新悦可见光分光光度计（北京普析）；SHB-3循环水多用真空泵（郑州杜甫 仪器厂）；SB-HOO水浴锅，（上海爱明仪器）；RE—52CS型旋转蒸发仪（上海亚荣 生化仪器厂）；FA1604型电子天平（上海箐海仪器冇限公司）；FZ102型粉碎机（上海洪 纪仪器设备有限公司）1.2 实验方法1.2.1标准曲线的绘制［|\精密称取芦丁样品5.00mg,置50ml容量瓶中，加适量30%乙醇置水浴锅上加热溶 解，冷却后用30%乙醇定容至刻度，摇匀准确量取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0ml上述溶液分别置于10ml容量瓶中，各加蒸馏水补 充至5.0ml,然后加5%亚硝酸钠溶液0.3ml摇匀，放置6min;加10%硝酸铝溶液 0.3ml摇匀，放置6min;再加4%氢氧化钠溶液4.0ml,用蒸馏水定容至10ml摇匀，放 置15min,以同法作空白对照；置比色皿中在波长510nm处测定吸光度再以吸光度 值A为纵坐标，芦丁含量C （mg-ml1）为横坐标，绘制标准曲线见附表1所得冋归曲 线方程为 Y=0.008X+0.0001，r2=0.99991.2.2供试液的制备及树脂预处理1） 供试液的制备。
将甘草粉碎，过40 0筛称取适量粉碎样，置于150ml烧瓶 中，加80%的乙醇，以固液比1:20 （W/V，g:ml）温度80C,时间每次2h,次数2次 进行冋流提取，提取液合并、过滤即得供试液2） 树脂的预处理参见潘见161等、李玉霞1161的方法并根据实际情况有所改进先用 体积分数91%乙醇浸泡，使树脂充分溶胀，再用体积分数为91%乙醇，洗至流出液加 适量蒸馏水无白色浑浊，用蒸馏水洗尽乙醇，加入4倍体积8% （2mobLd）的NaOH 溶液浸泡12h,并以水洗至中性，再加入4倍体积的HC1溶液浸泡 12h，并以水洗至中性，备用1.2.3树脂的筛选（1）静态吸附率的测定用量简量取预处理好的DS-401型、D-101型、AB-8型、HPD-100型树脂各10ml并称其干重，精密移取40ml精测质量浓度为11.20 的供试液，静置24h使其饱和吸附，吸取上层清液测定总黄酮浓度，按以下公式计算树 脂饱和吸附量和吸附率吸附量（mg/g） =（C原液-C齡）xV上样/树脂干重，吸附率=（C原液-C齡）xV上样/C V原液（2） 静态解吸率的测定将静态饱和吸附总黄酮后的树脂滤出，洗去表面黄酮液，吸干表面水分，精密加入90%乙醇40ml,静置24h,吸取上清液测定洗脱液总黄酮浓 度，按以下公式计算洗脱率。
洗脱率=（洗脱液浓度x洗脱液体积）/饱和吸附量 xlOO%171（3） 比较四种大孔树脂对甘草总黄酮的吸附率和解吸率，选择最佳大孔树脂1.2.4 AB-8型人孔树脂动态吸附-解吸影响因素的考察（1） 上样液质量浓度的考察以AB-8型大孔树脂为甘草总黄酮纯化载体，采用湿法 装柱层析柱规格（2cmx25cm），装柱15cm取总黄酮浓度为11.20 mg^ml/1、9.20 mg.mL1、7.20 mg.mL1、5.20 mg*mL-1、3.20 mgemL_ 1 的样液各 40ml 以 2 ml.min1 流 速，分别加入5根同样的树脂柱中，收集残液，10ml—份，测定总黄酮质量浓度计算 吸附率，根据吸附率确定最佳上样浓度2） 上样液用量的考察将甘草提取液（总黄酮质量浓度为9.20mg*mlJ）以2 mbmin1流速通过15 mlAB-8型大孔树脂柱进行动态吸附，收集每一大孔树脂流出液（10 ml/份），测定总黄酮质量浓度，以流出体积为横坐标，流出液质量浓度为纵坐 标，绘制泄漏曲线，根据泄漏点（即流出液质量浓度是上样液质量浓度的10%吋上样 液用量）1141确定上样液用量3） 吸附流速各取220ml甘草总黄酮（9.20 mg^mL1）溶液分别以1 mhmirf1、2 mhmirf1、3 mhmirf1流速通过15ml AB-8型大孔树脂柱中，收集每一流出液，测定总 黄酮质量浓度，根据泄漏点及泄漏率人小确定最佳吸附流速。
4） 洗脱剂乙醇体积分数用15ml AB-8大孔树脂柱分别饱和吸附甘草总黄酮溶 液，再分别以10%、30%、50%、70%、90%的乙醇洗脱，测定洗脱剂总黄酮质量浓度，根据洗脱率人小确定乙醇最佳体积分数5) 洗脱剂乙醇用量用15ml AB-8大孔树脂饱和吸附甘草总黄酮溶液，再用体积 分数为50%的乙醇150ml洗脱，每15ml收集一次，分别测定各份总黄酮质量浓度， 计算总黄酮洗脱率，根据累计洗脱率确定乙醇用量1.2.5 AB-8大孔树脂精制甘草总黄酮的工艺验证在上述实验确定的最佳吸附、解吸条件下，进行AB-8大孔树脂精制甘草总黄酮试验 收集体积分数为50%乙醇洗脱液，测定总黄酮质量浓度，然后减压浓缩至膏状，取出 并在105 QC烘干箱中烘干，称其干膏质量重复3次，计算平均值、收率和纯度1.3 检査指标及方法[7]1.3.1总黄酮质量浓度参照文献191的方法，以芦丁为标准品，配制芦丁标准溶液，梯度稀释利用紫外分光光度 法分别测其对应吸光度，以吸光度值(A)为横坐标，甘草总黄酮质量浓度(C)为纵 坐标，绘制标准曲线，得冋归方成程Y=0.008X+0.0001，r2=0.99991.3.2总黄酮收率总黄酮收率采用以下公式计算：总黄酮收率％= (CxV) / (C!xVi)xl00% (C和V分别为洗脱液中总黄酮的质量浓度 和洗脱液体积，CjUV,分别为吸附前溶液总黄酮的质量浓度和溶液体积)。
1.3.3总黄酮纯度总黄酮纯度采用以下公式计算：总黄酮纯度％= (CxV) /WxlOO%(C和V分别为洗脱液中总黄酮质量浓度和洗脱液体积，W为干膏质量。