食品中亚硝酸盐的测定

食品中亚硝酸盐的测定(分光光度法)一、 实验目的1. 明确亚硝酸盐在食品中的作用以及限量标准2. 掌握盐酸萘乙二胺法测定食品中亚硝酸盐的原理、操作步骤、注意事项二、 实验原理样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸 重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色的染料，最大吸收波长538nm下测 吸光度值A,与标准系列比较定量三、仪器1. 722分光光度计若干，提前20min打开预热2.组织绞碎机，菜力，砧板1-2套3. 50mL烧杯500mL烧杯3L大烧杯2个/组1个/组2个4.电炉2个5.托盘天平1个/组6. 200mL容量瓶500mL容量瓶1个1个/组7.恒温水浴锅1-2个8. 25mL具塞比色管11个/组9.滴管，漏斗，滤纸，吸小球，1个/组10.玻璃棒，温度计，标记笔，标签纸若干四、试剂(所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂)1.亚铁氰化钾溶液：称取106.0g亚铁氰化钾[K Fe (CN)-3H O]，用水溶解后，稀释至1000mL4 6 2分装，1瓶/大 组2 .乙酸锌溶液:称取22.0g乙酸锌[Zn(CH3C00)2 -2H20], 加3 mL冰乙酸溶于水，并稀释至100mL。

分装，1瓶/大 组3、饱和硼砂溶液：称取5.0g硼酸钠(Na2B07 -10H20), 溶于100 mL热水中，冷却后备用分装，1瓶/大 组4、对氨基苯磺酸溶＞(4g/L):称取0.4 g对氨基苯磺酸， 溶于100 mL 20%的盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保分装，1瓶/大 组存上层脂 肪用滴 管吸除5、盐酸萘乙一胺溶液（2g/L）:称取0.2克盐酸萘乙一 胺，溶于100mL水中，避光保存有致癌作用分装，1瓶/大 组6、亚硝酸钠标准溶液（0.2g/L）:精密称取0.1000g于 硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入 500ml容量瓶中，并稀释至刻度此溶液每ml相当于 200昭亚硝酸钠分装，1瓶/大 组7、亚硝酸钠标准使用液（昭/mL）:临用前，吸取0.2 gL 亚硝酸钠标准溶液，置于200 mL容量瓶中，加水稀释 至刻度，此溶液每mL相当于5袈亚硝酸钠分装，1瓶/大 组8.蒸馏水1瓶/组五、实验步骤1、样品的处理：（1） 取样：准确称取5.0 g经绞碎、混匀的样品，置于50mL烧杯中2） 沉淀蛋白质：①加硼砂饱和溶液，搅拌均匀，以70^左右的水约300mL 将样品洗入500mL容量瓶中，置沸水浴中加热15min,取出后冷却至室温。

②一 面转动一面加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加A5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋 白质（3） 过滤：加水定容，放置，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去 初滤液30mL，滤液备用2标准曲线的绘制和样品的测定取10个25m l具塞比色管，标号，按下列步骤操作：管号 样012345678标准溶液（ml）相当业硝酸钠（咫）对氨基苯磺酸（ml） 各管均加1ml （混匀，静置3-5min）盐酸萘乙二胺(ml)管号012345678样液试剂空白A 538六、数据记录结果保 留2位 有效数 字各管均加加水至刻度（25 ml ），混匀，静置15min，以零管调节零点，于波长538nm 处测吸光度A,绘制标准曲线同时做试剂空白七、数据处理按下式计算： A ????????????????X =? X 1000?????????????????????????? v ??????????????? m X X 1000V 1式中：X一试样中亚硝酸盐的含量，mg/kg；V —试样处理液总体积，mL； 1V2—测定用样液体积，mL； m—试样质量，g；A一试样测定液中亚硝酸盐的质量，袈；部分食品中亚硝酸盐的限量标准（以 NaNO计） 2品名 限量标准mg/kg食盐（精盐）、牛乳粉 ^2香肠（腊肠）香肚、酱腌菜、广式腊 肉 <20鲜肉类、鲜鱼类、粮食 <3肉制品、火腿肠、灌肠类 <30蔬菜 <4其他肉类罐头、其他腌制罐头 <50婴儿配方乳粉、鲜蛋类 <5西式蒸煮、烟熏火腿及罐头、西式火腿罐头 <70八、 注意事项1、 盐酸萘乙二胺有致癌作用2、 显色后稳定性与室温有关，一般显色温度为15〜30 °C时，在20〜30min内比色 为好。

3、 硼砂饱和液的作用：①吸收亚硝酸盐的NO2,使亚硝酸盐的总量不会因加 热而减少；②蛋白质沉淀剂4、 亚铁氰化钾溶液和乙酸锌（可用硫酸锌代替）作用：蛋白质沉淀剂原因： 亚铁氰化钾溶液和乙酸锌反应，生成亚铁氰化锌沉淀，从而与蛋白共沉淀5、 清液用滤纸过滤后，要弃去初滤液30ml原因：滤纸中含有少量铉盐，弃去 初滤液是为了除去滤纸中铉盐的干扰九、 讨论。