GB 8270-XXXX中 华 人 民 共 和 国国家卫生和计划生育委员会 发布中华人民共和国国家标准××××-××-××实施201×-××-××发布食品安全国家标准食品添加剂 甜菊糖苷（征求意见稿）GB 8270—××××1前 言本标准代替GB 8270-1999《食品添加剂 甜菊糖甙》本标准与GB 8270-1999 相比，主要变化如下：——修改了标准名称；——修改了标准结构；——修改了结构式、分子式和相对分子质量等相关内容；——取消了理化指标中的等级要求，统一指标；——修改了鉴别试验；——修改了理化指标中甜菊糖苷含量、灼烧残渣和干燥减量指标；——删除了理化指标中甜度、比旋光度、比吸光度和重金属指标；——增加了铅、甲醇和乙醇指标食品安全国家标准食品添加剂 甜菊糖苷1 范围本标准适用于以甜叶菊（Stevia Rebaudiana Bertoni）干叶为原料，经提取、精制而得的食品添加剂甜菊糖苷主要糖苷为甜菊苷和瑞鲍迪苷A，其他已知糖苷包括瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷及甜菊双糖苷2 分子式、结构式和相对分子质量2.1 主要糖苷的分子式甜菊苷：C38H60O18瑞鲍迪苷A：C44H70O232.2 9种糖苷的结构式化合物名称R1位取代基R2位取代基中文英文甜菊苷Steviosideβ-Glcβ-Glc-β-Glc(2→1)瑞鲍迪苷ARebaudioside Aβ-Glcβ-Glc-β-Glc(2→1)β-Glc(3→1)瑞鲍迪苷BRebaudioside BHβ-Glc-β-Glc(2→1)β-Glc(3→1)瑞鲍迪苷CRebaudioside Cβ-Glcβ-Glc-α-Rha(2→1)β-Glc(3→1)瑞鲍迪苷DRebaudioside Dβ-Glc-β-Glc(2→1)β-Glc-β-Glc(2→1)β-Glc(3→1)瑞鲍迪苷FRebaudioside Fβ-Glcβ-Glc-β-Xyl(2→1)β-Glc(3→1)杜克苷ADulcoside Aβ-Glcβ-Glc-α-Rha(2→1)甜茶苷Rubusosideβ-Glcβ-Glc甜菊双糖苷SteviolbiosideHβ-Glc-β-Glc(2→1)2.3 主要糖苷的相对分子质量甜菊苷：804.88（按2007年国际相对原子质量）瑞鲍迪苷A：967.03（按2007年国际相对原子质量）3 技术要求3.1 感官要求：应符合表1 的规定。
表1 感官要求项 目要 求检验方法色泽白色至浅黄色取适量试样置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下观察其色泽和状态状态粉末或晶体3.2 理化指标：应符合表2的规定项 目指 标检验方法甜菊糖苷含量（以干基计），w/%≥85附录A中A.3灼烧残渣，w/%≤1GB 5009.4干燥减量，w/%≤6GB 5009.3直接干燥法a铅（Pb）/（mg/kg）≤1GB 5009.12 总砷（以As计）/（mg/kg）≤1GB/T 5009.11甲醇/（mg/kg）≤200附录 A中A.4乙醇/（mg/kg）≤5000a干燥温度和时间分别为105 ℃±2 ℃和2 h表2 理化指标附 录 A检验方法 A.1 一般规定本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682—2008中规定的三级水试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的规定制备试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液A.2 鉴别试验A.2.1 甜菊苷和瑞鲍迪苷A试验在甜菊糖苷含量试验中，试样溶液的液相色谱图中甜菊苷和瑞鲍迪苷A两个主峰应与混合标准溶液的色谱图相对应。
A.2.2 试样溶液的pH称取1 g试样，溶于100 mL水中，用酸度计测定试样溶液的pH在4.5～7.0A.3 甜菊糖苷含量的测定 A.3.1 方法一A.3.1.1 试剂和材料A.3.1.1.1 乙腈：色谱纯A.3.1.1.2 磷酸二氢钠：色谱纯A.3.1.1.3 磷酸：色谱纯A.3.1.1.4 水：GB/T 6682—2008中规定的一级水A.3.1.1.5 乙腈水溶液：乙腈和水的体积比为30∶70A.3.1.1.6 磷酸钠缓冲液（pH 2.6）：称取1.20g磷酸二氢钠（NaH2PO4），溶于800 mL水中，用磷酸调节pH至2.6，用水稀释至1000 mLA.3.1.1.7 甜菊苷标准品：甜菊苷含量（质量分数，以干基计）≥99.0%A.3.1.1.8 其他8种糖苷标准品：瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷。
A.3.1.2 仪器和设备高效液相色谱仪：配备紫外检测器，或其他等效的检测器A.3.1.3 参考色谱条件A.3.1.3.1 色谱柱： C18反相色谱柱，250 mm×4.6 mm，粒径5 μm；或其他等效的色谱柱A.3.1.3.2 流动相：乙腈:磷酸钠缓冲液=32:68A.3.1.3.3 流动相流速：1.0 mL/minA.3.1.3.4 检测波长：210 nmA.3.1.3.5 进样量：2 μL~10 μLA.3.1.3.6 柱温：40 ℃A.3.1.4 分析步骤A.3.1.4.1 混合标准品溶液的制备分别称取适量甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷标准品，置于同一个容量瓶中，用乙腈水溶液完全溶解后定容，得到混合标准品溶液混合标准品溶液用于确定9种糖苷的相对保留时间A.3.1.4.2 标准溶液的制备分别称取0.05 g甜菊苷标准品和瑞鲍迪苷A标准品，精确至0.001g，分别置于50 mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度，得到甜菊苷标准溶液和瑞鲍迪苷A标准溶液A.3.1.4.3 试样溶液的制备称取0.05 g~0.1 g试样，精确至0.001g，置于50 mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度，得到试样溶液。
A.3.1.5 测定在A.3.1.3参考色谱条件下，分别对混合标准品溶液、标准溶液和试样溶液进行色谱分析将试样溶液的色谱图与混合标准品溶液的色谱图相比较，以确定试样溶液色谱图中各组分对应的峰记录试样溶液色谱图中甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷的峰面积及标准溶液色谱图中甜菊苷和瑞鲍迪苷A的峰面积A.3.1.6 结果计算瑞鲍迪苷A含量（以干基计）的质量分数wa按公式（A.1）计算：…………………………（A.1）式中：mR——瑞鲍迪苷A标准溶液中瑞鲍迪苷A的质量（以干基计），单位为毫克（mg）；m——试样溶液中试样的质量（以干基计），单位为毫克（mg）；Aa——试样溶液色谱图中瑞鲍迪苷A的峰面积值；AR——瑞鲍迪苷A标准溶液色谱图中瑞鲍迪苷A的峰面积值其他8种糖苷含量（以干基计）的质量分数wi按公式（A.2）计算：……………………（A.2）式中：i——s、b、c、d、f、da、ru、sb，分别对应甜菊苷、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷；mS——甜菊苷标准溶液中甜菊苷的质量（以干基计），单位为毫克（mg）；m——试样溶液中试样的质量（以干基计），单位为毫克（mg）；fi——i组分与甜菊苷的式量比值： 1.00（甜菊苷）、1.00（瑞鲍迪苷B）、1.18（瑞鲍迪苷C）、1.40（瑞鲍迪苷D）、1.16（瑞鲍迪苷F）、0.98（杜克苷A）、0.80（甜茶苷）、0.80（甜菊双糖苷）； Ai——试样溶液色谱图中i组分的峰面积值；AS——甜菊苷标准溶液色谱图中甜菊苷的峰面积值。
由上述公式（A.1）和（A.2）计算得到9种组分的含量wa、ws、wb、wc、wd、wf、wda、wru和wsb，取各组分含量之和即为试样中甜菊糖苷含量A.3.2 方法二A.3.2.1 试剂和材料A.3.2.1.1 乙腈：色谱纯A.3.2.1.2 磷酸二氢钠：色谱纯A.3.2.1.3 磷酸：色谱纯A.3.2.1.4 水：GB/T 6682—2008中规定的一级水A.3.2.1.5 乙腈水溶液：乙腈和水的体积比为30∶70A.3.2.1.6 磷酸钠缓冲液（pH2.6）：称取1.20 g磷酸二氢钠（NaH2PO4），溶于800 mL水中，用磷酸调节pH至2.6，用水稀释至1000 mLA.3.2.1.7 甜菊苷标准品：甜菊苷含量（质量分数，以干基计）≥99.0%A.3.2.1.8 瑞鲍迪苷A标准品：瑞鲍迪苷A含量（质量分数，以干基计）≥99.0%A.3.2.1.9 其他7种糖苷标准品：瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷A.3.2.2 仪器和设备同A.3.1.2A.3.2.3 参考色谱条件同A.3.1.3A.3.2.4 分析步骤A.3.2.4.1 混合标准品溶液的制备分别称取适量甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷标准品，置于同一个容量瓶中，用乙腈水溶液完全溶解后定容，得到混合标准品溶液。
混合标准品溶液用于确定9种糖苷的相对保留时间A.3.2.4.2 标准溶液的制备称取0.05 g甜菊苷标准品，精确至0.001g，置于50 mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度，得到甜菊苷标准溶液A.3.2.4.3 试样溶液的制备称取0.05 g~0.1 g试样，精确至0.001g，置于50 mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度，得到试样溶液A.3.2.5 测定在A.3.2.3参考色谱条件下，分别对混合标准品溶液、标准溶液和试样溶液进行色谱分析将试样溶液的色谱图与混合标准品溶液的色谱图相比较，以确定试样溶液色谱图中各组分对应的峰记录试样溶液色谱图中甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷的峰面积及标准溶液色谱图中甜菊苷的峰面积A.3.2.6 结果计算9种糖苷含量（以干基计）的质量分数wi按公式（A.3）计算：……………………（A.3）式中：i——s、a、b、c、d、f、da、ru、sb，分别对应甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷。