正相、反相和极性胶联柱使用手册注意此色谱柱填充的是改性硅胶材料向柱内导入碱性溶剂（pH>7.0）或酸性溶剂（pH<2.0）会 导致柱子损坏在使用这个柱子之前，你要充分地熟悉这本手册讲述的内容未正确地使用 不能享受保修待遇1. 简介此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶硅胶形态的柱子用于正相（非 水）条件反相（C8, C18, ODS, RP-8和RP-18）通常用于反相条件（水相）极性胶联型（APS, diol, CN和NH2）依照应用目的，可以用于正相和反相条件建议不要将 一个相同的柱子用于差别非常大的条件下，这是因为柱子在特定的条件下，固定相的性质会 发生变化，所以在其他的条件下，会影响柱效也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将反 相柱用在正相条件下，这是因为这种过程会发生重复性差的问题（每一次注射之间和柱与柱 之间的比较）2. 色谱柱老化在开始分析工作以前，柱子必须经过正确的老化一个没有正确老化的柱子可能会带来问题， 诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等A. 在反相条件下老化要老化这类柱子，首先要使用乙腊或者甲醇淋洗，然后你选用的洗脱液进行平衡在发货以前，每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗） 如果流动相中使用了添加物（例如缓冲液或离子对试剂），建议使用正确比例的但不含此添加 物的流动相进行缓冲冲洗缓冲冲洗应当首先以低流速进行，最后再使用正常流速B. 在正相条件下老化柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响柱子的干燥（激活）或润湿（失活）可能是需 要的使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷C. 对于极性键合柱的特殊说明由于这些柱子可以用于反相或者正相条件，在进行老化以前，一定要首先检查你要使用的淋 洗溶剂或洗脱液是否可以与封装在柱子里的溶剂相混溶如果这些溶剂不能混溶，必须先使 用一个合适的缓冲溶剂进行冲洗3. 洗脱液注意第1节和第2节一定不要使用pH低于2或者高于7的缓冲液，这是由于它们会改变固 定相的性质极性键合柱最好使用在3到5之间在使用以前，洗脱液要进行脱气，以及使 用0.5微米的滤膜过滤，以免发生检测和泵送问题一定要在开始使用系统以前检查水溶液中有否微生物生长，否则你的柱子会堵塞，柱压会升 高到无法接受的水平4・ 流量和压力柱内径（毫米）流速(ml/min)最佳最高2.00.21.03.00.42.04.61.04.010.04.718.0注意：最高压力：不锈钢柱：4500psi；玻璃柱：3000psi增加流速或者降低流速要采取小的间隔变化以防止填充床的扰动。
如果你想更换柱子，要降低流量至0,等待洗脱液完全流出柱子为止（2分钟）拆除柱子而没有等待压力的降低会损坏柱子高柱压的产生一般是由于不正确地使用柱子的结果使用保护柱（见第6节）会防止污染物沉积在分析柱上5・ 样品准备保持柱子长寿的关键是进样前适当的的样品处理你必须防止将疏水性/与流动相极性差别很 大的化合物泵入色谱柱，不管是来自流动相还是样品特别地，要禁止导入颗粒杂质这些 最终都会造成操作压力的增高而且非常困难或者不可能去除6. 保护柱一定要使用保护柱，因为样品和洗脱液污染可能会造成柱压力的增高而且影响选择性一般 保护柱的选择以同型号为原则，这样柱子的填充材料与用于分析的色谱柱的材料相似当柱 压增高的或者观察到柱效降低的时候就需要更换保护柱了7. 进样量和浓度柱子的最大载样量取决于：柱子的型号，使用的条件和样品的类型很难给出一个一般的指 示对于进样体积的建议则比较容易（见表中的典型值）注射了太大体积或太浓的样品会使峰展宽或者峰融合2 2柱尺寸（长度*内径）最大样品体积250X2.0mm±10ul200 X 3.0mm+ 15ul250X4.6mm+ 50ul250X 10.0mm±250 ul8. 温度HPLC柱最好在柱温箱中使用。
重复性取决于温度控制最佳的温度与特定的应用有关温度 影响洗脱液流动的线速度在使用ChromSep玻璃柱的时候，一定要调节流速使压力保持在 3000psi 以下9. 贮存一定不要在柱子内充满缓冲液或者其他含盐类的洗脱液的情况下贮存色谱柱贮存溶剂应当 含有至少20%的有机溶剂，以防止有细菌的生长10. 柱效损失的可能原因1. 额外的峰展宽当使用小直径或者长度较短的柱子时，峰展宽的情况可能比较明显要 保证管路的长度和内径都保持最小检查进样体积和检测器检查池体积是否适用于柱体积2. 洗脱的平衡时间不够3. 不正确柱温4. 不正确的修正浓度5. 床压缩使用了过大的洗脱流速将柱子反向，使用低流速11. 柱效丧失和/或高背压1. 颗粒物积聚在烧结物或者树脂床上（它们都会使背压增高）如果柱压增高了，将柱 子与进样器断开，运行泵，以验证背压的来源确实是来自柱子的颗粒污染（样品、洗脱液和 系统）倒转柱子，以反向的流动来冲洗柱子如果这样不能解决问题，更换进口过滤器或者 筛板2. 微生物在洗脱液中生长倒转柱子，尝试以反向的流动来将污染物冲洗出柱子更换 进口过滤器或者筛板3. 有蛋白质脂肪，油脂污染或者极性化合物等污染。
再生柱子（见第12节）12. 再生1. 再生反相色谱柱a. 首先倒转柱子b. 以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟，使用的溶剂的顺序要按照水—甲醇一异丙醇一二氯甲烷一异丙醇一甲醇一水进行c. 柱子转回正常方向，使用分析所用洗脱液平衡注意：在使用另外的淋洗方法的时候，一定要先用水开始冲洗以去除缓冲液，保证其后的洗 脱液可以混溶2. 再生硅胶柱a. 首先倒转柱子b. 以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟，使用的溶剂的顺序要按照异辛烷 （或己烷）一乙酸乙酯一干燥的异辛烷（或己烷）进行c. 柱子转回正常方向，使用分析所用洗脱液平衡3. 再生极性键合柱取决于使用的条件，可以使用反相的条件，也可以使用硅胶柱的条件注意：再生会导致柱效降低，另外绝对不要使用酮类或醛类冲洗氨基柱，因为可能与固定相 发生反应四氢呋喃作为替代可以使用。