货号：MS1604 规格:100管/96样苯丙氨酸解氨酶(Phenylalnine ammonialyase, PAL)试剂盒说明书微量法 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：PAL (EC4. 3 1 5)广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关 键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植 物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用测定原理：PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值，通过 测定吸光值升高速率计算PAL活性自备实验用品及仪器： 紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 板(UV板)、研钵、冰和蒸馏水试剂的组成和配制：提取液：液体lOOmLX 1瓶，4°C保存试剂一：液体15mLX 1瓶，4C保存试剂二：粉剂XI 瓶, 4C保存；临用前加入4mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4C 保存；试剂三：液体1mLX 1瓶，4C保存粗酶液提取：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1： 5~10的比例(建议称取约O.lg组织，加入1mL 提取液)，进行冰浴匀浆。
lOOOOg 4C离心10min，取上清，置冰上待测测定步骤：1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零2、 准备96孔UV板一块(非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于340nm务必使用UV板)3、在EP管或96孔UV板中按顺序加入下列试剂试剂名称(mL)测定管对照管样本5试剂一145150试剂二4040混匀，30C准确反应30min试剂三1010混匀，静置10min后，290nm处记录测定管吸光值A1和对照管吸光值A2，^A=A1-A2O 注意：对照管只要做一管PAL 活性计算： 用微量石英比色皿测定的计算公式如下（1）按蛋白浓度计算单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.1为一个酶活性 单位PAL （U/mg prot） =△ AXV 反总-FCCprX V 样）F0.1FT =13.3XA AFCpr （2）按样本鲜重计算单位定义：每g组织在每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.1为一个酶活性单位 PAL （U/g 鲜重）=△ AXV 反总F（WX V 样FV 样总）F0.1FT =13.3XA AFWV反总：反应体系总体积，0.2mL； V样：加入样本体积，0.005mL； V样总：加入提取液体积, 1 mL； T：反应时间，30 min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g。
用96孔板测定的计算公式如下（1） 按蛋白浓度计算单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.05为一个酶活 性单位PAL （U/mg prot） =△ AXV 反总F（V 样XCpr）F0.05FT =26.6X4 AFCpr（2） 按样本鲜重计算单位定义:每g组织在每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.05为一个酶活性单位 PAL （U/g 鲜重）=△ AXV 反总F（WX V 样FV 样总）F0.05FT =26.6X4 AFWV反总：反应体系总体积，0.2mL； V样：加入样本体积，0.005mL； V样总：加入提取液体积,1 mL； T：反应时间，30 min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g。