紫外分光光度法测定有机物实验方法（修订稿）紫外分光光度法测定未知物1. 仪器1.1 紫外分光光度计（T6）；配石英比色皿（1cm）：4个；1.2 容量瓶（100mL、50mL）:各10只；1.3 吸量管（1mL、2mL5mL10mL）:各1支;1.4 移液管（20mL、25mL50mL）:各1支2. 试剂2.1标准溶液（1mg/mL）:从维生素C、水杨酸、糖精钠、苯甲酸四种物质中任取其中两种，分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液2.2未知液：浓度约为40〜60ug/mL其必为给出的两种标准物质中的一种3. 实验操作3.1 吸收池配套性检查石英吸收池在220nm装蒸馏水，以一个吸收池为参比，调节t为100%测定其余吸收池的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，记录其余比色皿的吸光度值作为校正值说明:参赛选手可以自由选择使用比色皿的个数（大赛提供4个）3.2 未知物的定性分析将两种标准储备液和未知液均配成浓度约为10ug/mL的待测溶液（配制方法由选手自定）以蒸馏水为参比，于波长200〜350nm范围内测定三种溶液吸光度，并作吸收曲线根据吸收曲线的形状确定未知物，并从曲线上确定最大吸收波长作为定量测定时的测量波长。
四种标准物质溶液的吸收曲线参见附图未知物的定量分析根据未知液吸收曲线上最大吸收波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液合理配制标准系列溶液（推荐：标准储备液先稀释10倍（100ug/mL），然后再配制成所需浓度），于最大吸收波长处分别测出其吸光度然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线根据待测溶液的吸光度，从标准曲线上查出未知样品的浓度未知样要平行测定两次推荐方法3.3.1维生素C含量的测定：准确吸取1mg/mL的维生素C标准储备液10ml，在100mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100ug/mL）再分别准确移取0、1、2、4、6、810mL上述溶液，在50mL容量瓶中定容（浓度分别为0、2、4、8、12、16、20ug/mL）准确移取10mL维生素C未知液，在50mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线从标准曲线上查得未知液的浓度332苯甲酸含量的测定：准确吸取1mg/mL的苯甲酸标准储备液10mL,在100mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100ug/mL）再分别准确移取0、1、2、4、6、810mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为0、1、2、4、6、810ug/mL）。
准确移取10mL苯甲酸未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线从标准曲线上查得未知液的浓度3.3.3糖精钠含量的测定：准确吸取1mg/mL的糖精钠标准储备液10mL，在100mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100ug/mL）再分别准确移取0、1、2、4、6、810mL上述溶液，在50mL容量瓶中定容（浓度分别为0、2、4、8、12、16、20ug/mL）准确移取10mL糖精钠未知液，在50mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线从标准曲线上查得未知液的浓度3.3.4水杨酸含量的测定：准确吸取1mg/mL的水杨酸标准储备液10mL，在100mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100ug/mL）再分别准确移取0、1、2、4、6、810mL上述溶液，在50mL容量瓶中定容（浓度分别为0、2、4、8、12、16、20ug/mL）准确移取10mL水杨酸未知液，在50mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
从标准曲线上查得未知液的浓度4. 结果计算根据未知液的稀释倍数，可求出未知溶液的浓度1.41.21度0.8光吸0.60.40.2■糖精钠內吸收曲E线(1Clug/mL)•\\\、\、—0200205210215220225230235240245250255260265270275280285290295300305310315320325330335340345350波长1.6001.4001.2001.000度光0.800吸0.6000.4000.200■苯壬甲酸吸艮收曲纟戋（10u丿g/mnL)VZ*—、\\、—■■—U0.0002(0020521021522022523(2352-402452502552602652702波752［长8(28529029530030531031532CB2533035340453502.0001.8001.6001.400度1.200光1.000吸CCCC0.8000.6000.4000.200-水〈杨酸吸艮收曲纟戋（10uig/mnL)\\\——--J■~〜、一;■—10.00020(20521C21522022523C23524024525C25526(26527027528C28529029530(B05310B1532032533(B35340345350波长。