药剂学分享n n高磊高磊 管泽良管泽良 杨中舟杨中舟尿路结石症ß尿路结石症是损害人们身体健康和降低生 活质量的多发病之一,尿路结石症发病率 高我国是结石症的高发区,尤其是南方 的一些地区,占泌尿外科住院人数的首位 结石手术治疗花费较大,每次治疗费用 高达数千元,因此大量的结石患者需药物 治疗希望ß抗尿路结石海洋药物“古糖酯脂质体”具有多 环节抑制尿路结石形成作用,可阻断晶体 形成,晶体生长和聚集,晶体向结石转化 的全过程,因此它不仅是一种较好的治疗 药,亦是一种良好的预防药是一个非常 好的选择,既避免体外震波碎石造成的肾 脏内皮损伤,又降低治疗后的复发率新兴药物载体--脂质体脂质体脂质体特点特点市场 前景制备 分离结构结构给药途径脂质体结构疏水部位亲水部位封闭囊泡脂质体结构 1.由双分子层组成, 主要成分是磷脂和胆固 醇2.脂质体作为药物或其他物质的载体, 其包 裹范围很广, 亲脂性物质、两性物质及水溶 性成分都可以被包裹3.脂质体能像“微型反应器” 一样提供一 个相对保护性封闭的环境4.可以根据需要对脂质体的外表进行设计 使其具有不同的性质水溶性药物脂溶性药物锐普PPT出品 生物相容性及低毒性ß因脂质体是类似生物膜结构的囊泡, 对正常 细胞和组织无损害和抑制作用, 有细胞亲和 性与组织相容性可长时间吸附于靶细胞周 围, 使药物能充分向靶细胞靶组织渗透。
ß脂质体也可通过融合进入细胞内, 经溶酶体 消化释放药物 锐普PPT出品 靶向性天然靶向性ß这是脂质体静脉给药时的基本特征这是 由于脂质体进入体内就被巨噬细胞作为外 界异物吞噬的天然倾向产生的一般的脂 质体主要被肝和脾中网状内皮细胞吞噬, 使 得药物可以在这些部位富集,是治疗肝寄 生虫、利什曼病等网状内皮细胞系统疾病 理想的药物载体 物理化学靶向性ß原理:在脂质体的设计中, 使其能因为某种 外界物理因素的改变, 而明显改变脂质体流 动方向,引起脂质体选择性地在某部位富 集温度磁场渗透压pH配体靶向性ß原理:配体专一性是在脂质体上连接某种 识别分子, 就是所说的配体通过配体分子 的特异性专一地与靶细胞表面的互补分子 相互作用, 而使脂质体在靶区释放药物 ß连接不同配体的脂质 体,对不同受体细胞具 有专一的靶向性因 此, 人们可以根据治疗 或给药的需要, 来选择 脂质体的配体 锐普PPT出品 缓释性ß用PEG-MM和PE制备聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(PEG- DSPE)脂质体,用125 I标记,其中,鞘磷脂(SM):磷脂酰胆脂 (PC):胆碱(Chol):PEG:DSPE为1:1:1:1:0.2,给小鼠 静注或腹腔注射后,肝脾中脂质体量分别低于15%和10%。
ß长循环脂质体:采用聚乙二醇单甲醚(PEG-MM)与磷脂 酰乙醇胺(PE)结合成酯(PEG-PE),将其组装到脂质 体膜上,可以延长脂质体的血循环时间ß而世界上第一个上市的抗癌药物脂质体— ——阿霉素脂质体产品得以发展的必要基 础正是PEG化长循环脂质体的应用在此 技术中,脂质体的组成中含有PEG-DSPE ,其作用是阻止血浆蛋白吸附,即改变脂 质体的表面,从而减少MPS的摄取,延长 血循环时间,由于癌部位血管通透性增加 ,延长了血液循环时间的脂质体就可以有 效地被输送癌部位 肝和脾中网 状内皮胞膜材料中性磷脂中性磷脂ß磷脂酰胆碱(PC)是最常 见的中性磷脂,可天然获 得及合成具有价格低,化 学惰性,中性电荷等性质 胆固醇胆固醇ß生物膜的重要组成部分, 难于蛋白质结合而易与磷 脂结合,阻止磷脂凝集成 晶体结构像“缓冲剂”起 着调节膜结构“流动性”的 作用作为两性分子,能 嵌入膜脂质体制备方法ß薄膜分散法:磷脂溶于氯仿和其他有机溶 剂,脂溶性药物加入另一溶剂,减压旋转 除去溶剂,使脂质体在器壁形成薄膜,加 入水溶性药物缓冲液进行震荡,则形成多 层脂质体ß乙醚注入法、ß超声分散法ß反相蒸发法锐普PPT出品 薄膜分散法薄膜分散法旋转蒸发2锐普PPT出品 分散乳化机+磁力搅拌(氮 环境)2继续旋转蒸发+PBS345超声+减压旋转蒸发减压蒸发除氯仿+乙醚溶解+不同浓度的PBS胆固醇与磷脂溶于氯仿1脂质体分离ß透析法:适于小分子,不利于大分子,时 间长,能除去几乎所有药物,价格便宜。
ß压滤法ß柱色谱法:常用葡聚糖凝胶柱(如 Sephadex G一50和Sephadex G一100)ß离心法:依赖于脂质体的组成成分,粒径 大小和密度各种方法在古糖酯脂质体ß冷冻高速离心法可使脂质体 与游离药物具有较好的 分离,但易使脂质体破裂,从 而影响包封率测定结 果的准确性;ß采用透析法 进行分离时,由于古糖酯具有强聚阴离 子性质,分子 结构呈线性,使用常规透析袋进行分 离时其平衡时 间长,且分离效果不理想;ß采用压滤法进行分离时, 虽然效果略好于透析法, 但需多次加压滤过,处理时 间较长,滤液体积较大 ,且加压操作不当对脂质体的 稳定性会产生不利影 响;ß采用凝胶过滤方法进行分 离时,选择Sephadex G 一50和Sephadex G一100均 可使古糖酯脂质体与 游离药物分离,但缺点是洗脱 体积较大;药物的回 收率较低、柱子的重复性也不 高本实验的方法ß本实验采用HPGPC来进行古糖酯脂质体分 离Shodex OHpak SB一804HQ色谱柱是 一种水性凝胶柱,其Mr 排阻限为7×105 , 常用于多 糖和蛋白等水溶性生物大分子的 分离古糖酯的 为10×103 ~15×103。
而其 脂质体的粒径为纳米 级,因此采用HPGPC 可使古糖酯脂质体与游离药物 具有良好的 分离度脂质体的质量评价ß包封率: EN%=(1一Cf/Ct)×100% 其 中Cf为游离药物的量,Ct为脂质体悬液中 药物的总量表示所有药物中有多少在脂 质体内本实验中的质量评价ß因古糖酯属多糖类药物,无特 征的紫外吸 收,故本实验采用示差折光检测器 (RID)来 进行检测 HPG— PC法具有方法简便、 快捷,重现性好的特点,适合于 古糖酯脂 质体包封率的测定 眼部给药吸收给药静脉注射透皮给药口服给药途径胶囊液体制剂市场状况ß目前, 国内外上市的脂质体药物主要有注射 用两性霉素B 脂质体、注射用紫杉醇脂质体 和阿霉素、柔红霉素等几个抗癌药物脂质 体ß长春新碱脂质体已进入临床试验阶段, 另外 还有利多卡因脂质体、胰岛素脂质体、甲 肝乙肝疫苗等高收益ß根据MedAdNews的预估,2000年,脂质体 产品在全球的销售额为12亿美元,至2005 年则达到约33亿美元,年增长率为175%尿结石药物高收益ß根据实验室小试试验条件估算古糖酯的生 产成本每粒胶囊(50mg/粒)约为0.20元, 销售价如为1.0元/粒,一吨原料药可生产 2000万粒。
故产值大约为2000万粒×1.0元/ 粒= 2000万元/吨增值为2000万×(1.0- 0.20元/粒)=1600万元/吨如年产量为10吨 ,则年产值为2000万元/吨×10吨=2.0亿元 ,年增值为1600万元/吨×10吨=1.6亿元脂质体总的研发方向ß目前脂质体药物的研发重点重要集中在3 个方面:ßa. 包裹抗肿瘤的化疗药物,尤其是阿霉素类、长春新碱类 和喜树碱类药物这是因为脂质体可以有效的降低这些化 疗药物的不良反应,提高药物的治疗指数ßb. 用做蛋白质-多肽疫苗以及DNA 疫苗的载体由于脂质 体是一种有效免疫佐剂,脂质体作为疫苗载体可明显增强 机体的体液免疫和细胞免疫ßc. 用作核酸类药物的载体,以脂质体为载体进行基因治疗 是一个很好的方向,可以避免病毒类载体的不良反应国外进展ßALZA 是美国一个专门从事药物传递系统(drug delivery systems,DDSs)开发的公司它的主要技术平台就是隐 型脂质体(STEALTH® liposomes,实际上就是长循环 脂质体)技术ßLipoxen 是英国的一家私人公司它主要开发脂质体疫苗 ßTransave美国 主要研究可用于吸入治疗的脂类复合物和 脂质体制剂。
目前该公司的开发重点是治疗肺病的脂质体 抗生素、化疗药物和基因治疗药物 ß还有Polymun 是奥地利,Neopharm 美国 , INEX 加拿 大(INEX 的技术主要有2 个,靶向化疗技术和靶向免疫 治疗技术) Gilead美国 Elan爱尔兰 Celsion美国(热 敏脂质体)等公司 ß在国外,开发脂质体药物的公司基本上都 有属于自己的技术平台,或是新颖的脂质体 制备技术如Aphios 公司的超临界流体技 术和Polymun 的交叉流注射技术,或是独 特的脂质体类型 ,如ALZA 公司的 STEALTH®脂质体(长循环脂质体)、 Skyepharma 公司的Depofoam®正是这 些专利技术保证了这些脂质体公司的竞争 力和生命力我国的发展状况ß脂质体技术的开发研究在国内也已有十多 年的历史 顾学裘等许多专家都对脂质体 制剂进行了深入的研究,为我国的脂质体 制剂发展作出了贡献, 但是由于缺乏辅料 、无成熟的制备工艺、技术的难度和国内 经济实力的影响,迄今没有国家SDA批准 的脂质体药物产品上市但是,随着国家 和企业的投入加大,脂质体药物的产业化 的步伐必定会显著加快ß 谢谢。