酵母DNA提取方法方法一：石英砂法1、 5000rpmx5min 收集过夜培养的菌体(5ml左右)，于 200pL 裂解液(50 mmol/ L Tris-HCl pH 8.0 , 180 mmol/ LEDTA pH 8.0 , 1 % SDS , 现配)中，加入 3/10 总体积石英砂在 涡流混 合器上振荡13min,每隔4min将离心管取 出用力甩几下，然后65°C水浴10min2、 加入 200pL 5mol/L KAc，冰浴 8min ；3、 12000rpmx5min 转移上清至新的离心管中；4、 加入 3 mol/L NaAc 35pl ，加入异丙醇 200pL混匀后冰浴8min，12000rpmx5min 收集沉 淀；5、 200pL TE 溶解，加入 RNase10pL，65C水浴 10min ；6、 加入200pL氯仿一异戊醇(24:1 ),抽提；7、 温柔地取上 清150pL，加入20pL 3 mol/L NaAc 及375pL无水乙醇，混匀后 12000rpmx8min 收集 DNA ；8、 70% 乙醇洗涤沉淀，吹干后 TE溶解，-20 C保藏方法二：蜗牛酶法1. 接种于5 ml的YEPD培养基中在25C -28 C振荡培养12-16 h。
2. 3500 rpm 离心5min沉淀细胞，用1ml的无菌水洗涤一次，再加 0.5ml solution I (1M 山 梨醇，0.1M EDTA, pH=7.5) 重悬3. 转移细胞至1.5 ml的离心管 中，加 入0.1蜗牛酶(30mg/ml)溶液，37C保温30-60min,以 获得原生质体4. 最大转速离心 1min 以沉淀细胞，用 500ulsolution II (50mMTris-HCl, 20mM EDTA,pH=7.4) 溶液悬浮，然后加 入50pl 10% SDS, 混合65C保温30min5. 加入200pl 5M 醋酸钾，放 于冰上30 min6. 最大转速离心15min，转移上清液至新的离心管中，用等体积的异丙醇沉淀DNA7. 室温下放置5min，离心10min，用70%的乙醇洗涤一次，真空干燥，用50ul pH=7.4 TE 溶 液溶解方法三：蜗牛酶过夜处理法将酵母接种到YPD培养基中30°C过夜培养16〜18h，离心收集1.5mL，用灭菌水洗 涤两 次；加入600 u L裂解液，35 u L蜗牛酶，37C消化过夜；加入 饱和酚450 u L,氯仿-异戊醇（体 积比24:1）150 u L，轻轻颠倒混 匀使溶液成为 乳状，并保持10min，3000r/min离心10min ；吸 取上清液，用氯仿-异戊醇（体积比24:1）450 u L再抽提1次，10000r/min离心5min ；取上清加 入异丙醇800 u L，- 20C静置30min ； 10000r/min离心5min，沉淀物用70%乙醇洗两次，自 然干燥后溶于30 u L TE缓冲液；加入 0.5 u L10mg/mL的RNaseA，37C温浴30min，自然冷 却后保存。
方法四：蜗牛酶反复冻融法收集过夜培养16〜18h的菌体1.5mL，加入500 u LPBS溶液重悬菌体，12000r/min离心2min，用PBS重洗一次；将沉淀溶于 35 u L的蜗牛酶溶 液中，加入65 u L的PBS，45 C作 用2h，加100 u L裂解液，一20 C冷冻，然后室温振 荡溶解，反复3次；向悬浮液中加 入150 u L 5mol/L KAc（pH8.9）轻轻混匀，然后10000r/min离心5min ；取上清液，加入两 倍体积的无 水乙醇，轻轻混匀，室温放置5min ； 12000r/min离心10min，将沉淀溶解在100 u L TE中； 加入等体积的酚-氯仿-异戊醇（体积比25:24:1），轻柔颠倒 混匀，12000r/min离心5min，重复 抽提1次；加1/10体积的3mol/L醋酸钠（pH5.2），2.5倍体积的无水乙醇，一20C放置30min ； 10000r/min离心5min，弃上清液，用70%乙醇溶液洗涤沉淀两次，室温 干燥后用20 u L TE溶 解；加入0.5 u L 10mg/mL的RNaseA， 37C温浴30min，自然冷却 后保存。
方法五：溶解在100 u L TE中；加入等 体积的酚-氯仿-异戊醇（体积比25:24:1），轻柔颠倒混匀， 12000r/min离心5min，重复抽提1次；加1/10体积的3mol/L醋酸钠（pH5.2），2.5倍体积的 无水乙醇，一20 C放置30min ； 10000r/min离心5min，弃上清液，用70%乙醇溶液洗涤沉淀 两次，室温干燥后 用20 u L TE溶解；加入0.5 u L 10mg/mL的RNaseA，37 C温浴30min，自 然冷却后保存方法六:1、配一个破菌缓冲液：Triton X-100 2% (v/v ) SDS 1% ( w/v )NaCl 100mM Tris-HCl (pH 8.0 ) 10mM2、 把酵母细胞离心收集，加200ul的石英砂或玻璃珠，加入200pl的破菌液再加200』的酚氯仿，涡旋一分钟，放在冰上一分钟，一共反复4次3、 加入500pl的ddH2O，涡旋，离心，抽上清和等体积的酚氯仿混合4、 涡旋，离心，抽上清和等体积的酚氯仿混合，重复4直到离心后两层之间没有蛋白出现5、 抽上清加1ml的无水乙醇，放在-20度30min6、 离心，抽上 清，再用70%乙醇洗一次，真 空干燥，用TE或ddH20溶解方法七：接种酵母到2.5ml酵母试管培 养基中(YPD培养基)，30°C，培养16〜18h ；取1.5ml酵 母培养液，室温下，1500 x g离心5〜10min收集菌体；菌体用灭菌水 洗1次，1500 xg 离心 5min ；菌体用 200pl SCED(1mol/L 山梨醇、10mmol/L 柠檬酸钠、10mmol/LEDTA、 10mmol/L DTT 二硫苏糖醇)溶液重悬， 加入3 0pl 10mg/ml 溶菌酶(Lysozyme)37 C温浴1h ； 加入100』2%SDS 混匀，-20 C冰冻，然后 室温震荡溶解，反复3次；向悬浮液中 加入150』 5mol/L KAc(pH 8.9)轻轻混匀， 然后10000r/min 离心5min ；将上清转移到一新的 1.5ml离心 管中，加 入2倍体积的乙醇，轻轻 混匀，室温放置 5min后12000r/min 离心10min ；除去上 清，将沉淀溶解在 300pl TE(10mmol/L Tris-HCl ，pH7.4，1mmol/L EDTA，pH8.0)中，加入 6pl RNase (10mg/ml)，37C温浴30min ；加入饱 和酚和氯仿各 150pl充分混匀，然后10000r/min 离心5min ；转移上清到新的1.5ml离心管中，加入1/2体积的7.5mol/L NH4Ac(pH7.5) 和等体 积的异丙醇，-20 C放置20min后12000r/min 离心10min ；除去上清，加 入300pl 70% 乙醇 漂洗沉淀一次，10000r/min离心5min ；风干除去乙醇，用2 0』TE 溶解酵母DNA。