质粒提取操作步骤QIAGEN（德国凯杰）质粒提取试剂盒一、细菌培养物的生长1. 从琼脂平板上挑取一个单菌落，接种到2-5mL含有适当抗生素的LB液体培养基中生长将液体培养基置于37°C,300rpm的摇床中振荡8小时2. 用LB培养基以1/500~1/1000的比例稀释含菌落的培养基若为了获得高拷贝质粒，用100-200ul含菌落液体培养基接种到100mlLB培养基中；若为了获得低拷贝质粒，用250~500ul含菌落培养基接种到250mlLB培养基中让其在37°C,300rpm的摇床中振荡12-16小时二、细菌的收获和裂解1. 在6000Xg,4°C条件下离心15min,收获细菌2. 加入10mlBufferP1重悬细菌3. 添加10mlBufferP2,剧烈晃动离心管4-6次使其彻底混匀，室温放置5min4. 加入10ml冰浴的BufferP3到此溶菌产物中，晃动离心管4-6次使其混匀5. 将溶菌产物倒入针口密封的过滤器中，室温放置10min,不要插入活塞6. 打开针口的密封盖，轻轻挤压活塞将溶菌产物过滤到一新的50ml离心管中7. 添加2.5mlBufferER到过滤的溶菌液中，充分混匀10次后冰上孵育30min。
三、质粒DNA的纯化1. 将QIAGEN-tip500的柱子挂在另一离心管上，加入10mlBufferQBT,让管中溶液慢慢滴下排空2. 将第7步冰上孵育的溶菌液加入QIAGEN-tip柱子中让其透过树脂慢慢滴下3. 用2X30mlBufferQC洗QIAGEN-tip柱4. 再用15mlBufferQN洗脱DNA，用离心管收集DNA洗脱液5. 加入10.5ml异丙醇到洗脱液中使DNA沉淀下来，混匀15000Xg,4°C离心30min,离心后小心倒出上清液6. 洗DNA用5ml无内毒素-70%乙醇（添加40ml96%-100%乙醇到试剂盒的无内毒素水中），15000Xg,4°C离心10min小心倒出上清液不要碰到质粒7. 烘干离心管底部的质粒5-10min用500ul无内毒素的BufferTE重新溶解DNA。