HPLC 法测定赤、白芍中芍药苷的含量 学号： 1046005 姓名: 覃中凤专业：中药资源与开发 【目的要求】 1. 掌握用 HPLC 法测定白芍与赤芍中芍药苷的含量 2. 比较白芍与赤芍药材中芍药苷的含量的差异 【原理】 白芍是毛茛科植物芍药 P aeonia lactif loraPall . 的干燥根具有养血敛阴, 柔肝止痛、平抑肝阳的功效赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.或 川赤芍 Paeonia veitchii Lynch 的干燥根具有清热凉血，散瘀止痛的功效本 实验对赤芍和白芍中的芍药苷的含量进行比较，以研究二者的功效差异 【条件】 仪器： HPLC-DAD、超声仪、容量瓶、漏斗、滤纸、硅胶板、毛细管 药品： 芍药苷对照品、乙醇、展开剂：三氯甲烷- 乙酸乙酯 - 甲醇- 甲酸（ 40： 5：10：0.2 ）、5% 香草醛硫酸溶液、甲醇 【实验】 1. 定性分析 取本品粉末 0.5g，加乙醇 l0ml ，振摇 5 分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙 醇 1ml 使溶解，作为供试品溶液 另取芍药苷对照品， 加乙醇制成每 1ml 含 1mg溶液，作为对照品溶液。
照薄 层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl ，分别点于同一硅胶G薄层板上，以 三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇一甲酸(40：5：10：0.2) 为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以5% 香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰供试品色谱中，在与对照 品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点 2.定量分析 (1) 色谱条件 色谱柱 :ZORBAX SB －C18 柱(250 mm ×4．6mmI ．D．，5μm)，流动相 : 乙腈－ 0． 10% 磷酸水溶液 (30∶70)，流速1．0 mL ·min－1，柱温25℃，检测波长 :230 nm ， 进样量 20μL ⑵芍药苷标准溶液的制备 精密称取在 P2O5 减压干燥器中干燥 36h的芍药苷对照品适量， 置100 ml 量瓶 中，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，制成对照品溶液浓度为70ug·ml－1，备 用 ⑶白芍供试品溶液的制备 精密称取白芍干燥根细粉 ( 过 60 目筛) 约 0．20g，置 50 ml 具塞锥形瓶中， 加 50% 乙醇 30ml，精密称定重量，室温浸泡5 h，超声提取 ( 功率 250 W ，频率 50 kHz)30 min， 补足重量，滤过; 在药渣中加入 50% 乙醇 20 ml， 超声提取 30 min， 室温放冷，补足重量，摇匀，滤过。
合并以上两次过滤液至50 ml 容量瓶中， 定容，精密量取5 ml 转移至 10 mL 量瓶中，定容，摇匀，用微孔滤膜(0．22 μm)滤过，备用 ⑷赤芍供试品溶液的制备 精密称取赤芍干燥根细粉 ( 过 60 目筛) 约 0．20g，置 50 ml 具塞锥形瓶中， 加 50% 乙醇 30ml，精密称定重量，室温浸泡5 h，超声提取 ( 功率 250 W ，频率 50 kHz)30 min， 补足重量，滤过; 在药渣中加入 50% 乙醇 20 ml， 超声提取 30 min， 室温放冷，补足重量，摇匀，滤过合并以上两次过滤液至50 ml 容量瓶中， 定容，精密量取5 ml 转移至 10 mL 量瓶中，定容，摇匀，用微孔滤膜(0．22 μm)滤过，备用 ⑸样品含量测定 取亳白芍、赤芍供试品溶液经0.22 μm微孔滤膜虑过，进样量为10μL 【实验记录】 1. 根据所得数据计算两种药材中芍药苷的含量 2. 比较两种药材中所含芍药苷的量，做出分析 【思考题】 讨论用 HPLC 法测定芍药苷含量的优缺点。