3.培 养 基,3.1 培养基的种类和命名 最早的培养基：1860年Sackst 和1861年Knop设计的营养液 30-40年代设计的培养基：White(1943)，Gautheret(1939) 50年代：Heller(1953) 60年代设计的培养基：White(1963),MS(1962)（Murashige and Skoog(1962)）,Nitsch(1969),N6(1974)培养基的命名：发表人+发表年号,常用培养基及其特点：,第一类：高盐培养基 MS（Murashige 和 Skoog,1962) LS（Linsmaier 和 Skoog,1965), BL(Brown and Lawrence,1968), 第二类：高硝酸盐培养基 B5 N6 SH(Schenk Hildebrandt,1972),常用培养基及其特点：,第三类：中盐培养基 H（Bourgin 和 Nitsch,1979), Nitsch(1969) 第四类：低盐培养基 White(1943), WS(Wolter Skoog,1966), HE(Heller,1953),3.2 培养基的成份,3.2.1 无机营养成份 大量元素：氮、磷、钾、钙、镁、硫 （浓度大于0.5mmol/L) 微量元素：铁、锰、铜、锌、硼、氯、碘、钼、钠 (浓度小于0.5mmol/L),3.2 培养基的成份,关于硝酸盐和铵盐 当作为唯一氮源时硝酸盐比铵盐好，但单独使用培养基的PH会向碱性漂移，加入少量的铵盐或还原态氮源可阻止漂移。
关于铁盐（ Fe2（SO4）3 ，FeCl3 FeSO4·7H2O ） 铁需在偏酸的环境中才被组织吸收，解决策略是以螯合形式出现,3.2 培养基的成份,关于螯合铁盐 用FeSO4·7H2O和 Na2·EDTA制备，方法： Na2·EDTA：ethylene diamine tetra-acid （乙二胺四乙酸）,缺元素愈伤组织的表现,氮:不能形成导管,有花色素色彩 氮、钾或磷:细胞过度生长,形成层组织减退 硫:非常明显地褪绿 铁：细胞分裂停止 硼：细胞分裂停滞，细胞伸长 锰或钼：影响细胞伸长,3.2 培养基的成份,3.2.2 有机营养成份 （1）维生素：硫胺素（VB1),吡哆醇（VB6） 维生素C（VC），烟酸（PP 或VB3 ）等 （2）氨基酸：甘氨酸，水解酪蛋白（CH）等 （3）肌醇 （4）碳源：蔗糖，葡萄糖 （5）天然复合物：椰乳（CM），香蕉，马铃 薯，酵母提取液（YE）,3.2 培养基的成份,3.2.3 其它成份 （1）植物生长物质 （2）活性炭（AC）：（3）凝固剂 （4）其它,关于植物生长物质,植物激素：又称内源激素，是植物体内天然存在的代谢物质细胞分裂素，生长素，赤霉素，脱落酸和乙烯） 植物生长调节剂：为人工合成的有机化合物，具有促进、抑制或以其它方式改变植物某一个生理过程的功能。
植物生长物质：植物激素和植物生长调节剂的统称 生长延缓剂：矮壮素，多效唑(PP333) 生长抑制剂：脱落酸(ABA),3.2.3 植物激素（植物生长调节剂）,（1）细胞分裂素： 6-BA（6-苄基氨基嘌呤）；KT（激动素）; ZT（玉米素）；2-ip（异戊烯基腺嘌呤）;PBA（多氯苯甲酸）;TDZ 不溶于水，用1N Hcl或1N NaoH 助溶； 作用效果：Zt2-ip 6-BA Kt （2）生长素： NAA（萘乙酸），IAA（吲哚乙酸），IBA（吲哚丁酸），2，4-D，GA3（赤霉素）; 不溶于水，用95%洒精或1N NaoH 助溶； 作用效果：2，4-DNAA IBA IAA,3.2.3 植物激素（植物生长调节剂）,关于IAA（吲哚乙酸）： ●IAA贮备液在几天内发生光解，变成粉色，须置于棕色瓶中，贮存时间最好不超过一周 ●因高温会破坏IAA的结构（热不稳定性）， IAA需采用过滤灭菌,3.2.3 植物激素（植物生长调节剂）,关于赤霉素（GA3）： ●因高温会破坏GA3的结构（热不稳定性），需采用过滤灭菌,关于生长调节剂的配比,细胞分裂素/生长素 被称为组织培养的激素配比模式； 细胞分裂素/生长素1，有利长芽；细胞分裂素/生长素 1，有利长根； 细胞分裂素/生长素配比的应用需注意其相对值，以低、中等含量为好； 高浓度的细胞分裂素含量和高激素配比都可使培养物发生诱变； 较易引起突变的激素：腺嘌呤，异戊基腺嘌呤（2-ip)，矮壮素等；,3.2.4 固化剂-琼脂、卡拉胶 影响培养基凝固效果的因素： 1、卡拉胶含量； 2、培养基的PH值，偏酸不利凝固； 3、高压灭菌时间，过长影响凝固；,3.2.5 其它成份 1.活性炭的作用：吸附功能；加入活性炭不利培养基凝固。
2.硝酸银：抑制乙烯活性促进茎芽分化 的作用 使用浓度:1-10mg/L；过滤灭菌.,3.2.5 其它成份 3.抗生素： 常用的抗生素：青霉素、链霉素、 土霉素等，用量：5-20mg/L；过滤灭菌 3.2.6 PH值 一般为PH 5.8左右,3.3 培养基的设计及配制,设计内容： 1、基本培养基的选择 2、激素种类和配比 3、蔗糖的浓度 4、其它成份的添加 5、PH值的确定 设计方案的选择：,3.3 培养基的设计及配制,关于实验方案的设计 1、了解前人的实验 2、单因子实验设计 3、多因子及正交实验设计,3.3 培养基的设计及配制,关于正交实验设计 L4(23) L8(27),四个实验,两水平,三因子,MS培养基母液的配制,1、大量元素母液：扩大10-20倍，5种药品； 2、微量元素母液：扩大100-200倍，7种药品； 3、铁盐母液：扩大100-200倍，两种药品，配制 完毕需煮开冷却后棕色瓶子贮藏； 4、有机成份母液：扩大100-200倍，四种药品； 5、肌醇母液：扩大20倍（取量：50ml/L），一种药品；,MS培养基大量元素母液配制工作表,母液配制中几个常见问题,关于吸取量： 扩大倍数X吸取量（ml）/L=1000 关于药品的水分子： 关于沉淀： 关于铁盐： 螯合铁 Na—EDTA（乙二胺四乙酸钠）,关于标签：,名 称：MS大量元素母液 扩大倍数：10倍（或1：10） 取 量：100ml/L 配制时间：2008年6月8日 配 制 人：张三,培养基的配制程序：,1.制定工作表 2.母液、蔗糖、卡拉胶、开水及用 品的准备 3.按工作表吸取母液 4.配制及定溶 5.调节PH值 6.分装 7.高压灭菌,实 例：,配方：MS+6-BA3mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖25g/L+卡拉胶9g/L 配量：1500 ml 制定工作表 ？？？,培养基配制工作表： 配方：MS+6-BA3mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖25g/L+卡拉胶9g/L 配量：1500ml,关于高压灭菌和过滤灭菌,高压灭菌需注意到的几个问题： 过滤灭菌： 关于再次污染问题：,关于高压灭菌和过滤灭菌,高压灭菌需注意到的几个问题： 过滤灭菌： 关于再次污染问题：,关于高压灭菌和过滤灭菌,高压灭菌需注意到的几个问题： 过滤灭菌： 关于再次污染问题：,关于培养基中成份的浓度表示,质量单位表示：mg/L 摩尔(mole)值表示:mol/L 好处：对于所有化合物，每摩尔中的分子数都是恒定的。
国际植物生理协会建议： 大量、有机：mmol/L 微量、激素：umol/L 1mol/L=1000mmol/L=1000000umol/L,。