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植物实验 连续石蜡切片番红-固绿对染色制片幼嫩六出花花药与子房永久封片

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植物实验  连续石蜡切片番红-固绿对染色制片幼嫩六出花花药与子房永久封片_第1页
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实验名称:连续石蜡切片番红-固绿对染色制片幼嫩六出花花药与子房永久封片实验目的: 1.通过实验掌握石蜡制片法的基本操作过程2 通过实验认识植物花药发育的一般过程与子房胚囊发育的一般过程实验原理: 石蜡切片发实在研究植物细胞的形态结构等方面常用的制片方法它可以是植物材料切成薄的切片,又可以切成连续的薄片,切片经染色后,观察效果甚好石蜡切片一般要经过取材,固定,洗涤,脱水,透明,透蜡,包埋,切片,染色,丰藏等过程,因此耗时较长,需 4 天时间本实验采用番红-固绿对染色制片,是植物制片上最普通的一种二重染色法,其染色过程简单并能清晰地显示出细胞结构番红为碱性染料,能使细胞核及木质化的细胞壁染成红色;固绿为酸性染料,能使细胞质及纤维素的细胞壁染成绿色实验仪器:切片机,电热恒温箱,摊片机,解剖刀,镊子,单面刀片,台木,毛笔,蜡铲,酒精灯,包埋机,染色缸,玻片机,温度计,冰箱实验试剂:FAA 固定液,1%番红,1%固绿,各级酒精,二甲苯,石蜡,粘片剂,树胶实验材料:六出花花药与子房试验流程:取材——固定——洗涤——脱水——透明——透蜡——包埋——切片——贴片——染色——封藏——风干——镜检——照相实验步骤:1. 取材:取大小六出花,将花被,花丝,花柄剥去,只留下花药与子房,并投入到小户口瓶中。

2. 固定:将 FAA 固定液倒入盛有材料的玻管中,固定时间 5-7 天3. 保存:用 60%酒精保存4. 分别经各级酒精 70% 80% 90% 100% 100%脱水(纯酒精两次)每次 0.5 小时5. 等量纯酒精及二甲苯 0.5 小时,二甲苯 0.5 小时(中间换一次)6. 等量二甲苯与纯石蜡中 0.5 小时后,换纯石蜡过夜,第二天一早换新蜡(此步老师代做)7. 在包埋机上将花药与子房根据切片时的方向,置于包埋盒,放入液体石蜡,注意调整材料方向,其后可冷冻后取出蜡块8. 在修改后,粘合,并置切片机,对花药进行横切,对子房进行纵切制片,将切好的蜡带,按不超玻片 2/3 的大小切成;放于摊片机,待蜡带充分展开后,即捞片到涂有粘片剂的玻片上9. 使玻片上的粘片剂充分风干后,即可进行染色,先将切片在二甲苯中脱蜡,30 分钟10. 等量纯酒精而二甲苯 5 分钟11. 经纯酒精,95% 90% 80% 70% 50% 30%各级酒精各 5 分钟,蒸馏水 2-5 分钟12. 1%番红水溶液染色 1 小时13. 用水吸取多余的染液14. 30% 50% 70% 80% 90% 95%各级脱水 3-5 分钟15. 1%的固绿,染色 10-30s16. 95%的酒精漂洗17. 纯酒精脱水 5 分钟18. 等量纯酒精二甲苯混合液 5 分钟,纯二甲苯 5 分钟19. 通风橱内用中性树胶封藏20. 自然风干玻片后镜检观察切片,选择出切得较正较好的花药发育阶段与子房胚囊发育阶段21. 显微检查切片,并各自选择结构完好,材料清晰的切片22. 显微摄相实验结果:1.六出花子房横切 4×10×40×六出花花药纵切 4×10×40×。

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