考马斯亮蓝法（ Bradford 法） 本法系依据在酸性溶液中考马斯亮蓝 G250 与蛋白质分子中的碱性氨基酸（精氨酸）和芳香族氨基酸结合形成蓝色复合物，在一定范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比，以蛋白质对照品溶液作标准曲线，采用比色法测定供试品中蛋 白质的含量 本法灵敏度高，通常可测定 1〜 200μg 的蛋白质量本法主要的干扰物质有去污剂、 TritonX-100、十二烷基硫酸钠（ SDS)等，供试品缓冲液呈强碱性时也会影响显色 试剂 酸性染色液取考马斯亮蓝 G250 0.lg，加乙醇 50ml 溶解后，加磷酸100ml，加水稀释至 1000ml， 混匀滤过，取滤液，即得本试剂应置棕色瓶内，如有沉淀产生，使用前需经滤过 对照品溶液的制备 除另有规定外，取血清白蛋白 (牛）对照品或蛋白质含量测定国家标准品，加水溶解并制成每 l ml 中含 l mg 的溶液 供试品溶液的制备 照各品种项下规定的方法制备 (蛋白质浓度应与对照品溶液基本一致） 测定法 精密量取对照品溶液 0ml、 0.01ml、 0.02ml、 0.04ml、 0.06ml、 0.08ml、0.1ml (对照品溶液取用量可在本法测定范围内进行适当调整），分别置具塞试管 中，各加水至 0.1ml，再分别加人酸性染色液 5.0ml，立即混匀，照紫外 -可见分光光度法（通则 0401) ，立即在 595nm 的波长处测定吸光度；同时以 0 号管作为空白。
以对照品溶液浓度与其相对应的吸光度计算线性回归方程另精密量取供试品溶液适量，同法测定，从线性回归方程计算供试品溶液中的蛋白质浓度，并乘以稀释倍数，即得 【附注】本法测定时不可使用可与染色物结合的比色皿（如石英比色皿） ，建议使用玻璃比色皿或其他适宜材料的比色皿 加入后 5-20min 线性关系最好， 干扰物质少 ,K 、 Na 、 Mg2 离子、 Tris 缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、 EDTA 等均不干扰此测定法 . 法的缺点是：（ 1）由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同 ,因此 Bradford 法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差 ,在制作 标准曲线时通常选用 g—球蛋白为标准蛋白质 ,以减少这方面的偏差 .（ 2）仍有一些物质干扰此法的测定 ,主要的干扰物质有：去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠（ SDS）和 0.1N 的 NaOH.（如同 0.1N 的酸干扰 Lowary 法一样） . 紫外 -可见分光光度法 本法系依据蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸，其在 280m 波长处具最大吸光度，在一定范围内其吸光度大小与蛋白质浓度呈正比。
本法操作简便快速，适用于纯化蛋白质的检测，一般供试品浓度为 0.2〜2mg/ml本法准确度较差，干扰物质多测定法 (2)适用于供试品溶液中存在核酸时的蛋白质测定 对照品溶液与供试品溶液的制备 照各品种项下规定的方法制备 测定法 （ 1 )取供试品溶液，照紫外 -可见分光光度法（通则 0401)，在 280nm 的波长处测定吸光度，以吸收系数法或对照品比较法计算供试品中蛋白质的含量 ( 2 )取供试品溶液，照紫外 -可见分光光度法（通则 0401)，在 280 nm 与 260 nm 的波长处测定吸光度，按下式计算供试品中蛋白质的含量 蛋白质浓度（ mg/ml) =1.45x A280一 0.74 x A260 B C A 法 本法系依据蛋白质分子在碱性溶液中将 Cu2+还原为 Cu+， 2,2’-联喹啉 -4,4'-二羧酸（ BCA) 与 Cu+结合形成紫色复合物，在一定范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比，以蛋白质对照品溶液作标准曲线，采用比色法测定供 试品中蛋白质的含量 本法灵敏度较高，测定范围可达 80〜 400μg本法测定的供试品中不能有还原剂和铜螯合物，否则干扰测定。
试剂 铜 -BCA 试液取 2,2’-联喹啉 -4,4'-二羧酸 钠 lg，无水碳酸钠 2g，酒石酸钠 0.16g，氢氧化钠 0.4g 与碳酸氢钠 0.95g，加水使溶解成 100ml，调节 pH 值至11.25， 作为甲液；另取 4%硫酸铜溶液作为乙液临用前取甲液 100ml，加 入 乙液 2ml，混匀，即得 对照品溶液的制备除另有规定外，取血清白蛋白 (牛 )对照品或蛋白质含量测定国家标准品，加水溶解并制成每 l ml 中含 0.8 mg 的溶液 供试品溶液的制备照各品种项下规定的方法制备 (蛋白质浓度应与对照品溶液基本一致） 测定法 精密量取对照品溶液 0ml、 0.lml、 0.2ml、 0.3ml、 0.4ml、 0.5ml (对照品溶液取用量可在本法测定范围内进行适当调整），分别置具塞试管中，各 加水至 0.5ml，再分别加人铜 -BCA试液 10ml，立即混匀，置 37°C 水浴中保温 3 0 分钟，放冷，照紫外 -可见分光光度法（通则 0401)，立即在 562mn 的波长处测定吸光度；同时以 0 号管作为空白以对照品溶液浓度与其相对应的吸光度计算线性回归方程。
另精密量取供试品溶液适量，同法测定从线性回归方程计算供试品溶液中的蛋白质浓度，并乘以稀释倍数，即得 不受去垢剂影响 ，受螯合剂和略高浓度还原剂的影响，与 BSA 法为最常用的蛋白含量测定方法 。