叶绿素a的测定一、 实验目的1、 掌握叶绿素a的测定方法二、 实验原理生物量是指某一特定时间、某一特定范围内存在的有机体的量浮游 植物是海洋生态系统的初级生产者，而初级生产水平与叶绿素a含量存在密切关系，因 而往往用叶绿素a含量来表示浮游植物的生物量海洋生态系统的种类组成结构以及能流、物质流特征与初级生产者的粒径大小有 密切关系不同类型海区初级生产者的粒径组成存在很大差异，了解某一特定海区初 级生产者的粒径组成，有助于深入研究海区的新生产力水平、营养平衡状态等结构、 功能特征叶绿素a的丙酮萃取液受蓝光激发产生红色荧光，过滤一定体积海水所得的浮 游植物用90%丙酮提取其色素，使用分光光度计直接测量海水中叶绿素a浓度，或 使用荧光计测定提取液酸化前后的荧光值，计算出海水中叶绿素 a的浓度三、 仪器与设备1、 分光光度计或荧光计2、 抽滤装置：包括滤器、支架、抽滤瓶和真空泵3、 20叩孔径筛绢，2叩核孔滤膜，0.75叩玻璃纤维滤膜4、 离心机、超声波振荡器5、 其他：镊子、15m 1离心管四、 药品与试剂90%丙硐、MgCO3 溶液 p (MgCO3) =10g/L五、 实验步骤1 .将滤膜转移到15 mL离心管中，加10mL90%丙酮到管中，超声振摇10分钟， 放于低温(0C)冰箱内，提取12-24h。
过滤后滤膜应在1h内提取，若无条件提取测量， 可将滤膜对折，用铝箔包好，存放于低温冰箱(-20C),保存期可为60天或放入液氮中保 存期可为一年2. 萃取后，室温下将各离心管于5000r/min左右条件下离心5—10分钟3. 倾倒上清液到1-10cm光程的分光光度计的比色槽中，以90%丙酮作空白对照，用分光光度计测定波长为750nm、664nm、647nm、630nm处的消光值样品 应为室温，以避免湿气蒙在光电管上)4. 从664,647和630 nm的消光值减去750 nrn的消光值，以校正微粒浊度空白的消光值，用下面各式计算原海水样品中色素的含量：Phl.a (ug/L) = [11.85 (E664- E750)— 1.54 (E347- E750)— 0.08(E330- E750)] X 1000X Vi/ V2式中，V1为丙酮毫升数(10mL)，V2是过滤海水体积毫升数(100ml)。