植物病害标本采集与制作指导书FT!-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company Onel标本采集与制作综合实习（植物病害）指导教师：丁晓帆 适用专业：植保植物病害标本是对其症状的最直观的记载和描述它在教学中具有直观、不受季节和区域限制的特 点因此，植物病害标本的采集、制作和保存是植物病理学科实验（习）教学中必不可少的基础知识和 技能在植物病害标本的采集和制作过程中，应对症状的变化情况给以特殊的注意例如，症状可能表现 为典型症状，也可能表现为非典型症状，在采集时，均应加以注意一种病害，在同一种植物上，可以 同时表现出多种不同类型的症状；在植物生长发育的不同时期，也可以先后表现出多种不同类型的症 状，如橡胶白粉病标本采集后，除去需要及时分离和鉴定的标本外，其余的一般都要经过制作之后保存起来，以备需 要时进行分离和鉴定；或者是在教学和研究时，供观察和识别，要求是能尽量保持原来的性状一、目的要求学会采集植物病害标本的基本方法通过对常见的叶片和果穗等干标本以及对柔嫩果实的浸渍标本 的制作，同时训练真菌玻片标本的制作，学习并掌握标本干燥制作、浸渍制作以及玻片标本制作等基本 方法二、基本原理室外采集标本是获取植物病害标本的重要途径，也是熟悉植物病害的症状，了解植物病害发生情况的 最好方式。
标本的制作是为了日后能较为方便地观察植物病害的症状，无论用干燥制作法保存标本，还 是用浸渍制作法保存标本，都是为了尽量减缓所保存标本变质的速度或不使其腐烂霉变同时也是为了 尽量使标本保持其原色，以延长标本的使用时间和提高标本的保存质量真菌玻片标本的制作是为了直 观地观察病原物、辅助诊断、鉴定病害种类，并通过永久玻片标本的制作为后续教学工作提供基本素 材三、采集和制作标本用具1．采集标本的用具采集夹、采集袋、标本夹、标本纸、标本箱（筒）、剪刀、修枝剪、高枝剪、手 锯、手铲、纸袋、标签、手持放大镜及采集记录本、海拔仪、刀片、载玻片、盖玻片、小木板、挑针、 镊子、滴瓶、各种试剂等1）采集夹在野外临时收存新采标本的轻便夹子一般由两个对称的用一些木条按适当的间距平行 排列的栅状板（亦有用胶合板或硬纸板组成的），其上附有背带，在接近四个角落的地方，设有长短可以调 整的活动固定带或弹簧，以适应采集过程中标本逐渐增多的需要2）采集箱用于临时收存新采集的果实等柔软多汁的标本是由铁皮制成的扁圆箱，内侧较平，外 侧较鼓，箱门设在外侧，箱上设有背带3）标本夹是用来翻晒、压制标本的木夹由两个对称的一些平行排列的栅状板组成。
每块栅状板 在接近上下端处钉一根厚实的方木条，木条端部向外突出约5cm长，以便于用绳捆绑标本夹标本夹 上：应附有约 6m 长的一条绳子4） 标本纸主要用来吸收标本的水分，使标本逐渐干燥 —般用草纸或麻纸作标本纸，它们的吸水 性较好旧报纸也可代替，但因其上有油墨吸水性较差5） 修枝剪主要用于剪取较硬或韧性较强的枝条，高处的枝条要使用高枝剪，难于折断的枝干则要 借助于手锯手铲用来挖掘地下患病植物器官（如根、块根、块茎等）2．制作植物标本用具及试剂剪刀、标签、标本瓶、玻璃瓶、玻璃板、塑料绳、标本盒、水浴锅（或 简单的加热装置）、水、硫酸酮、亚硫酸、甲醛溶液、明胶、石蜡等四、实验操作（一）室外采集1．病叶 用剪刀剪取病植物上的发病叶片如小麦（玉米、美人蕉等）锈病的病叶、水稻稻瘟病的病 叶、玉米叶斑病（大、小斑病）的病叶、大豆（瓜类）霜霉病的病叶、马铃薯晚疫病的病叶、丁香（九 里香）白粉病的病叶及香蕉黑星病的病叶等，装入采集夹中尽量剪取整个病叶，同时，对于每一片叶 上的病斑，在颜色、大小以及形状方面都应是较为一致的2．病穗 用剪刀剪取水稻稻曲病的病穗、玉米丝黑穗病的病穗及玉米瘤黑粉病的病穗等，装入采集筒 中。
对于黑粉类的病穗，每种病穗要及时放入小的采集袋中，同时注意隔离，以防黑粉散落和不同病穗 间相互混杂3．病果 用剪刀剪取茄子褐纹病的病果、番茄（柑橘）溃疡病的病果、辣椒炭疽病的病果以及香蕉黑 星病（炭疽病）的病果等，装入采集筒中对于此类标本，特别是对于像番茄一类多汁的病果，要特别 加以注意，应先以标本纸分别包裹后，置于采集筒（箱）中，以防相互挤压而变形4．病根 用铁铲挖取植物根结线虫病的病根以及白菜根肿病的病根等，装入采集筒中在挖取此类病 害的标本时，要注意挖取点的范围要比较大一些，以保证取得整个根部同时，对于像根结线虫病害一 类的病根，在除去根须上的泥土时，操作要谨慎，保证其根须上的小根结和卵块不散落一般情况下，各种病害的标本最好采集10 份以上对于较薄的较易失水的叶片，如小麦和水稻的叶 片，在采集时应随时携带吸水纸或废旧的书，随采随压，以免叶片迅速打卷而不易展开提示：在采集病斑类的叶片标本时，一个叶片上应只有一种类型的病斑尤其是在各种病害混合发 生时采集标本，更需进行仔细的选择；对于真菌病害，标本应带有子实体，无子实体在回到室内后，鉴 定将非常困难二）采集记录 采集时，要随时作标记临时标签上一般应记录如下项目： 寄主名称：俗名和学名都有时，应同时记下。
采集时间：一般应记录年、月、日 采集地点：一般记录到省、市（县）即可，需要时也可记录到镇（乡）等采集人：姓名海拔高度：按海拔仪指示记录可不记） 生态环境：按照山坡地、平坦地、沼泽地；砂质土、肥沃土等记录 采集序号：一般按照采集时间的先后顺序记录提示：寄主名称如有不清楚的，能及时向当地人问明更好；如不能，应记下采集地的位置以及寄主 的一些主要性状，以备鉴定时参考必要时还应将寄主的花、果实以及其他部位标本一起采得，以便凭 借寄主的标本对该寄主进行分类鉴定三）标本的携带 田间采集后，茎或叶片类的标本装入采集袋中，每一种病叶放入一个小袋内之后，最好再放入一个 大一点的采集袋内；对于根或果实类的标本，各种标本在装入采集筒之前应分别用小采集袋装好密封或 用纸包裹好，然后，再装入采集筒中对于黑粉类的标本（如玉米丝黑穗的病穗），或腐烂类的标本（如茄 子褐纹病病果）等，要特别注意，标本间不要相互接触沾污，否则，对于病原的鉴定和病害的诊断会有影 响四）标本的整理 在完成田间采集的过程之后，首先要在室内进行标本的取舍和初步的整理对于同一种病害的标 本，应尽量保留带有典型症状的标本同时，对于真菌性病害，在发病部位应带有子实体，叶片或果实 要保持完整。
在整理时，应使其形状尽量恢复自然状态对于采集到的比较稀少的标本，如症状不典 型，或暂时观察不到子实体，也不要舍弃应该同样制作成标本，以备日后采取措施进行鉴定如果外 出采集，每天晚上都要将当天采集的标本进行整理、压制，第二天及时换纸或晾晒，防止霉变五）干燥标本的制作 1．含水量小的标本的压制对于像水稻和小麦等植物，其叶片比较薄，它们的叶片病害标本，需要经 过整理后，立即进行压制对于此类标本，在压制时，标本间的标本纸最好要多放几层，一般每层至少 用 3—5 张标本纸，以利于标本中水分的快速散失2．含水量大的标本的压制对于像甘蓝、大白菜、马铃薯等比较厚、不易失水的叶片，最好经过一段 时间（1〜2d）的自然散失水分，然后，再进行压制自然散失水分的时间不宜过长在具体操作时，最好 是在叶片将要卷曲但还未卷曲时进行，这与具体植物和环境条件有关3．附临时标签在压制时，每份标本都要附上临时标签，即将临时标签随着标本压在吸水纸之间临 时标签上的项目不必记载过多，一般只需记录寄主名称和顺序号即可，以防标本间相互混杂写临时标 签时，应使用铅笔记录，以防受潮后字迹模糊，影响识别4．标本整理在第1次换纸前，要对标本进行形状的整理，尽量使其舒展自然。
在整理时，要十分小 心特别对于比较柔嫩的植物标本，更应多加注意，以免破损5．换纸一般情况下，前一周的时间里要每天换干燥的吸水纸1次以后的时间，可隔天换纸，视情 况而定，直至标本完全干燥为止（在正常的晴好的天气条件下，一般经过10d左右的时间即完全干燥）在 换纸时，注意不要遗失临时标签；要特别注意不要混用已经污染了的纸张；对于完全干燥的标本，要特 别小心移动，以防破碎6．果穗及较粗大茎的标本的干燥对于这类标本应置于朝阳（但应避免强光直射）通风处，置于吸水纸 上，进行自然干燥同时，也要定期进行翻动，使其整体较为均匀地干燥对于此类标本的干燥，开始 时，就要选择在比较宽敞的空间内进行，以免其整个形状被挤压而发生变形7．装袋保存 用重磅道林纸（也可用牛皮纸，对于不用作交流的标本，也可报纸代替），折成纸袋如下 图，纸袋的大小可据标本的大小而定，其折叠方式也可据标本的不同形状而做适当的改进在装袋时， 要随时贴上正式标签六）浸渍标本的制作 此法制作的标本易保持标本原来的形态和色泽，但保存的时间有限，且需占用比较大的空间一般 用于制作教学和示范标本1．常用的浸渍液（1） 防腐漂白浸渍液此种浸渍液是由亚硫酸饱和溶液、酒精和水按照一定比例配制而成。
亚硫酸饱 和溶液，即指二氧化硫的饱和水溶液2） 保存绿色的浸渍液常用的有如下几种：①醋酸铜浸渍液反复用多次后保色能力会逐渐减弱， 需定期补加适量的醋酸铜②硫酸铜亚硫酸浸渍液用于保存绿色植物组织的效果很好，但应注意密封 容器，必要时每年换1次亚硫酸浸渍液此种方法也是实验室较为常用的液浸标本的保存方法 ③瓦查 （Vacha）浸渍液由亚硫酸、硫酸铜、酒精、乙酰水杨酸、福尔马林、丁香油和水等成分按比例配制而 成适于保存叶片和果实的绿色，也可保存梨和苹果等的黄色3） 保存黄色和橘红色标本的浸渍液配制方法是将亚硫酸（含二氧化硫5％〜6％）配成4％〜10％的 水溶液（二氧化硫 0．2％〜0．5％）可保存如杏、梨、柿、黄苹果、柑橘和红辣椒等标本4） 保存红色的浸渍液瓦查（Vacha）保存红色的浸渍液此种浸渍液分两部分：浸渍液1的主要成分 为硝酸亚钴、福尔马林、氯化锡等；浸渍液2的主要成分为福尔马林、亚硫酸、酒精等将标本洗净 后，在浸渍液 1 中浸两周，然后在浸渍液 2 中保存可用于保存草莓、辣椒、马铃薯以及其他红色的植 物组织，是一种效果比较好的浸渍液2．浸渍标本的保存浸渍标本一般保存在标本瓶、玻璃瓶或试管中。
浸渍标本最好置于暗处，以减缓 药液的氧化，或防止气温过高时瓶口碎裂瓶口一般需要密封，临时性封口时，可用蜂蜡、松香和凡士 林配成的混剂封口；永久性封口时，可用酪胶和消石灰配成的混剂封口；也可用明胶、重铬酸钾和熟石 膏调制而成的混剂进行永久性的封口1） 配制硫酸铜溶液根据需要，一般配制1000m1 5%的硫酸铜水溶液，在适当的玻璃容器中配制 溶液前，要考虑到所浸标本的大小，保证所浸标本全部位于液面下2） 预浸病果从室外采来新鲜的辣椒炭疽病的病果，在盛有5%的硫酸铜溶液的玻璃瓶中浸24h浸 病果时，需临时将病果用塑料绳缚在玻璃板上，一起放入溶液中否则，病果易浮在液面上，特别是对 于像辣椒这样的空心的果实，更易漂浮在液面上3） 漂洗病果从5%的硫酸铜溶液中取出病果，用清水漂洗6h可固定在水笼头下，打开水阀用流 水进行冲洗在冲洗时，水流不宜太急，否则，易破损标本，或将子实体冲刷掉4） 配制亚硫酸溶液在标本瓶中将含5%-6%二氧化硫的亚硫酸溶液15ml加水1 000ml（也可用如下 方法配制，即将浓硫酸20m1，稀释在1000ml水中然后加亚硫酸钠16g）提示：配制溶液时，要记住，将浓硫酸沿瓶壁缓缓倒入水中。