蜘?眷第中国食 用菌? !∀#耳卫 ∃时峨%6 住69?97567; ‘?%?∋,维生素?+?%?? ∃,/:≅%6∋ ? 3+三角瓶盛以上配方培 养液∃? ?3 +,∃%6−℃培养.天2−发酵罐培养1?配料与接种?发酵罐先空消罐 内配料,培养液配方同前配料后实消,蒸 汽压力 !∀#∃% 放罐标准?发酵液9∗倍镜检,可 观察有无杆菌感染杆菌污染时,发酵液有臭味4培养?当镜检尚不能判定有无杂菌污染时,以肉汤蛋 白陈培养基、麦芽汁培养基、?≅Α培养基稀释培养,可分别检测细菌、酵母菌和霉菌1/3注忌弯头、法兰、阀门 等 联 结处“死角”的杂菌污染1+3保持罐体正压运行,防止搅拌器轴封、闸 阀泄漏发醉实例多次发酵实例表明,在本工艺条件下,∗ ∗∋Β发酵液菌丝体干重的得量约为∀!(克,上清液和菌丝体的香菇多糖总量约为∗ (克1二3发酵动力学香菇发酵液 由菌丝体和上清液两部份组成,胞内多糖含于菌丝体,抱外多糖含于上清液研究发酵 过程中菌丝体生物量和多糖的积累规律及相关成份的变化,’ 对子提高多糖的产率有重婆惫汉表一香菇发酵 实例培养时问温度菌丝体 生 物最菌丝球 密度 发醉批次 1小时31℃31干 重∃%ΒΧ Χ∋Β31个八Χ Χ∋ Β3++∀∀) 5∀∗,∀∀)5∀ ,∀/)5∀+,∀)∀。
∀ −∗ ∗∀5∗)/∗/− )/)∗Δ()5∀(∀∀∗一!苗廷体生物皿变化的橄学像拟摇瓶培养试验测定香菇深层培养过程中菌丝体干重的变化,数 据经微机处理,得到菌丝体生物量1千重3随时向变化的回归方程1表二,图一3结果表明,菌丝体在深层培 养过程 中 的 变化是!前期增长缓慢,中期增长较快,后 期趋于停滞其回归方程的通式是?ΕΦ一Γ舀式 中?Η—菌丝体生物量1干重∃% ∗Χ ∋Β 3,Ι—培养时间 1天3!Φ—自然对数 的底,ϑ、Γ、≅7./Ν/−也认为,丝状真菌与单细胞真菌,醉母菌−最明显的区别在于 丝状真菌无对数生长期由于这 种生长速率上 的 差 异,使香菇的深 层 培养不但 较酵母、细菌的培养时间要长,而且在工艺上为防止杂菌污染所面临 的困难程度也大得 多由于胞内多糖与菌丝体的生物量呈 正相关,故香 菇发酵的终止 时期应是菌丝体的线性增长期的末期/培养过程中发醉液成份的变化对摇瓶过程 中发酵液的Θ∋、酸度,上清液的总糖、还原糖、氨基酸 总 量和胞外多糖的动态研究 表明 ,表三−,培养过程中发酵液的氢禽子活度随培养时间而增加,到培养末期,Θ∋稳定在)/.左右酸度表征发酵液中有机酸和无机酸的总量,发酵液的酸度随培养时间增加到一定程度后下降。
酸度峰值的出现时! Ρ !有随接种量增大 而提前的趋势培 养过程中总糖的变化趋势是随着培养 时间 的 延长含量下降,而还原塘和胞外多糖的含量呈抛物线形态的变化,在培养 中期达到最高值从还原糖 占总糖的比例看,先是递增,然后下降发酵液 的游离氨基酸总量在培养过程中呈下 降趋势)·菌丝体千盆、胞外多摘与发醉液有关成份的 相关分析在培养过程中香菇菌丝体的生物量是随时间变化 的单调增函数,故测定了有关成份中随时间变化而呈单调函数变化的总糖、氨基酸、Θ∋值与菌丝体干重的相关性,表四少从相关测 定结果 看,培养过 程中菌丝体干重与游离氨基 酸的总 量呈极 显著的负相关,ΘΣ+/+ ∗−,与Θ∋值有一定的负相关,ΘΣ+/∗ −,因此,可以发酵液游离氨基酸总量的变化,作为菌丝体干重或菌丝体胞 内多糖含量增长的监测指标,而Θ∋值因其测定方便,可作为辅助指标在培养过程中,胞外多糖含量呈单峰曲线变化,因此,将培养过程中具有相似变化的还 原糖、还原糖占总糖百分数、酸度等与多糖含量 进行相关测定,表五−表三培养 过程中发 酵 液 成 份 的变化/ // / // / // // / // // / // // / // // / /培养天数 项目 一’.Τ+」.?+? . 一一一一?∋酸度,毫克当量Ι( 。
田( −还原搪,岁(99>(−总糖,ΚΙ一99>(−还原糖占总搪,Γ−氨基酸总 量,氮>ΚΙ∗>( −胞 外 多 搪,/=Ι一++田!−20 4∗23 02一.∗Υ3 42?/.)33∗∗ ?2.11ς0+∗0】 +/+22表四菌丝体生物鱼与总糖、舅 基酸、Θ∋的相关 测 定项目相关系数,≅−显著性〔Θ−菌丝体生物最与总楷一+0 叹 .?Ω+/∗菌丝体生物量与氨基酸一+ 5)万ΘΣ+∗菌丝体生物量与Θ∋一+4后3 29一!−?−9·+.表五胞外 多 搪与 还原 糖、还 原糖Ι总糖、酸 度的相关 测定项目多 搪 与 还原 糖Ι总 糖多 糖 与还原 糖多糖 与 酸度相关系数,≅−显著性,Θ−+/. .? 0ΘΩ%0)? Ω% .+/=玉= 0ΘΣ+/+∗渔砂中润食州资一?功月 私虱Γ,酵母膏Γ、甘蔗.Γ,[∋,?%‘9Γ、∴ΚΠ %‘%∗Γ,,) −玉米粉)Γ,豆芽浆?Γ,葡萄糖∗Γ,酵母膏%Γ,甘蔗.Γ,甜玉米芯%Γ,[∋1?%‘+/?Γ,∴ΚΠ%‘+/∗Γ,,2− 玉米粉)Γ,豆芽浆?Γ,酵母膏+/.Γ,红搪∗Γ,甜玉 米?/发醉液的毒理学实验一般认为,大型食用真菌深层培养所获得的菌丝体与栽培所获得的子实体一样,是没有毒性的。
但这并不能表明,含有菌丝体代谢产物的上清液也不具有毒性为了对本工艺所获得的香菇发酵液长期食用的安全性评价,特委托 中国人民解放军第三军医大学 对发酵掖,包括菌丝体部份和上清液部份,按照卫生部,3. −卫防字第4 3号文件的规定,进行了急性毒性试验、蓄积毒性和致突变试验、亚慢性毒性试 验等三 阶段毒理学试验,结果表明,菌丝体和 上清液均无毒性,长期食用是安全可靠的,这就为本工艺所获得的香菇 发醉液的充分利用,提供了依据我们已利用发酵 液的菌丝体和上清液,研制成功了香菇多糖口服液、香菇可乐、香菇酒、香菇酱、香菇挂面、香菇糖、香菇饼干等系列营养、保健食口目口/ ,四 −发酵液 中 多糖的提取∗上清液胞外多璐的提取,∗−工艺流程离/二分离浓缩透析 发眯液—一,发酵上清液一,上清浓 缩液一,透析浓缩离心乙醉沉淀丙酮、乙醚洗涤 液一,浓缩 涪一,上清液—一,沉诧物—一—卡 ?1+于深 跑夕卜 粗多糖,?− 工艺条件1?离心沉降或离心过滤,分离发酵液中菌丝体和上清液4 上清液在不大于Λ ∗℃条件下浓缩至原体积的五分之一0,=
1三3试验方法?!采用配方13、1∀31/3、1+3进行探索试验条件!温度∀ (℃,转速 (∗ 89∋,摇瓶六天选定玉米粉、甜玉米芯粉15 ∗目过筛3、红砂糖、绿豆芽浆各若千,按Σ!1/‘3设计三水平四因素试验九个组合,二次重复采用(∗ ∗∋Β摇瓶随机旋转式摇床 内培养条件?温度∀ (℃,转速( Χ89∋,ΜΧ Χ∋Β摇并装量 ∗∗∋ Β,接/∗麦粒种1新制3黑暗振荡培养六天1四3测定?布氏漏斗真空过滤,菌丝在5 ∗℃烘箱恒重称重,进行数据处理结果与分析1一3试验结果?试 验结果汇 总为如下图表表示上清浓缩液置透析袋中,于流水中透析至透析液无还原糖止Τ透析液浓缩为原浓缩液体积,离心除去不溶物,将上清液冷却至室温Υ加/倍预冷至(℃的Λ(0乙醇,(, ∗℃下静置 ∀小时以上,沉 淀粗多糖ς沉淀物分别用无水乙醇、丙 酮、乙醚洗涤后,真空抽干,然后置??Π于燥器中进一步干燥,得到胞外粗多糖干品∀!菌丝体胞 内多搪的提取1 3工艺流程离心分离Ε澡抽提 发酵液—一‘菌丝体一菌丝体Ε粉—,提取液浓缩离心透析浓缩离心 提取浓缩 液一‘上清 液一,透析液一‘浓缩液一‘乙醉沉沈丙 酮、乙醚洗涤 上清液—一,沉淀物———,胞 内扭多糖 ?忍∗。
干燥1∀3工艺条件??菌丝体在) ∗℃干燥,粉碎,过5 ∗目筛4菌丝体干粉水煮抽提三次,总水量与干粉重之比为(∗, ∗∗?6 提取液在不大于Λ ∗℃下浓缩至原体积的 五分之一以下同胞外多糖提取工艺香菇多搪含怪的瀚定精确称取香菇粗多糖 千品(∋∃,加少量热水溶解后 移 至 ∗∗∋ Β容量 瓶中,加水至刻度,摇匀,精密量取∗!(,8 7Β,用苯酚—硫酸比色法测定其多糖含量1参考文献略3。