BCA蛋白检测方法蛋白检测方法Bicinchoninicacid(BCA)法是近来广为应用的蛋白定量方 法其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋 白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cul+BCA与Cu1+结 合形成稳定的紫蓝色复合物，在562nM处有高的光吸收值 并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度与 Lowery法相比，BCA蛋白测定方法灵敏度高，操作简单， 试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质 影响小与Bradford法相比，BCA法的显着优点是不受去 垢剂的影响BCA定量中的A和B液 BCA定量中的A和B液的成分是什么，作用是什么？ 试剂 A : BCA(bicinchoninincacid)碱性溶液 试剂B :硫酸铜溶液 作用：BCA与二价铜离子的硫酸铜溶液等其他试剂组成的 试剂，混合后显示苹果绿色在碱性条件下，BCA与蛋白 质结合时，蛋白质将Cu2+还原为Cu+， 一个Cu+螯合两个 BCA分子，工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物 试剂⑴试剂A:含1%BCA二钠盐、2%无水碳酸钠、0.16%酒石 酸钠、 0.4%氢氧化钠、 0.95%碳酸氢钠，将上述液体混合后 调 pH 至 11.25。
2) 试剂B : 4%硫酸铜3) BCA工作液：试剂A100mL+试剂B2L，混合4) 蛋白质标准液：准确称取150mg牛血清白蛋白，溶于 100mL 蒸馏水中，即为 1.5mg/mL 的蛋白质标准液5) 待测样品1、 将上述各管混匀后于37°C保温30分钟，用562nm波长 比色测定吸光度值2、 以蛋白质含量为横坐标，光吸收值为纵坐标绘制标准曲 线3、 用测定管光吸收值在标准曲线上查找相应的蛋白质含 量，再计算出待测血清中蛋白质浓度( g/L)待测样品浓度在50 ~ 2000微克/毫升浓度范围内有较好的 线性关系BCA蛋白检测BCAProteinAssay是基于在碱性条件下，Cu2+被蛋白还原成 Cu+,进而发生高敏感性和选择性的颜色变化，通过分光测 定，精确定量蛋白质浓度此方法与Bradford蛋白检测一 道，并列成为当今世界上最为常用的两种蛋白浓度检测方 法特点：1．高兼容性，尤其适用于表面活性剂存在下的蛋白浓度检 测，如细胞或组织的蛋白提取物2 •高敏感度可精确定量1 ~2000|jg/ml蛋白样品3.受温度和时间影响较大，需准确定时、定温，以保证蛋白 的精确定量 4.检测蛋白提取物或纯化蛋白样品，应使用相 应的缓冲液制备蛋白标准曲线。
同时样品的检测条件要与 蛋白标准曲线的检测条件保持一致，如37C放置30分钟5.562nm测定，也可用接近的波长检测，如570nm6.此检测试剂不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可兼 容样品中高达 5%的 SDS， 5%的 TritonX- 1 00 ， 5%的 Tween20， 60， 80但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影 响，需确保EDTA低于1mM，B-巯基乙醇低于10mM,无 EGTA,二硫苏糖醇低于1mM，B-巯基乙醇低于1mM。