饲料中粗蛋白测定方法1、 原理凯氏法测定试样中的含氮量， 即在催化剂作用下， 用硫酸破坏有 机物，使含氮物转化成硫酸铵加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸 吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数 6.25，计算出粗蛋白含量2、试剂2.1 硫酸（ GB 625）：化学纯，含量为 98％，无氮2.2混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB 665）,6g硫酸钾（HG 3 —920）或硫酸钠（ HG 3—908），均为化学纯，磨碎混匀2.3 氢氧化钠（ GB 629）：化学纯，40％水溶液（ m/V）2.4硼酸（GB 628）:化学纯，2%水溶液（mN ）2.5 混合指示剂：甲基红（ HG 3—958） 0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿 （HG 3—1220） 0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月2.6 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按 GB 601制备2.6.1 盐酸标准溶液：c （HCl） =0.1mol/L8.3mL 盐酸（GB 622,分 析纯），注入 1 000mL 蒸馏水中2.6.2 盐酸标准溶液：c（ HCl）=0.02mol/L1.67mL 盐酸（GB 622, 分析纯），注入 1 000mL 蒸馏水中。
2.7蔗糖（HG 3—1001）：分析纯2.8 硫酸铵（ GB 1396）：分析纯,干燥2.9硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1 OOOmL,加入0.1%溴甲酚绿乙 醇溶液 10mL， 0.1％甲基红乙醇溶液 7mL， 4％氢氧化钠水溶液 0.5mL， 混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用） 3、 仪器设备3.1 实验室用样品粉碎机或研钵3.2分样筛：孔径0.45mm （40目）3.3 分析天平：感量 0.0001g3.4 消煮炉或电炉3.5 滴定管：酸式， 10、25mL3.6 凯氏烧瓶： 250mL3.7 凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式3.8 锥形瓶： 150、250mL3.9 容量瓶： 100mL3.10 消煮管： 250mL3.11 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动4、 试样的选取和制备选取具有代表性的试样用四分法缩减至 200g,粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化5 分析步骤5.1.1 试样的消煮称取试样0.5〜1g （含氮量5〜80mg）准确至0.0002g,放入凯氏 烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸 和 2 粒玻璃珠，将 凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力 （360〜410C ）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少 2h。
5.1.2 氨的蒸馏：将试样消煮液冷却，加入 20mL 蒸馏水，转入 100mL 容量瓶中， 冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液将半微量蒸馏装置 的冷凝管末端浸入装有 20mL 硼酸吸收液和 2滴混合指示剂的锥形瓶 内蒸汽发生器 的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸 馏过程中保持此液为橙红色， 否则需补加硫酸 准确移取试样分解液 10〜20mL 注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口， 塞好入口玻璃塞，再加 10mL 氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流 入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气蒸馏 4min 降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏 1min ，用蒸馏 水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏5.1.2.3 蒸馏步骤的检验精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按5.1.2步骤进行操作，测得 硫酸铵含氮量为 2 1 . 1 9± 0 . 2％ ，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤 是否正确5.1.3 滴定用 5.1.2.1 或 5.1.2.2 法蒸馏后的吸收液立即用 0.1mol/L 或 0.02mol/L（ 4.6.2）盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为 终点。
6 、空白测定称取蔗糖0.5g,代替试样，按第5章进行空白测定，消耗O.1mol/L 盐酸标准溶液的体积不得超过 0.2mL消耗0.02mol/L盐酸标准溶液 体积不得超过 0.3mL7、 分析结果的表述7.1 计算见下式：粗蛋白质(％) = (V2-V1 ) • cx 0.0140X 6.25/ (mX V7 /V) X 100 式中：V2—— 滴定试样时所需标准酸溶液体积， mL;V1 滴定空白时所需标准酸溶液体积， mL;c 盐酸标准溶液浓度，mol/L ;m 试样质量，g;V——试样分解液总体积，mL;V 试样分解液蒸馏用体积，mL;0.0140——与I.OOmL盐酸标准溶液〔c (HCl) =1.000mol/L丨相当 的、以克表示的氮的质量6.25氮换算成蛋白质的平均系数7.2 重复性每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果 当粗蛋白质含量在 25％以上时，允许相对偏差为 1％当粗蛋白含量在10%〜25%之间时，允许相对偏差为2% 当粗蛋白质含量在 10％以下时，允许相对偏差为 3％。