1.配制培养基 向锥形瓶内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其 溶解，最后补足所需水分，加热至完全融化2. 配置0.85%的生理盐水，并分装至试管，每管9ml3. 将由包头纸或棉塞包好的锥形瓶及胶塞塞住的试管放入灭菌锅灭菌（121度30分钟， 如果培养基成分有葡萄糖则115度30分钟）4. 灭菌完成后待培养基凉至 50 度左右倒板 刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养 基倒入培养皿中，每皿约倒入10 毫升，以铺满皿底为度将培养皿放置24 小时后检查，如 培养基末长杂菌，即可用来培养微生物5. 将样品进行梯度稀释取样品 1g 至含有 9ml 生理盐水的试管中，震荡摇匀，此时浓度为 10-1从此试管取 1ml 至下一试管，浓度为 10-2依次类推6. 稀释梯度的选择以出现20~300个细菌菌落数的稀释梯度的平板为计数标准只有一个稀释度在20~300 之间以此梯度平均菌落数计算若有两个，则按两者比值决定，比值小于2 算平均数，大于 2 按稀释倍数小的计算。
7. 选择适宜稀释梯度的菌液用移液枪吸取100ul至培养基，用涂布器均匀涂布，至有阻 力感，每组三个重复于37度恒温培养箱倒置培养24h〜48h8. 每毫升菌液活菌数=菌落平均数*稀释倍数有效菌落数（亿/g,ml） CFU=10-8*有效菌落平均数*稀释倍数*基础液体积/样品量/加样。