实验五 GUS染色检测基因瞬时表达 王欢欢 二零一二.九报告基因gus基因（β-葡萄糖苷酸酶基因）是目前转基因植物中应用最为广泛的报告基因β-葡萄糖苷酸酶是一个水解酶，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可以用多种方法检测出来绝大多数植物没有葡萄糖苷酸酶的背景活性，因此gus作为报告基因广泛应用在植物基因工程中标记基因为gus的常用商业载体：pBI121组织化学法检测以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸（X-Gluc）作为反应底物，将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡若组织细胞被转入了gus基因，并表达出Gus，适宜的条件下，该酶就可将X-Gluc水解生成蓝色产物这是由其初始产物经氧化二聚作用形成的靛蓝染料，它使具Gus活性的部位或位点呈现蓝色，用肉眼或在显微镜下可看到，且在一定程度下根据染色深浅可反映出Gus活性因此利用该方法可观察到外源基因在特定器官、组织，甚至单个细胞内的表达情况gus基因转拟南芥的GUS检测结果GUS染色将拟南芥的幼苗或成年植株的组织浸泡于染色缓冲液中，置于真空罐中0.5Mbar抽真空10 min，使染液充分渗入到组织的内部，然后置于37 ℃浸泡过夜移去染液，用0.1 mol/L的磷酸缓冲液(pH7.0)冲洗2-3次。
再用70%的乙醇脱色，更换乙醇2-3次，记录并拍照侵染后的烟草叶片和注射烟草叶片也用同样的方法处理瞬时表达与稳定表达W38侵染叶片NB侵染叶片NB侵染下胚轴NB注射叶片拟南芥1拟南芥2拟南芥3拟南芥4拟南芥5瞬时表达稳定表达实验报告u实验目的u实验原理（简略写）u实验方法u实验结果及分析（最重要）u思考题（最后一次课给）切勿相互抄袭，支持原创，如有雷同后果自负 ！。