实验六实验六 巨噬细胞吞噬现象的观察巨噬细胞吞噬现象的观察 §1.1.通过观察小鼠巨噬细胞吞噬红细胞的试通过观察小鼠巨噬细胞吞噬红细胞的试验，了解巨噬细胞对异物吞噬的原理和功验，了解巨噬细胞对异物吞噬的原理和功能§2.2.了解巨噬细胞在机体非特异免疫中的重了解巨噬细胞在机体非特异免疫中的重要作用一、一、 实验目的实验目的 §高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和嗜中性粒细高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和嗜中性粒细胞，具有吞噬作用的功能它们广泛分布在组织和胞，具有吞噬作用的功能它们广泛分布在组织和血液中，在机体的非特异免疫功能中起着重要作用血液中，在机体的非特异免疫功能中起着重要作用§当病原微生物或其他异物侵入机体时，能招引巨噬当病原微生物或其他异物侵入机体时，能招引巨噬细胞，而巨噬细胞又有趋化性，它通过产生活跃的细胞，而巨噬细胞又有趋化性，它通过产生活跃的变形运动，主动向病原体和异物移行聚集，首先把变形运动，主动向病原体和异物移行聚集，首先把异物吸附在细胞表面，随之，吸附区域的细胞膜向异物吸附在细胞表面，随之，吸附区域的细胞膜向内凹陷，伸出伪足包围异物，并吞入胞质，形成吞内凹陷，伸出伪足包围异物，并吞入胞质，形成吞噬泡，继而在细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡融合，噬泡，继而在细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡融合，形成吞噬溶酶体，把病原体杀死，异物消化分解。
形成吞噬溶酶体，把病原体杀死，异物消化分解§巨噬细胞吞噬异物的能力在一定程度上反映了机体巨噬细胞吞噬异物的能力在一定程度上反映了机体免疫水平的高低免疫水平的高低 二、实验原理二、实验原理 单核细胞（上）和巨噬细胞（下）单核细胞（上）和巨噬细胞（下） 单核巨噬细胞吞噬过程示意图单核巨噬细胞吞噬过程示意图 巨噬细胞正在吞噬衰老的红细胞巨噬细胞正在吞噬衰老的红细胞 巨噬细胞吞噬细菌（电镜）巨噬细胞吞噬细菌（电镜） 肺巨噬细胞吞噬大肠杆菌（电镜）肺巨噬细胞吞噬大肠杆菌（电镜） §1. 仪器、用具：显微镜、高压灭菌锅、解剖盘、解仪器、用具：显微镜、高压灭菌锅、解剖盘、解 剖剪、剖剪、1ml注射器、吸管、载玻片、盖玻片注射器、吸管、载玻片、盖玻片§2. 材料：小鼠（体重材料：小鼠（体重20g左右），鸡血左右），鸡血§3. 试剂：试剂： 4%台盼蓝染液：台盼蓝染粉台盼蓝染液：台盼蓝染粉 0.4克，加克，加0.85%生生理盐水理盐水100ml 6%淀粉肉汤（含淀粉肉汤（含0.3%台盼蓝）：牛肉膏台盼蓝）：牛肉膏 0.3克；克；蛋白胨蛋白胨 1.0克；氯化钠克；氯化钠0.5克；蒸馏水克；蒸馏水 100ml。
加热后加热后,可加入可加入6.0克可溶性淀粉，促使溶解，再煮沸灭菌，克可溶性淀粉，促使溶解，再煮沸灭菌，置置40C冰箱保存，用时水浴熔化，加入适量冰箱保存，用时水浴熔化，加入适量4%台盼台盼蓝染液混匀，使呈蓝色蓝染液混匀，使呈蓝色三、实验仪器、材料和试剂三、实验仪器、材料和试剂 §1. 实验前实验前2d，，每天给小白鼠腹每天给小白鼠腹腔注射腔注射6%淀粉淀粉肉汤液（含台盼肉汤液（含台盼蓝）蓝）1ml§2.实验前，再向实验前，再向腹腔注射腹腔注射1ml 1%鸡红细胞悬鸡红细胞悬液，并轻揉腹部，液，并轻揉腹部，使鸡红细胞悬液使鸡红细胞悬液分散分散四、方法与步骤四、方法与步骤 §3. 20-30min后，用脊椎脱臼法处死小鼠（右手抓住后，用脊椎脱臼法处死小鼠（右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时按著鼠头鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时按著鼠头后的颈部，使脊椎与脑髓间断开致死）后的颈部，使脊椎与脑髓间断开致死） §4. 迅速剖开腹腔，用未装针头的注射器或吸管吸取迅速剖开腹腔，用未装针头的注射器或吸管吸取 腹腔液§ 5. 取一张干净载取一张干净载 玻片，滴一滴腹玻片，滴一滴腹 腔液，盖上盖玻腔液，盖上盖玻 片，放置片，放置2分钟分钟~3 分钟后在显微镜下分钟后在显微镜下 镜检。
镜检 §观察时，将视野光线调暗在高倍镜下，先分辨清观察时，将视野光线调暗在高倍镜下，先分辨清鸡红细胞和巨噬细胞鸡红细胞为淡黄色、椭圆形、鸡红细胞和巨噬细胞鸡红细胞为淡黄色、椭圆形、有核的细胞而数量较多、体积较大圆形或不规则有核的细胞而数量较多、体积较大圆形或不规则的细胞，其表面有许多似毛刺装的小突起（伪足），的细胞，其表面有许多似毛刺装的小突起（伪足），胞质中有数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盼蓝胞质中有数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盼蓝淀粉肉汤形成的吞噬泡）即为巨噬细胞变换视野淀粉肉汤形成的吞噬泡）即为巨噬细胞变换视野仔细观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程可见有的仔细观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程可见有的鸡红细胞（一至多个）紧贴附于巨噬细胞的表面；鸡红细胞（一至多个）紧贴附于巨噬细胞的表面；有的巨噬细胞已将有的巨噬细胞已将1 1至数个红细胞部分吞入；有的至数个红细胞部分吞入；有的巨噬细胞已吞入一个或几个红细胞在胞质中刚刚形巨噬细胞已吞入一个或几个红细胞在胞质中刚刚形成椭圆形的吞噬泡；有的巨噬细胞内的吞噬泡体积成椭圆形的吞噬泡；有的巨噬细胞内的吞噬泡体积缩小，并呈现圆形，这是与初级溶酶体发生融合，缩小，并呈现圆形，这是与初级溶酶体发生融合，泡内物正在被消化分解。
泡内物正在被消化分解 五、实验结果五、实验结果 六．注意事项六．注意事项§1 1、给小白鼠腹腔注射、给小白鼠腹腔注射6%6%淀粉肉汤时要注意淀粉肉汤时要注意 § 进针适度，注射量要合适进针适度，注射量要合适§2 2、给小白鼠腹腔注射时，抓小鼠不要太、给小白鼠腹腔注射时，抓小鼠不要太§ 紧，以免小鼠死亡紧，以免小鼠死亡§3 3、使用的载玻片要很干净使用的载玻片要很干净 七、实验讨论七、实验讨论§ 1 1．简述细胞吞噬作用的原理．简述细胞吞噬作用的原理§ 2 2．实验结果的分析．实验结果的分析。