辉山“益生缘”复合益生菌发酵乳促进人体肠道健康功效的临床研究【摘要】目的评估辉山“益生缘”复合益生菌发酵乳对人体促进肠道消化吸收及通畅的改 善效果;评估辉山“益生缘”复合益生菌发酵乳对肠道微生态菌群的改善效果;辉山“益生缘” 复合益生菌发酵乳对肠道短链脂肪酸的改善效果方法将符合要求的120名25〜45岁志愿 者根据男：女=1 : 2的比例被随机分为空白对照组、普通酸奶产品组、辉山“益生缘”复合 益生菌发酵乳组3个组除空白对照组以外的80名志愿者，分别在试验第1天至第21天服 用对应产品，每天2次，分别于午餐后lh及晚餐后lh服用，每次117g,持续3周结果 辉山“益生缘”复合益生幽具有明显改善肠道微生态环境，促进肠道短链脂肪酸的生成;改 善肠道症状，促进肠道通畅的作用，有助于消化吸收结论辉山“益生缘”复合益生菌发 酵乳产品对促进人体肠道消化吸收及通畅，肠道微生态环境的改善以及对肠道短链脂肪酸的 改善均具有显著的效果关键i司】复合益生菌；肠道营养；生物医学研究 [Abstract] Objective To evaluating the promotion effect of Hui Shan Y1SHENGYUAN Multiplex Lactobacillus Acidified Milk on bowel elimination, mild constipation improvement and physical intestinal canal microbial eco system. Methods The trial was a 21 days nmdomized trial on 120 healthy person aged from 25 to 45 years, the male to female ratio was 1 : 2, and the study subjects were randomly divided into 3 groups: Blank group, plain yogurt group, Hui Shan YISHENGYUAN Multiplex Lactobacillus Acidified Milk group. Each group intakes the corresponding products 117g twice everyday respectively 1 hour after lunch and supper. Results Both plain yogurt and Hui Shan YISHENGYUAN Multiplex Lactobacillus Acidified Milk have effectively improved digestive system and mild constipation, effectively increased viable count of Bifidobacteria and Lactobacillus, effectively increased viable count of Clostridiumperfringen, and effectively increased viable count of acetic acid, propionic acid, and butyricacid. Conclusions Significant effectiveness on physical bowel elimination, mild constipation improvement and physical intestinal canal microbial eco system were proved by intaking Hui Shan YISHENGYUAN Multiplex Lactobacillus Acidified Milk.[Key words] Multiplex probiotics; Enteral nutrition; Biomedical research益生菌是指一类对人体健康产生积极作用的微生物「1],它们通过改善人体肠道内的微生态 平衡进而促进人体健康。
近年来对益生菌的研究证明:其机体有多种生理调节作用主要功 效有[2]：①能够调节人体肠道曲群平衡，促进胃肠蠕动防止便秘，帮助消化;②改善自然免 疫功能(抑制癌症细胞)，抗过敏;③处理乳糖不耐症;④合成氨基酸及维生素B群;⑤抑制致癌 物质及其他有害微生物;⑥促进体内有益曲的生长;⑦降低血脂、血压;⑧延缓老化短链脂肪 酸(short chain fatty acids, SCFA),也称作挥发性脂肪酸(volatile fatty acids, VFA),是人结 肠细菌发酵的主要产物SCFA是结肠内重要的有机酸阴离子，山饮食中碳水化合物经肠道 细幽酵解生成其底物主要是非淀粉多糖、不消化淀粉尽管肠内SCFA生成量较大，但每 天随粪便排出量仅为7〜20 mmol,大部分SCFA在结肠内□,被吸收1材料与方法1.1材料近年来，通过消费含益生菌的食品从而达到维持胃肠道健康的目的，越来越受到人们的关注 [3]o通常在我国应用的益生幽是乳杆菌和双歧杆菌，因为乳杆菌和双歧杆IW是各个年龄阶 段人群肠道内正常菌群的重要组成部分2009年3月10日我国卫生部监督局公开征求《可 用于生产普通食品的菌种名单》中共包含了 3个菌属在内的19个菌种(卫监督食便函(2009) 74号)[2]：双歧杆菌属：青春双歧杆幽、动物双歧杆菌、两歧双歧杆幽、短双歧杆菌、婴儿 双歧杆菌L乳双歧杆菌L长双歧杆菌；乳杆菌属：嗜酸乳杆菌•、干酪乳杆菌、卷曲乳杆菌、 发酵乳杆曲-、格氏乳杆的、约氏乳杆曲、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆曲、鼠李 糖乳杆菌、唾液乳杆萌;链球菌•属：嗜热链球菌。
沈阳乳业有限责任公司研发的辉山”益生缘”复合益生菌发酵乳特别添加了乳双歧杆菌和嗜 酸乳杆菌，根据产品中添加益生菌的种类不同将产品分为普通酸奶产品和优益菌酸牛奶产 品其中普通酸奶产品中乳酸菌数量不少于l×108cfu/100 g;辉山”益生缘”复合益生菌 发酵乳产品中乳双歧杆菌含量不少于1 &tinies; 109cfu/100 g,嗜酸乳杆菌含量不少于 1 &tinies;l 08cfu/100 go1.2试验方法1.2.1分组试验中心位于北京，分别将符合要求的120名志愿者根据男：女=1 : 2的比例随机分为空白 对照组、普通酸奶产品组、辉山”益生缘”复合益生菌发酵乳组3个组除空白对照组外的 80名志愿者，分别在试验第I天至第21天服用对应产品，每天2次，分别于午餐后及晚餐 后lh内服用，每次117 g,持续3周1.2.2粪便实验室检杏在试验期间，分别于试验开始前3d、第三周最后3d内山指定医务人员采取60名志愿者（每 组20名）粪便样本，每位志愿者粪便采集一次，旦限定1 g,冷藏条件下放入密闭带盖的厌 氧取样瓶中细菌计数检验方法：样品稀释，取粪便1 g,加PBS缓冲液9 ml后，再加无菌玻璃珠充分 振荡5-10 min,静置后作为1 ： 10的待检液，再作连续10倍稀释（10 2-10 9）。
取上述各浓度含菌,液10μl接利，适合产气英膜杆菌、双岐杆菌、乳杆幽生长的选择性培养基 每个稀释度接种两块指定菌生长培养基，作为菌落计数时的平行样品经培养后选出菌落数 在30〜300间的培养基，计数前先对细菌进行鉴定短链脂肪酸检验方法：粪便样品烘干、研磨;有机溶剂萃取;数次过滤;沉淀法或过柱法去蛋白 （要预实验确定具体方法和条件）;过离子交换柱;衍生化处理;最终样品HPLC/GC→MS检 测1.2.3随访在基线日、试验开始第7天、第14天、第21天，护士或指定人员询问志愿者并填写护士或 指定人员记录，包括个人登记表、志愿者总表、心理健康及躯体活动状态表、排除标准表和 纳入标准表、消化系统评估表、排便评估表;志愿者每日填写布里斯托评分表每份调查问 卷将包含所需收集的信息和时间点主要研究员和研究组评估所提供信息的完整性和相关医 学资料1.3统计分析统计学处理对试验组和对照组间及基线特征进行统计学检验疗效的比较采用Cochran Mantel Haenszel持续性校正χ2检验，微生物检测资料采用F检验并对不同组别进行两两比较2结果2.1饮食习惯（饮食构成、进餐时间）此次完成试验的全体志愿者在试验过程中饮食习惯、进餐时间均无 任何变化。
2.2消化系统改善度从第7天开始，”益生缘”产品组的腹胀现象改善率达到55%,腹痛现象改善率达到65%,胃 胀现象改善率达到27.5%,胃部沉重现象改善率达到52.5%,食欲不振现象改善率达到 57.5%,肠道排气现象改善率达到75.0%,肠鸣音现象改善率达到67.5%,与空白对照组相 比差异均有统计学意义（均有PvO.OI）;从第14天开始，普通酸奶产品组的腹胀现象改善率达 到27.5%,腹痛现象改善率达到32.5%,胃胀现象改善率达到25.5%,胃部沉重现象改善率 达到25.0%,食欲不振现象改善率达到35.0%,肠道排气现象改善率达到50.0%,肠鸣音现 象改善率达到40.0%,与空白对照组相比差异均有统计学意义（均有P<0.05）;三组志愿者的肠 绞痛现象、胃绞痛现象变化率比较差异均无统计学意义（均有PXL05）2.3肠道健康状况评分（排便次数、排便时间、排便状况）”益生缘”产品组在排便次数、排便不畅占总排便次数比例、 排便时■间、排便状况项，组内比较以及与空白对照组相比均在第7天出现差异（PvO.Ol）;与普 通酸奶产品组相比，排便不畅改善率在第14天出现差异（PvO.Ol）,其余各项均在第7天出现 差异，其中排便时间项P<0.05,其余项PvO.Ol。
普通酸奶产品组:在排便次数、排便不畅 占总排便次数比例、排便时间、排便状况项，组内比较以及与空白对照组相比均在第14天 出现差异，其中排便时间项PvO.05,其余项P<0.01,见表1、表2、表3、表4排便习惯 满意度:”益生缘”产品组组间、组内比较均在第7天出现差异（PvO.Ol）普通酸奶产品组：组 间（空白对照组）、组内比较均在第14天出现差异（PvO.Ol）,见表5表1试验期间志愿者排 便次数比例变化表2试验期间志愿者出现排便不畅占总排便次数比例变化表3试验期间志 愿者排便时间变化表4试验期间志愿者排便状况变化表5试验期间志愿者对排便习惯满意 度的变化2.4布里斯托评分”益生缘”产品组在第一•周排便次数均值达到5.13（次/周），和组0的2.95（次/周）相比，以及与 自身基线2.98（次/周）相比,差异均有统计学意义（均有PvO.Ol）;普通酸奶产品组在第二周排便 次数均值达到5.23（次/周），和组0的2.98（次倜）相比，以及与自身基线2.90（次/周）相比,差 异均有统计学意义（均有P<0.0l）o ”益生缘”产品组在第一周排便里量均值达到121.58 g,和 组0的73.73 g相比，以及与自身基线72.78 g相比，差异均有统计学意义（均有PvO.Ol）;晋 通酸奶产品组在第一凋排便重量72.78 g达到79.22 g,和组0的73.73 g相比，以及与自身 基线72.45 g相比，差异均有统计学意义（均有P<0.01），见表6、表7。
表6试验期间志愿者 每周排便次数表7试验期间志愿者每周排便重量比较2.5实验室检测（粪便中双歧杆菌、乳杆菌、产气荚膜杆菌以及乙酸、丙酸、丁酸）”益生缘”产品组服用产品 后粪便检查中，双歧杆菌L乳杆菌明显增多，产气荚膜杆菌明显减少，以上3种细菌差异均 有统计学意义（均有P<0.01）;乙酸、内酸、丁酸。