食品中苏丹红检测方法探讨中国质量新闻网2008-11-26 15:17:25摘要本文介绍了食品中苏丹红检测方法的研究进展，主要包括高效液相色谱(HPLC)、 液相色谱-质谱(LC-MS)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、薄层层析法等关键词苏丹红高效液相色谱液相色谱-质谱气相色谱-质谱联用薄层层析近年来，一些国家和地区不断发生食品污染等恶性事件特别是随着科技的发展，一些原 来认为无害的食品添加剂，发现存在慢性或致癌作用，原来检测不出的有害物质被查出等苏 丹红是偶氮苯类人工色素，属于工业染料，主要用于油、蜡、鞋等的增光着色由于苏丹红I、II、III、IV及其代谢产物具有致癌性，国家禁止作为色素添加剂在食品中使用苏丹红 I、II、III、IV的检测方法有高效液相色谱法［1］、液相色谱-质谱法［2］、气相色谱-质谱联 用法［3］、薄层层析法［4］等1.高效液相色谱法对食品中苏丹红的检测高效液相色谱法是一种以液体为流动相的现代色谱柱分离分析方法，它是在经典液相色谱 的基础上，引入气相色谱的理论和技术发展起来的［5］原则上讲，只要能溶解在流动相中的 物质都可以用高效液相色谱法分析在目前已知的有机化合物中，有80%的有机化合物能用高 效液相色谱法分析［6］。
高效液相色谱法主要有以下几种：1.1欧洲委员会推荐的液相色谱法［7］该方法是将样品经匀浆化或粉碎后，加入乙睛(苏丹红III、IV加入氯仿)提取，过滤，滤 液用反相高效液相色谱仪进行色谱分析苏丹红I、苏丹红II的检测波长为478nm，苏丹红 III、苏丹红IV则为520nm苏丹I的检测限是0.013p g/ml、最低浓度为0.106p g/ml、在辣 椒粉样品中的添加回收率高于90%1.2国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管理委员会发布的高效液相色谱法该方法在欧洲委员会公布的检验方法的基础上作了改进苏丹红检测方法国家标准采用了 简单的正相吸附固相萃取原理，一次性去除了样品中红辣椒和番茄中的干扰成分，使用目前国 内已广泛应用的高效液相色谱仪就可准确完成4种苏丹红染料的检测该法用正己烷代替乙睛 做提取液，提取后经旋转蒸发仪蒸发浓缩，氧化铝层析柱固相萃取净化后，采用梯度洗脱，用 反相高效液相色谱进行色谱分析，外标法定量检测波长:苏丹红I为478nm；苏丹红II、苏丹红III、苏丹红IV为520nm于苏丹红I出 峰后切换王艳春［8 ］等简化了样品的前处理，避免高效液相色谱淋洗液乙睛、丙酮溶液对人体的损 害，降低了成本，提高了仪器稳定性［9］。
用0.1%甲酸的甲醇溶液作为淋洗液，不用梯度洗脱 测定食品中苏丹红含量研究了用高效液相色谱法测定食品中苏丹红的色谱条件、线性范围 该方法的检出限苏丹红I、苏丹红II、苏丹红III、苏丹红IV分别为：1川g/kg、10p g/kg、 8p g/kg、8p g/kg，相对标准偏差＜2.6%，回收率为88%〜106%1.3凝胶柱净化-高效液相色谱法凝胶层析是指混合物随流动相流经作为固定相的凝胶层析柱时，混合物中各物质因分子大 小不同而被分离的技术凝胶颗粒是一类具有三维空间多孔性网络结构的物质，不带电荷，可 起过滤或“筛”的作用，故又称为凝胶过滤或分子筛层析(gel chromatography)［10］Mazzctti M报道了一种简单而快速的苏丹I检测方法［11］，包括Soxtcc萃取、高压凝胶 层析纯化，HPLC紫外/VIS检测器检测最低检出限为7p g/kg，定量分析限为13p g/kg杨建荣等［12］认为苏丹I分子结构上的偶氮键可表现为弱碱性，在低pH值时，偶氮键的 氮原子可吸引少量质子H+，增强分子极性，洗脱加快；但洗脱液pH值在2〜4.5时，pH值变 化对分子极性影响不大，而pH值在4.0〜6.0时，分子极性随pH值变化非常明显。
并考察了联 苯胺、苏丹红III、偶氮蓝、丽春红4R四种偶氮染料对苏丹红I色谱分离的干扰，发现以pH值 为2.65的冰乙酸水溶液和乙月青为流动相进行线形梯度洗脱，可获得很好的分离效果杨建荣等［13］考察了不同配比的乙青-磷酸、乙青-乙酸乙酯和乙青-甲酸体系对苏丹红的分离情况结 果表明，采用乙青-乙酸溶液为流动相体系时，待测物谱峰纯度高欧盟法［14］流动相为16.5% 乙酸水溶液和乙青，酸度较高，对柱子要求也比较高张玉黔等［15］分别用0.1%、1%、10%醋 酸-乙青为流动相进行梯度洗脱结果表明，醋酸浓度对苏丹红的分离没有影响，但低浓度醋 酸对色谱柱的损害相对较小以及在此条件下待测样品的杂峰对苏丹红的测定也无影响，整个分 析时间只需32 min2. LC/MS法对食品中苏丹红的测定色谱-质谱联用技术结合了色谱、质谱两者的优点，故成为仪器分析进展的热点LC可以 直接分析不挥发性化合物、极性化合物和大分子化合物（包括蛋白、多肤、多糖、多聚物等）， 分析范围广，而且不需衍生化步骤［16］MS作为理想的色谱检侧器，不仅特异，而且具有极 高的检测灵敏度［17］因此，色谱-质谱联用长期为人们所关注随着各种离子化技术的不断 出现，液质联用在生物、医学等领域的地位越来越重要［18］。
对于复杂食品基质本底或一种新的基质本底，HPLC检测后，通过LC/MS确证苏丹红的存 在是必要的此外，如果光谱分析结果不令人满意（如待分析物浓度较低或可能存在结构类似 物时）也可用LC/MS技术进行确证质谱法比高效液相法灵敏20倍［19］可检出ppb数量级 由于涉及样品大多是辣椒和番茄制品，样品本身的复杂基质直接干扰仪器检测，且苏丹红具有 非离子性脂溶物的特点，导致样品提取、纯化、富集非常困难，采用好的提取溶剂往往造成提 取液中混入大量的干扰成分，若考虑低残留量进行富集往往首先浓缩的是样品的内源性物质， 结果使得干扰更为严重［20］由于这类染料的特点，先进国家普遍采用的研究方法是液相色谱 -质谱联用技术欧盟标准方法《辣椒粉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红和胭脂树橙的含 量分析》中也使用大型液质联用仪质谱检测仪具有定性优势，是我国标准发布前检测苏丹红 常用的办法有毛细管液相-电喷雾-飞行质谱法［21］，液相色谱-大气压化学电离-多极质谱法 ［22］和液相色谱-电喷雾质谱法［23］，均属于液相色谱-质谱联用检测法该方法经过液相分 离、光谱定量、质谱定性而最终实现对食品中苏丹红的检测用LC-ESI/MS法可以分析食品中4种苏丹红色素［10］。
样品中的苏丹红用乙睛提取，需纯 化色谱柱为Agilnet C18，流动相为乙睛-0.5%乙酸溶液（体积比72:28）采用正离子电离方 式，每种化合物选择3个碎片离子为定性离子以获得高选择性，选取每个化合物丰度最高的碎 片为定量离子以获得高灵敏度4种苏丹红色素的检出限(LOD)和检量(LQO)均为ng/g水平标 准加入量为0.2|j g/g水平时的回收率为86%〜98%，且重现性良好仪器分析时间仅需8min, 适合于大量样品快速分析染红食品”中苏丹红I、II、III和IV残留量的高效液相色谱(HPLC)初筛、质谱分析方 法已经报道［4］以MerckRP-18柱为分析柱，流动相：乙睛：水=90： 10,二极管矩阵检测器 (PDA)和MAX质谱仪为检测器平均回收率(%): 87.3、83.0、86.7和90.03. GC/MS法对食品中苏丹红的测定用气体作为流动相的色谱法称为气相色谱法(gas chromatography, GC)它是由惰性气体 将气化后的试样带入加热的色谱柱，并携带分子渗透通过固定相，达到分离的目的气相色谱 法具有分离效率高、灵敏度高及速度快的特点气质联用系统中，质谱仪相当于色谱的定性检 测器［16］。
气相色谱-质谱(GC-MS)选择离子检测法(SIM)，同时测定了食品中苏丹红I〜IV［25］色 谱柱为PR-SR石英毛细管柱载气He: EI离子源，选择m/z77，105，115，143，176，247， 248, 261，352, 380用于SMI检测，并按不同的采样时间分成4组，每组4个离子，分别对应于 每种苏丹红进行定性分析确证；选择苏丹红I〜IV各自的分子离子峰m/z248，276，352，380 作抽出离子图进行定量分析苏丹红I、II的线性范围为0.01〜10.0mg/L，苏丹红III、IV的 线性范围为0.1〜10.0mg/L；检出限：苏丹红I、II为川g/kg，苏丹红III为5p g/kg，苏丹 红IV为10p g/kg；回收率86%〜95%该法与欧洲健康与消费者保护委员会的方法(HPLC法)相 比，灵敏度高1〜2个数量级，分析时间缩短，用色谱保留时间，质谱同时定性，消除了食品中 杂质的干扰，结果准确可靠，选择性和重复性好，适用于所有食品成品及原料的检验固相萃取-气质联用被用于测定辣椒油中苏丹红I和苏丹红II［26］用Strata-X小柱进 行辣椒油样品的前处理，用气质联用法对苏丹红I和苏丹红II进行定性和定量分析。
对苏丹 红I和苏丹红II方法的检出限分别为0.5p g/L和0.7|J g/L，平均回收率分别为93.8%和 95.9%，RSD 分别为2.7%〜6.9%和 1.1%〜4.4%气相色谱-质谱(GC-MS)选择离子检测法(SIM),测定了食品中苏丹红I号［25］用石英毛 细管柱，He载气；EI离子源，选择m/z277、115、143、248离子用于SIM检测，并根据这4个 抽出离子的峰面积比进行确证苏丹红I号的线性范围为0.01〜10.0mg/L，相对标准偏差小于 6.1%，回收率85%〜90%，检出限为0.001mg/kg，每个样品分析时间为5min该法与欧洲健康与 消费者保护委员会发布的方法(HPLC法)相比灵敏度高两个数量级，分析时间缩短，用色谱保 留时间，质谱同时定性，消除了食品中杂质的干扰，避免了只用色谱保留时间定性可能产生的 错误，结果准确可靠，选择性和重现性好，适用于所有食品成品及原料的检验4. 薄层色谱法对食品中苏丹红的测定薄板和展开剂的选择在薄层色谱法测定中均起着关键作用，也是食品中苏丹红薄层色谱法 测定的研究重点薄板和展开剂对分开样品中苏丹红有重要影响王鲜俊等［27］比较了同一展开剂甲醇-丙 酮-醋酸在硅胶G薄层板、聚酰胺薄层板、硝酸盐-硅胶G板上对苏丹红I〜W的展开效果，发 现在聚酰胺薄层板上，苏丹红I〜W快速展开，且斑点集中；而硅胶G薄层板对苏丹红I、II 分不开，硝酸盐-硅胶G板对苏丹红III、W分不开。
张杨［28］采用展开剂正丁醇-无水乙醇-氨 水，在聚酰胺薄层板上可将苏丹红I〜W分开，但有拖尾现象庞艳玲［29］通过对比研究，发 现在硅胶G板上，展开剂正己烷-二氯甲烷-氨水可迅速、稳定地分开样液和标液中的苏丹红I〜W；而展开剂三氯甲烷-正己烷、三氯甲烷-石油醚、三氯甲烷-石油醚-醋酸不能将苏丹红 I、II分开；展开剂甲醇-丙酮-醋酸对苏丹红I〜W均不能分开5. 结束语国内外食品质量安全事件之所以接连发生，除了有关食品质量安全的法规不健全外，食品 检测技术不过关、检测仪器使用不方便也是重要的原因为保护人类健康，对食品中苏丹红染 料的测定需要进一步深入研究，尽快建立一种实用、快捷、准确可靠的检测技术参考文献[1] 李军，雍炜，李刚，等.HPLC法测定辣椒及其制品中苏丹红色素含量[J].检验检疫 科学，2005, 15 (2) : 44. 461.[2] 杨强，李刚，彭涛，等.辣椒及其制品中苏丹红I号的HPLC -MS/MS检测方法[J].中 国食品卫生杂志，2005, 17 (6) : 34. 361.[3] 林佶，万玉萍，沈其萍，等.GC /MS, SIM定性定量分析食品中的苏丹红1号[J].职 业与健康，2006, 22 (22) : 45.461.[4]。