《dtt含量测定》由会员分享,可在线阅读,更多相关《dtt含量测定(2页珍藏版)》请在金锄头文库上搜索。
1、二硫苏糖醇(DTT)含量测定操作细则 1. 方法:钼酸铵法2. 适用范围:本细则适用于HPV疫苗制品中的二硫苏糖醇含量的检测。3. 责任人:质量检测人员。4. 仪器与试剂:4.1 仪器:4.1.1 分光光度计4.1.2 电子天平4.1.3 吸管、量筒、中试管、试管架、烧杯4.1.4 水浴锅4.2 试剂配制:4.2.1 0.04mol/L钼酸铵(A液):称取5g钼酸铵,加蒸馏水溶解至100ml,4 保存。4.2.2 乙酸盐缓冲液(B液):称取0.295g无水乙酸钠、0.9676ml冰乙酸,加蒸馏水溶解至100ml, 4保存。4.2.3 0.2M NaH2PO4(C液):31.012g NaH2P
2、O4H2O加蒸馏水溶解至1000ml4.2.4 DTT标准液:50ug/ml4.2.4 显色液:A液+B液+2 mlC液5. 操作:5.1 标准曲线 精确量取标准DTT溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml分别加入试管中,补水至1ml,各管中均加入显色液1ml,80水浴锅4h 后,690nm测定其OD值,空白管调零。 5.2 样品测定精确量取适量样品补水至1ml,各管中均加入显色液1ml,80水浴锅4h 后,690nm测定其OD值,6. 计算结果:6.1 标准工作曲线:分别计算平行管OD值均值,将各稀释标准的DTT含量对其相应的OD值均值进行线性回归处理,求出其回归方程。6.2 样品DTT含量计算:将待测样品的OD值均值带入回归方程,计算出相应的值,本数值乘以相应的稀释倍数即为样品的DTT含量。7. 注意事项:7.1 各稀释度均应做两管平行7.2 标准曲线的线性方程r值不应小于0.99