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1、验证专题验证专题- -干热灭菌柜、湿热灭菌柜的验证策略干热灭菌柜、湿热灭菌柜的验证策略（包含培养箱、隧道（包含培养箱、隧道 烘箱、稳定性试验箱、干燥烘箱）烘箱、稳定性试验箱、干燥烘箱） 1 1 / 2828 一、一、 法规要求法规要求： 1 1、 无菌药品附录第六十一条无菌药品附录第六十一条 无菌药品应当尽可能采用加热方式进行最终灭菌，最终灭菌产品中的微生物存活概率微生物存活概率 （即无菌保证水平，（即无菌保证水平，SALSAL）不得高于）不得高于 1010 - -6 6。采用湿热灭菌 湿热灭菌方法进行最终灭菌的，通常标 准灭菌时间 F0 F0 值应当大于值应当大于 8 8 分钟分钟，流通蒸汽
2、处理不属于最终灭菌。 对热不稳定的产品，可采用无菌生产操作或过滤除菌的替代方法。 2 2、 无菌药品附录第六十三条无菌药品附录第六十三条 任何灭菌工艺在投入使用前，必须采用物理检测手段和生物指示剂，验证采用物理检测手段和生物指示剂，验证其对产品或物 品的适用性及所有部位达到了灭菌效果。 3 3、 无菌药品附录第六十四条无菌药品附录第六十四条 应当定期定期对灭菌工艺的有效性进行再验证（每年至少一次）（每年至少一次） 。设备重大变更后，须进行 再验证。应当保存再验证记录。 4 4、 无菌药品附录第六十五条无菌药品附录第六十五条 应当通过验证确认灭菌设备腔室内待灭菌产品和物品的装载方式装载方式。 5
3、 5、 无菌药品附录第六十七条无菌药品附录第六十七条 应当按照供应商的要求保存和使用生物指示剂生物指示剂，并通过阳性对照试验确认其质量通过阳性对照试验确认其质量。使用 生物指示剂时，应当采取严格管理措施，防止由此所致的微生物污染。 6 6、 无菌药品附录第六十九条无菌药品附录第六十九条 每一次灭菌操作应当有灭菌记录，并作为产品放行的依据之一灭菌记录，并作为产品放行的依据之一。 7 7、 无菌药品附录第七十条无菌药品附录第七十条 热力灭菌通常有湿热灭菌和干热灭菌，应当符合以下要求： （一）在验证和生产过程中，用于监测或记录的温度探头与用于控制的温度探头应当分用于监测或记录的温度探头与用于控制的温
4、度探头应当分 别设置， 设置的位置应当通过验证确定。别设置， 设置的位置应当通过验证确定。 每次灭菌均应记录灭菌过程的时间时间- -温度曲线温度曲线。 采用自控和监测系统的，应当经过验证，保证符合关键工艺的要求。自控和监测系统应 当能够记录系统以及工艺运行过程中出现的故障，并有操作人员监控。应当应当定期将独立定期将独立 的温度显示器的读数与灭菌过程中记录获得的图谱进行对照。的温度显示器的读数与灭菌过程中记录获得的图谱进行对照。 （二）可使用化学或生物指示剂监控灭菌工艺，但不得替代物理测试。 （三）应当监测每种装载方式所需升温时间，应当监测每种装载方式所需升温时间，且从所有被灭菌产品或物品达到设
5、定的灭 菌温度后开始计算灭菌时间。 （四）应当有措施防止已灭菌产品或物品在冷却过程中被污染。除非能证明生产过程中 可剔除任何渗漏的产品或物品，任何与产品或物品相接触的冷却用介质（液体或气体）任何与产品或物品相接触的冷却用介质（液体或气体） 应当经过灭菌或除菌处理。应当经过灭菌或除菌处理。 8 8、 无菌药品附录第七十一条无菌药品附录第七十一条 湿热灭菌应当符合以下要求： （一） 湿热灭菌工艺监测的参数应当包括灭菌时间、 温度或压力。腔室底部装有排水腔室底部装有排水 口的灭菌柜，必要时应当测定并记录该点在灭菌全过程中的温度数据。口的灭菌柜，必要时应当测定并记录该点在灭菌全过程中的温度数据。灭菌工
6、艺中包括 抽抽真空操作的，应当定期对腔室作检漏测试。真空操作的，应当定期对腔室作检漏测试。 （二）除已密封的产品外，被灭菌物品应当用合适的材料适当包扎，所用材料及包扎方 式应当有利于空气排放、蒸汽穿透并在灭菌后能防止污染。在规定的温度和时间内，被 灭菌物品所有部位均应与灭菌介质充分接触。 9 9、 无菌药品附录第七十二条无菌药品附录第七十二条 干热灭菌符合以下要求： 验证专题验证专题- -干热灭菌柜、湿热灭菌柜的验证策略干热灭菌柜、湿热灭菌柜的验证策略（包含培养箱、隧道（包含培养箱、隧道 烘箱、稳定性试验箱、干燥烘箱）烘箱、稳定性试验箱、干燥烘箱） 2 2 / 2828 （一） 干热灭菌时，
7、灭菌柜腔室内的空气应当循环并保持正压， 阻止非无菌空气进入。 进入腔室的空气应当经过高效过滤器过滤，高效过滤器应当经过完整性测试。进入腔室的空气应当经过高效过滤器过滤，高效过滤器应当经过完整性测试。 （二） 干热灭菌用于去除热原时，验证应当包括细菌内毒素挑战试验。干热灭菌用于去除热原时，验证应当包括细菌内毒素挑战试验。 （三） 干热灭菌过程中的温度、时间和腔室内、外压差应当有记录。 1010、 中国药典（中国药典（20152015 版）第四部版）第四部 14211421：灭菌法：灭菌法 10.1 灭菌程序的验证是无菌保证的必要条件。灭菌程序经验证后，方可交付正式使用。验 证内容包括： (1)撰
8、写验证方案及制定评估标准。 (2)确认灭菌设备技术资料齐全、安装正确 ，并能处于正常运行(安装确认） 。 (3)确认灭菌设备关键控制和记录系统能在规定的参数范围内正常运行（运行确认） 。 (4)采用被灭菌物品或模拟物品采用被灭菌物品或模拟物品按预定灭菌程序进行重复试验，确认各关键工艺参 数符合预定标准，确定经灭菌物品的无菌保证水平符合规定(性能确认） 。 (5)汇总并完善各种文件和记录，撰写验证报告。日常生产中，应对灭菌程序的运 行情况进行监控，确认关键参数(如温度、压力、时间、湿度、灭菌气体浓度及吸收的 辐照剂量等)均在验证确定的范围内。灭菌程序应定期进行再验证。当灭菌设备或程序 发生变更（
9、包括灭菌物品装载方式和数量的改变灭菌物品装载方式和数量的改变）时，应进行重新验证应进行重新验证。 10.2 湿热灭菌法： 通常采用 12112115min15min、12112130min30min 或或 11611640min40min 的程序，也可采用其他温度 和时间参数， 但无论采用何种灭菌温度和时间参数， 都必须证明所采用的的灭菌工艺和监控 措施在日常运行过程中能确保物品灭菌后的确保物品灭菌后的 SALSAL1010 - -6 6。 。 当灭菌程序的选定采用当灭菌程序的选定采用 F0F0 值概念时，值概念时，应采取特别措施确保被灭菌物品能得到足够的无 菌保证，此时，除对灭菌程序进行验证
10、外，还必须在生产过程中微生物进行监控，证明污必须在生产过程中微生物进行监控，证明污 染的微生物指标低于设定的限度。染的微生物指标低于设定的限度。 对热稳定的物品热稳定的物品， 灭菌工艺可首选过度杀灭法首选过度杀灭法， 以保证被灭菌物品获得足够的无菌保证 值。热不稳定性物品热不稳定性物品，其灭菌工艺的确定依赖于在一定的时间内，一定的生产批次的被灭菌 物品灭菌前微生物污染的水平及其耐热性。灭菌前微生物污染的水平及其耐热性。因此，日常生产全过程应对产品中污染的微生 物进行连续地、严格地监控，并采取各种措施降低物品微生物污染水平，特别是防止耐热菌 的污染。热不稳定性物品的热不稳定性物品的 F0F0 值
11、一般不低于值一般不低于 8 8 分钟分钟 。 湿热灭菌法应确认灭菌柜在不同装载时可能存在的冷点。 当用生物指示剂进一步确认灭 菌效果时，应将其置于冷点处。本法常用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子嗜热脂肪芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus stearothermophilus)。 10.3 干热灭菌法 干热灭菌条件一般为（160170160170）120min120min 以上、 （以上、 （170180170180）60min60min 以上或以上或 250250 45min45min 以上以上,也可采用其他温度和时间参数。无论采用何种灭菌条件，均应保证灭菌后的 物品的 SA
12、L10 -6。 采用干热过度杀灭后的物品一般无需进行灭菌前污染微生物的测定。25250 04545minmin 的 干热灭菌也可除去可除去无菌产品包装容器及有关生产灌装用具中的热原物质热原物质。 采用干热灭菌时，被灭菌物品应有适当的装载方式适当的装载方式，不能排列过密，以保证灭菌的有效性保证灭菌的有效性 和均一性和均一性。 干热灭菌法应确认灭菌柜中的温度分布符合设定的标准温度分布符合设定的标准及确定最冷点位置确定最冷点位置等。常用的 生物指示剂为枯草芽孢杆菌孢子枯草芽孢杆菌孢子（Spores of Bacillussubtilis )。细菌内毒素灭活验证细菌内毒素灭活验证 试验试验是证明除热原
13、过程有效性的试验。一般将不小于不小于 10001000 单位单位的细菌内毒素加入待去热原 的物品中，证明该去热原工艺能使内毒素至少下降证明该去热原工艺能使内毒素至少下降 3 3 个对数单位个对数单位。细菌内毒素灭活验证试 验证专题验证专题- -干热灭菌柜、湿热灭菌柜的验证策略干热灭菌柜、湿热灭菌柜的验证策略（包含培养箱、隧道（包含培养箱、隧道 烘箱、稳定性试验箱、干燥烘箱）烘箱、稳定性试验箱、干燥烘箱） 3 3 / 2828 验所用的细菌内毒素一般为大肠埃希菌内毒素大肠埃希菌内毒素（Escherichia coliendoxin)。 10.4 生物指示剂 D D 值：微生物的耐热参数值：微生物
14、的耐热参数，系指一定温度下，将微生物杀灭 90%所需的时间，以分钟表 示。 生物指示剂中包含一定数量的一种或多种孢子， 可制成多种形式多种形式。 通常是将一定数量的 孢子附着在惰性的载体上附着在惰性的载体上，如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等；孢子悬浮液也可密封孢子悬浮液也可密封 于安瓿中于安瓿中；有的生物指示剂还配有培养基系统配有培养基系统。 常用生物指示剂： ( 1 ) 湿热灭菌法湿热灭菌法 湿热灭菌法最常用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（Spores of Bacillus stearothermophilus, 如 NCTC 10 007、NCIMB 8157、
15、ATCC 7953) 。D D 值为值为 1.51.5 3.0min3.0min，每片（或每瓶）活孢子数 5 51010 5 55 5 1010 6 6个 个 ，在 121C、19min 下应被完全杀 灭。此外，还可使用生孢梭菌生孢梭菌孢子孢子（Spores of Clostridium sporogenes, 如 NCTC 8594、 NCIMB 8053、ATCC 7955),D D 值为值为 0.0.4 40.0.8min8min。 ( 2 ) 干热灭菌法干热灭菌法 干热灭菌法最常用的生物指示剂为枯草芽孢杆菌孢子枯草芽孢杆菌孢子（Spores of Bac illus subtilis，
16、如 NCIMB 8058、ATCC 9372)。D D 值大于值大于 1.5 min 1.5 min ,每片活孢子数 5 51010 5 5 5 51010 6 6 个个。去热原验证时使用大肠埃希菌内毒素大肠埃希菌内毒素(Escherichia coliendoxin )，加量不不 小于小于 10001000 细菌内毒素单位细菌内毒素单位 。 1111、 USP USP （药品生产验证指南（药品生产验证指南 20032003 版也提到）版也提到）- -针对干热灭菌针对干热灭菌，主要就是指主要就是指隧隧 道烘箱道烘箱 对于运行温度高于运行温度高于 250250的干热灭菌、除热原系统的干热灭菌、除热原系统，其灭菌腔室内空载热分布的可接受的合空载热分布的可接受的合 格范围为格范围为1515。此试验应连续进行 3 次，以证明热分布的重现性，试验所采用的热电偶分 布及全部试验数据的原始记录均应归档，必要时应附在验证报告
