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1、生物化学实验报告书【篇一：2014生物化学实验报告册模板】 生物化学实验报告 姓 名： 学 号： 专业年级： 组 别： 第六实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称 实验日期 2014-03-01 合作者 评分folin-酚试剂法测定蛋白质含量 实验地点 指导老师 教师签名 第二实验室 批改日期 格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用times new roman；标题用：四号，黑体，加粗。需强调的地方请用蓝颜色标出。不得出现多行、多页空白现象。 一、实验目的 二、实验原理 三、材料与方法：以流程图示意 四、结果与讨论：结果：实验数据、现象、图谱；讨论：以结果
2、为基础的逻辑推论，并得出结论。【篇二：生物化学实验报告】 实验一 糖类的性质实验 （一） 糖类的颜色反应 一、 实验目的 1、了解糖类某些颜色反应的原理。 2、学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。 二、 颜色反应 2、器材 试管及试管架，滴管 3、试剂 1葡萄糖溶液100 ml 1果糖溶液100 ml 1蔗糖溶液100 ml 1淀粉溶液100 ml 0.1糠醛溶液100 ml 浓硫酸 500 ml 4、实验操作 取5支试管，分别加入1葡萄糖溶液、1果糖溶液、1蔗糖溶液、1淀粉溶液、0.1糠醛溶液各1 ml。再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。倾斜试管，小心地沿试管壁加入浓硫酸1 ml，
3、慢慢立起试管，切勿摇动。观察记录各管颜色。 （二） 间苯二酚反应 1、原理 在酸作用下，酮醣脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮醣的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反应。 2、器材 试管及试管架，滴管 3、试剂 塞氏试剂：0.05间苯二酚盐酸溶液1000 ml，称取间苯二酚0.05 g溶于30 ml浓盐酸中，再用蒸馏水稀至1000 ml。 1葡萄糖溶液100 ml 1果糖溶液100 ml 1蔗糖溶液100 ml 4、实验操作取3试管，分别加入1葡萄糖溶液、1果糖溶液、1蔗糖
4、溶液各0.5 ml。再向3支试管中各加入塞氏试剂5 ml，充分混合。将试管同时放入沸水浴中，。观察记录各管颜色。 (二)糖类的还原作用 一、实验目的 1、理解并掌握糖类的还原性质； 2、学习常用的鉴定糖类还原性的方法。 3、了解斐林氏、本尼迪克特试法检验糖的原理。 二、实验原理 还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。在碱性溶液中，还原糖能将cu2+、hg2+、fe3+、ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化成糖酸及其他产物。糖类的这种性质常被用于糖的定性和定量测定。 三、器材 试管及试管架，水浴锅 电炉 四、试剂 1 斐林试剂 甲液 氢氧化钠的质量
5、分数为0.1 g/ml的溶液。 乙液 硫酸铜的质量分数为0.05 g/ml的溶液。 2 本尼迪克特试剂 3 1葡萄糖溶液100 ml 4 1果糖溶液100 ml 5、1蔗糖溶液100 ml 五 实验操作 六 思考题 1、斐林氏、本尼迪克特试法检验糖的原理是什么？ 2、试比较斐林氏、本尼迪克特试法的方法。 实验二 总糖的测定-蒽酮比色法 一、实验目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、实验原理 强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大吸收。在10-100ug范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有
6、很高的灵敏度，糖含量在 30ug左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 1 .仪器 (1) 分光光度计 (2) 电子顶载天平 (3) 三角瓶： 50m1 x 1 (4) 大试管： 9 支 (5) 试管架，试管夹 (6) 漏斗，漏斗架 (7) 容量瓶： 50 m1 x 2 (8) 刻度吸管： 1m1x3 ， 2m1x1 ， 5mlx1 (9) 水浴锅 2 .试剂 (1) 葡萄糖标准液： l00ug/ml (2) 浓硫酸 (3) 蒽酮试剂:0.2g 蒽酮溶于100ml浓 h2so4中当日配制使用。 3 .材料 小麦分蘖节（或者其它
7、材料）。 四、操作步骤 1 .葡萄糖标准曲线的制作后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸 l0min 取出，用流水冷却，室温放置 10min ，在 620 nm 波长下比色。以标准葡萄糖含量（ug) 作横坐标，以吸光值作纵坐标，作出标准曲线。 2 .植物样品中可溶性糖的提取 将小麦分蘖节剪碎至 2mm 以下，准确称取 1g, 放入 50m1三角瓶中，加沸水25m1，在水浴中加盖煮沸10min ，冷却后过滤，滤液收集在50m1容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液2m1 ，置另一50m1 容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀测定。 3 .测定 吸取lml 已稀释的提取液于
8、大试管中，加入4.oml 蒽酮试剂，以下操作同标准曲线制作。比色波长 620nm ，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ug）。 五、结果处理 六、注意事项 1 该显色反应非常灵敏，溶液中切勿混入纸屑及尘埃。 2 h 2 so 4 要用高纯度的。 3 不同糖类与蒽酮的显色有差异，稳定性也不同。加热、比色时间应严格掌握。 七、思考题 1蒽酮比色测定糖的原理是什么？ 2 用水提取的糖类有哪些？ 3 制作葡萄糖标准曲线应注意哪些事项？ 4 分光光度计的原理是什么？使用时需要注意哪些？ 实验三 粗脂肪的提取和定量测定 一 实验目的 1. 学习和掌握粗脂肪提取的原理和测定方法。 2. 熟悉和掌握重
9、量分析的基本操作，包括样品的处理、定量转移、烘干、恒重等。 二 实验原理 本法为重量法，用脂肪溶剂将脂肪提出后进行称量。该法适用于固体和液体样品，通常将样品浸于脂肪溶剂，如乙醚或沸点为30-60度的石油醚，借助于索氏提取管进行循环抽提。本法提取的脂溶性物质为脂肪类似物的混合物，其中含有脂肪，游离脂肪酸，磷脂，酯，固醇，芳香油，某些色素及有机酸等，因此，称为粗脂肪。 用该法测定样品含油量时，通常采用沸点低于60度的有机溶剂，此时，样品中结合状态的脂类（脂蛋白）不能直接提取出来，所以该法又称为游离脂类定量测定法。 三 仪器、试剂和材料 1 .仪器 索式提取器，分析天平，烧杯，烘箱，干燥器，恒温水浴
10、，脱脂棉，脱脂滤纸，镊子 2 试剂和材料 石油醚 芝麻或者花生等油料种子。 四、实验步骤 1.样品的准备 将花生在80度烘箱内烘去水分，烘干时需避免过热，冷却后准确地称取1克左右放入研钵中研碎，再用滤纸将样品包裹好放入索氏提取管内。注意勿使纸包内样品高于提取管的虹吸部分，研磨后的研钵应用滤纸擦净并将滤纸放入提取管内，用少量溶剂洗涤研钵，将溶剂倒入提取管中 2.抽提 2.1洗净提取瓶于105度烘干至恒重，记下其重量。装入石油醚达提取瓶容积的一半，连接提取器各部分，不能漏气（不能用凡士林或真空脂）。 2.2 加热提取：使石油醚每小时循环10-20次，约2-2.5小时，用滤纸粗略判断脂肪是否提取完全
11、。 2.3 蒸去石油醚，烘干至恒重。 3.称量计算 思考题 1、索式提取法提取的为什么是粗脂肪？ 2、做好本试验应注意哪些事项？ 3、本实验装置磨口处为什么不能涂抹凡士林或真空脂？【篇三：生物化学实验报告】 2012年生物化学实验b 姓 名：学 号：实验时间：实验分组：组内成员：任课教师：实验报告 xxxx 2012年11月17日 摘要 本实验通过从小牛肠中通过刮去，离心，析出等方式提取小牛肠碱性磷酸酶，再通过sds-聚丙烯凝胶电泳测定蛋白质相对分子量，利用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量及测定酶的活性。 1. 实验部分 1.1试剂与仪器 1.试剂： （1）正丁醇、丙酮。 （2）1 mol/l 醋酸
12、，1 mol/l naoh，硫酸铵。 （3）平衡缓冲液：0.01 mol/l tris-hcl，ph 8.0。 （4）底物缓冲液：1 mol/l 二乙醇胺-盐酸缓冲液。 （7）分离胶缓冲液：1.5 mol/l tris-hcl缓冲液，ph 8.8，已加入10% sds。 （8）浓缩胶缓冲液：0.5 mol/l tris-hcl缓冲液，ph 6.8，已加入10% sds。 （9）10% 过硫酸铵。 （10）temed（四甲基乙二胺）。 （11）上样缓冲液：称100 mg sds、2 mg溴酚蓝、2 g甘油，加0.1 ml巯基乙醇、2 ml 0.05mol/l ph 8.0 tris-hcl，加超
13、纯水定容至10 ml。 （12）染色液：配置含0.1% 考马斯亮蓝r250，40%甲醇和10%冰醋酸的染色液500 ml，过滤后备用。 （13）脱色液：500 ml 10%甲醇和10%冰醋酸的脱色液1000 ml。 （14）电泳缓冲液。 2.仪器 匀浆机、eppebdorf5型冷冻离心机、gsy2型恒温水浴、uv762型紫外可见分光光度计。离心管，剪刀，载玻片，不锈钢盘，搪瓷盘，滤布，漏斗，分液漏斗，量筒，烧杯，移液抢，比色皿，dyy11型电泳仪，24d型电泳槽，制胶板，揺床，移液枪。 1.2 小牛肠碱性磷酸酶提取方法 1）取新鲜小牛肠，用剪刀剖开，用载玻片刮取小肠内粘膜，放到盘子一角。2）将
14、小肠粘膜液集中倒入匀浆机中，加冰冷蒸馏水，高速匀浆，重复多次。 3）缓慢加入冰冷正丁醇高速匀浆重复多次。在4，10000 rpm条件下离心。 4）用滤布过滤去除杂质，倒入分液漏斗中，静止分层，取下层水相，用hac溶液调ph到4.9。4，10000 rpm，离心。 5）得到上清后放入离心管中，用naoh溶液调ph至6.5，称取硫酸铵加到离心管中溶解；再加冰冷丙酮，混匀，4静置30 min以上。4，10000 rpm，离心。 6）上清液中加入冰冷丙酮，4放置30 min以上。4，10000 rpm，离心。 7）取沉淀溶于平衡缓冲液至全部溶解至冰箱保存待用。 8）底物处理：底物37水浴5 min。
15、1.3 小牛肠碱性磷酸酶酶活检测方法 1）将酶稀释10倍。 2）紫外分光光度计检测条件为405 nm波长，测定时间60 s，取值2 s，记录范围0.0-1.5。3）取2个2 ml比色皿，加入上述（2）加热的底物缓冲液，校对归零。 4）将稀释10倍的酶液加到其中1个比色皿中（仪器外侧），用手堵住皿口。快速 上下倒2次，放回分光光度计中，测定酶动力学曲线 1.4 聚丙烯凝胶制备 1）装板：将垂直板型电泳的玻璃片洗净、晾干；放好胶条，用夹子夹好玻璃板，上面插上梳子，垂直放置在水平台面上备用。 2）制备分离胶：在小烧杯中按下表配制所需浓度的分离胶。 分离胶制备（浓度10%，制备量10 ml） 试剂 用量 h2o 30% 丙烯酰胺 1.5 mol/l tris-hcl缓冲液ph 8.8 10% 过硫酸铵 temed 3）制备浓缩胶：在小烧杯中按下表配制所需浓度的浓缩胶。浓缩胶制备（浓度5%，制备量6 ml）
