《硕士学位论文-MrgC受体对神经病理性痛的调制和AM在疼痛中的作用研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《硕士学位论文-MrgC受体对神经病理性痛的调制和AM在疼痛中的作用研究（79页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中文文摘学校编号 10394 图书分类号 学 号 20111045 密 级 全 日 制 研 究 生 硕 士 学 位 论 文MrgC受体对神经病理性痛的调制和AM在疼痛中的作用研究Modulation effect of Mas-related gene receptors on neuropathic pain and the role of adrenomedulline in pain 学 科 专 业： 细胞生物学 研 究 方 向： 神经生物学 指 导 教 师： 申请学位级别： 理学硕士 论文提交日期： 2014年 月 日 论文评阅人： 论文答辩日期： 2014年 月 日 答辩委员会主席：
2、 学位授予单位： 福建师范大学 学位授予日期： 年 月 日 2014 年 月 中文摘要Mrg受体（Mas-related gene receptors）是一种仅存在于三叉神经节（trigeminal，TG）和背根神经节（dorsal root ganglia，DRG）中小型神经元上的G蛋白偶联受体，又被称为感觉神经元特异性受体。牛肾上腺髓质素8-22（bovine adrenal medulla peptide 8-22，BAM8-22）作为Mrg C受体特异性激动剂，可以抑制神经病理性痛大鼠的痛觉过敏。研究表明星形胶质细胞、Fractalkine、IL-1在神经病理性痛的发生中具有重要作用，
3、研究同时发现AM作为CGRP家族成员也参与了疼痛的发生。本实验通过大鼠机械刺激痛阈值测定、免疫荧光组织化学染色等实验技术，研究了：（1）鞘内注射Mrg受体激动剂BAM8-22对大鼠机械痛阈值的影响和对大鼠脊髓背角中星形胶质细胞表达的影响；（2）鞘内注射BAM8-22对神经病理性痛大鼠DRG中fractalkine及IL-1表达的影响；（3）鞘内注射AM及H89对大鼠热痛觉过敏的影响。结果显示：（1）大鼠脊神经结扎处理后第10天机械阈值下降至基础值的50%左右，产生痛觉过敏。鞘内注射BAM8-22后能恢复大鼠的机械缩爪阈值，减轻脊神经结扎引起的机械痛觉过敏。（2）脊神经结扎能使脊髓背角GFAP和
4、DRG中fractalkine及IL-1的表达明显增加，而鞘内注射BAM8-22能使 GFAP和fractalkine及IL-1的表达显著降低。（3）持续应用AM能使大鼠甩尾反射潜伏期降低，而联合应用AM及蛋白激酶A抑制剂H89能使大鼠甩尾反射潜伏期保持稳定，同给药前相比并无显著差异。本研究表明，Mrg受体的激活参与机体病理性痛抑制机制，可能通过抑制GFAP和fractalkine及IL-1的表达上调来减轻神经+病理性痛的痛觉过敏。AM可参与机体疼痛形成，其机制是通过激活cAMP/PKA信号通路。关键词：Mrg受体，神经病理性痛，星形胶质细胞，Fractalkine，IL-1，肾上腺髓质素Ab
5、stractMas-related gene receptors (Mrg receptors) is uniquely located in trigeminal ganglia (TG) and the small diameter neurons dorsal root ganglia (DRG). It has been demonstrated that intermittent administration of bovine adrenal medulla 8-22 (BAM8-22), a selective Mrg receptors agonist, can inhibit
6、 the sciatic nerve ligation-induced hyperalgesia. Studies have shown that glial cells, Fractalkine, IL-1 and adrenomedullin are involved in the formation and maintenance of pain.This study was presented by testing the rats mechanical threshold and Immuno histochemical techniques to examine: (1) Effe
7、cts of intrathecal injection BAM8-22 on the mechanical hyperalgesia induced by ligation L5 spinal nerve and SNL-induced change of astrocytes in the spinal dorsal horn of rat. (2) Effects of intrathecal injection BAM8-22 on the SNL-induced change of fractalkine, IL-1 in DRG. (3) Effects of intratheca
8、l injection AM and H89 on the thermal hyperalgesia. Results showed that: (1) the paw withdraw pressure threshold dropped to about 50% of the baseline latency on 10th day after spinal nerve ligation (2) The expression of GFAP in the spinal dorsal horn and fractalkine, IL-1 in dorsal root ganglion wer
9、e increased following the surgery of SNL. Applying BAM8-22 to activate the Mrg receptors can inhibit the increase of GFAP, fractalkine and IL-1 , so as to reduce the hyperalgesia of the spinal nerve ligation rats. (3) Applying AM can reduce the tail-flick latency. However, co-administration of AM wi
10、th H89 everyday will keep the tail-flick latency steadily. This study indicates that the activation of Mrg receptors may be involved in inhibiting the maintenance of neuropathic pain. It is possible that inhibit the expression of GFAP, Fractalkine and IL-1 can relieve SNL-induced hyperalgesia in pai
11、n. AM can participate in the regulation of pain, and its mechanism may be transmit pain signals through the activation of cAMP/PKA pathway. Keywords: Mrg, neuropathic pain, astrocyte, Fractalkine,IL-1, adrenomedullin 中文文摘 星形胶质细胞是神经系统内数量最多的一类胶质细胞。在炎症或组织损伤引起的神经病理性痛中，星形胶质细胞的特异性标志物GFAP的表达量显著增加。被激活的胶质细胞释
12、放促炎因子（IL-1、IL-6、TNF-、神经生长因子）等作用于痛觉感受神经元使其敏感性和反应性增强，从而导致疼痛持续发生。病理状态下，星形胶质细胞常在损伤较晚期开始激活，但持续时间较长，其对于疼痛的维持起重要作用。因此探讨星形胶质细胞在神经病理性痛发生中的作用具有重要理论意义和临床价值。趋化因子fractalkine（CX3CL1）是一种神经元跨膜糖蛋白，可以在伤害性刺激作用下由神经元末梢释放出来，与小胶质细胞和星形胶质细胞上的fractalkine受体CX3CR1结合并将其激活。Fractalkine通过介导神经元胶质细胞间的信号通路，使激活的小胶质细胞和星形胶质细胞释放促炎因子（IL-1
13、、IL-6、TNF-、神经生长因子等）及神经活性物质（NO、ATP等）导致感觉神经元敏感性和反应性增强，从而引起疼痛持续发生。IL-1是一种由机体的免疫和非免疫细胞经刺激后合成并分泌的促炎细胞因子。病理状态下，激活的小胶质细胞可以增加包括IL-1在内的多种细胞因子和趋化因子的合成与分泌。IL-1通过复杂的机制诱导其他疼痛相关因子的释放并与其协同调制神经病理性痛，也可以直接作用于伤害感受器发挥促炎作用并参与疼痛的发生。Fractalkine与IL-1在调制神经病理性痛发生中起重要作用。感觉神经元特异性受体又称为Mrg受体（Mas-related gene receptors, Mrg），MrgC
14、受体属于Mrg家族成员。Mrg受体可以被内源性的牛肾上腺髓质8-22肽（bovine adrenal medulla peptide8-22，BAM8-22）激活。由于MrgC受体仅存在于DRG中小型神经元上，通常认为小型感觉神经元具有传导伤害性刺激信息的作用，因此MrgC受体可能参与调制伤害性信息传递。我们实验室研究发现BAM8-22对神经病理性痛有抑制作用，但其具体作用机制仍不清楚。由于星形胶质细胞、fractalkine与IL-1可参与神经病理性痛的调制，我们推测BAM8-22可能通过相关信号通路产生作用。因而研究Mrg受体在调制痛觉信息传递中的作用机制，对于开发新型镇痛药物具有重要价值
15、。Kitamura等于1993年从人类嗜铬细胞瘤分离出来的一种血管活性肽并将其命名为肾上腺髓质素(adrenomedullin，AM)。AM属于CGRP家族成员，在结构和功能上与CGRP具有相似性，它们都属于疼痛相关肽。AM可以通过激活多个信号通路对不同的细胞产生不同的生物学效应，从而介导疼痛的发生。但目前对于AM参与疼痛的具体机制仍不清楚。本实验通过行为学、免疫组织化学荧光染色等实验技术，研究了：（1）鞘内注射Mrg受体激动剂BAM8-22对大鼠机械痛阈值的影响和对大鼠脊髓背角中星形胶质细胞的影响；（2）鞘内注射BAM8-22对神经病理性痛大鼠DRG中fractalkine及IL-1表达的影响；（3）鞘内注射AM及H89对大鼠热痛觉过敏的影响。结果显示：（1）大鼠脊神经结扎第10天缩爪压力阈值下降至基础值的50%左右，形成痛觉过敏。鞘内注射BAM8-22后能恢复大鼠的缩爪压力阈值，减轻脊神经结扎引起的机械痛觉过敏。
