免疫自身抗体

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1、自身抗体,自身抗体检测的意义,诊断与鉴别诊断 病情活动性评估和监测 协助转归和预后的评判 预警,诊断：综合手段 临床+实验室+影像+病理,抗体依赖,抗体部分依赖,SLE SS MCTD RA APS GPA GBM(Goodpasture) AIH,PM/DM SSc PBC,抗体非依赖,系统性血管炎： BD TA PAN GCA RPC,ANA斑点型/RNP,5-10%血清阴性,Jo-1阳性率70%,Scl70,AMA-M2,自身抗体是指抗自身细胞内、细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白 ANA抗体谱 自身免疫性肝病抗体谱 ANCA 磷脂抗体谱 RA抗体谱 器官特异性免疫病相关抗体 甲状腺：TG

2、-Ab、TPO-Ab 炎性肠病：ASCA 皮肤：天疱疮抗体/类天疱疮抗体 胃：抗胃壁细胞抗体、抗内因子抗体 I型DM：IAA、ICA、GAD,抗核抗体,ANA概念：抗核酸和核蛋白抗体的总称 细胞核内和细胞浆内成分 ANA产生机制： 分子模拟/自身抗原改变/细胞凋亡 检测底物 鼠肝、鼠肾（大/小鼠组织不含SSA/RO抗原） 人喉癌上皮细胞(Hep-2),ANA的诊断价值和除外价值,ANA阳性诊断CTD？,ANA阴性除外CTD？,假阳性 未加稀释的正常人血清1/3呈阳性 低滴度ANA可见于感染、肿瘤、正常人 意义未明的核型 作为CTD的筛选试验必须强调滴度、核型,假阴性 重症SLE，抗体与大量抗原

3、结合沉积于组织 主要成分为抗dsDNA，疾病缓解期 大量蛋白尿时从尿/肠道丢失 技术：甲醇、乙醇固定导致SSA抗原丢失 某些核抗原成分在胞浆内或胞浆比核质更丰富(如SSA/RO，Jo-1，rRNP等),球蛋白亦丢失,弥漫性结缔组织病,ANA 18项 抗ENA a-Jo-1 a-Scl70 a-rRNP,IIF法原理,荧光显微镜下ANA的染色型别,均质型（Homogeneous）H： 抗组蛋白、抗dsDNA、ANuA 斑点型（Speckle）S： 与抗ENA有关 核膜型（Membranous）M 抗dsDNA、板层素抗体、gp210抗体 核仁型（Nucleolar）N RNA聚合酶、PM-Scl

4、-SSc 着丝点型（Centromere）C： CENP，ACACREST 胞浆型：AMA、抗Jo-1、抗rRNP,抗dsDNA,抗rRNP,AMA,RNA多聚酶/抗Scl-70,板层素抗体 Gp210抗体,抗Jo-1 抗SSA,H,M,S,N,胞浆型,着丝点型,纺锤体型,核点型,ANA分类,抗DNA（dsDNA,ssDNA) 抗组蛋白（Histone) 抗非组蛋白（Extractable Nuclear Antigen,ENA） 抗核仁（Nucleolus）,书写习惯：ANA(+) 型别 滴度,抗DNA,抗ssDNA抗体：针对嘌呤和嘧啶碱基，在多种疾病中及正常人血清中存在，无特异性 抗dsD

5、NA抗体：针对脱氧核糖核酸骨架，对SLE有较高的特异性 抗dsDNA阳性者85% 5年内发展为SLE 抗dsDNA与疾病活动度相关 抗dsDNA与LN相关：循环免疫复合物在肾小球基底膜沉积,或肾小球原位免疫复合物形成,检测方法及结果意义,放射免疫法(Farr):敏感 20% 间接免疫荧光法(短膜虫或马疫锥虫为底物):特异 1:10 酶联免疫吸附法(ELISA):敏感100,书写习惯：抗dsDNA-IF (+) 1:320/ ELISA: 800U/L,抗dsDNA-SLE特异性抗体,与SLE疾病活动相关，阳性者即使目前病情稳定，80%在5年内出现病情活动。,抗组蛋白抗体AHA,组蛋白是染色质的

6、基本结构核小体的重要组成部分.由H1，H3,H2A,H2B,H4组成 在多种自身免疫性结缔组织病（如SLE、SS、RA、SSC)中出现； 药物引起的狼疮中阳性率达95%. 不同药物所致的抗组蛋白的亚单位抗体不同 异烟肼：H1,H2A,H2B,H3和H4的滴度基本一致 肼苯哒嗪：抗H3和抗H4抗体 普鲁卡因酰胺：抗H2A-2B复合物抗体.,抗ENA抗体（4+7）,抗ENA抗体（4+7）,双扩散-4（特异） 抗Sm 抗SSA 抗SSB 抗RNP（抗U1RNP） 滴度： 1：1 1：4 1：16,免疫印迹-7（敏感） 抗Sm 28/29/13.5KD 抗SSA 52/60KD 抗SSB 45/47K

7、D 抗RNP 73/32/17.5KD 抗Jo-1 55KD 抗Scl-70 70/86KD 抗rRNP 38/16.5/15KD,后3个可单开双扩散法,抗ENA的测定-免疫双扩散法,不同稀释倍数 仅第一种为阳性,免疫印迹法,正确看待免疫印迹法的检测结果,免疫印迹中条带只表明在电场泳动中出现1）分子量相同的区带，2）由于形状、所带电荷而泳动速度相同可造成不同分子量蛋白在相同部位出现条带 免疫印迹中的多肽抗体并不一定是某种特异性抗体 印迹阴性并不代表该抗体一定阴性 片段的集合完整蛋白,片段的出现是否齐备 与双扩散法相互验证 与临床是否吻合,双扩散法： 针对整蛋白（有二级结构），更特异,抗Sm抗体

8、,抗原：核内小核糖核蛋白，其抗原决定簇主要在与u1,u2,u4-u6RNA连接的B和D蛋白多肽上 三条带同时出现时有一定意义 抗Sm抗体阳性往往 抗RNP抗体阳性-linkset SLE中阳性率：30%左右， SLE的标记抗体，几乎只出现于SLE 与疾病活动度不相关,抗RNP抗体,抗核内的核糖核蛋白（u1RNP抗体） 若抗Sm抗体阳性，抗U1RNP往往也阳性-linkedset 抗RNP抗体阳性常出现抗Sm抗体28、29KD 高滴度抗RNP抗体是MCTD的特异性抗体 区分CTD与非CTD 2530%SLE出现抗RNP阳性 与双手肿胀,雷诺氏现象,肌炎和指(趾)端硬化和肺动脉高压相关,抗SSA、

9、SSB抗体,抗SSA多在胞浆中，52KD与SS相关，60KD与SLE相关 抗SSA在SLE中阳性率40%，抗SSB在SLE中阳性率 10-15% 抗SSB阳性，抗SSA也应阳性；抗SSA阳性，抗SSB可以阴性 母亲抗SSA和抗SSB抗体阳性新生儿狼疮及婴儿心脏传导阻滞 常与亚急性皮肤型狼疮、平滑肌受累、光过敏、血管炎、皮损、紫癜、淋巴结肿大、高球/RF、NS损伤、WBC减少、晚发SLE有关,故ANA-时，SSA可+,抗rRNP抗体,抗原：核糖体60s亚基P0，P1，P2磷酸化蛋白，主要位于胞浆 与SLE中枢神经系统表现相关 对SLE高度特异，出现于1015%的SLE 常常在SLE活动期中存在,

10、与抗dsDNA的消长相平行,但其不会随病情的缓解立即消失,可持续1-2年后才转阴,与SLE病情活动性不完全同步,抗Scl-70抗体,抗原：DNA拓扑异构酶1 硬皮病（SSc）中抗Scl-70阳性率40%左右，为SSc的标记抗体，提示弥漫性SSc 双扩散法：小牛胸腺浸出物 与肺间质病有关-抗Scl-70阳性SD病人,发生肺间质病变的危险性较抗Scl-70阴性的SD病人增加10倍，阳性者易出现皮肤硬化快速进展和SRC,抗Jo-1抗体,抗原是组氨酰tRNA合成酶，胞浆中 PM/DM的标记抗体 PM/DM病人中2535%阳性，合并肺间质变的PM/DM病人中高达6070%阳性 抗Jo-1抗体综合征：急性

11、发热,对称性关节炎,技工手,雷诺现象,肌炎并肺间质变,三炎：肌炎、关节炎、间质性肺炎 三症：发热、技工手、雷诺,肌炎特异性抗体MSA,PL-7：苏氨酰tRNA合成酶 PL-12：丙氨酰tRNA合成酶 EJ：甘氨酰tRNA合成酶 OJ：异亮氨酰tRNA合成酶 KS：天冬酰tRNA合成酶 Mi-2：组蛋白乙酰基转移酶复合物的解旋酶组分（H） Ku：DNA结合蛋白（SN） SRP：信号识别颗粒,抗合成酶抗体 发热 关节炎 雷诺现象 技工手 间质性肺炎,抗SRP 阳性率4% 秋季急性起病 多发性肌炎 严重肌无力 累及心脏 死亡率较高,抗Mi-2 阳性率1520% 95%DM 皮肤病变： 披肩疹、 V形

12、症,肌炎特异性抗体MSA,皮肤病变为主， 肌炎轻,ACA（抗着丝点抗体）,抗原为CENP-A、B、C CREST(软组织钙化,雷诺现象,食道功能障碍,指端硬化,毛细血管扩张)综合征80%阳性 （ calcinosis/Raynaud phenomena /esophageal Dysmotility /sclerodactyly/telangiectasia ） 在SS和自身免疫性肝病中也可存在 PBC中阳性率53.5%，阳性者易出现门脉高压和消化道出血 ACA阳性的SS更易出现淋巴瘤，高球少，RP多,抗PCNA（抗增殖性核抗原）： 抗原-DNA多聚酶的辅因子 对SLE高度特异，阳性率低15%

13、,SLE特异，但阳性率低,ANuA（抗核小体抗体）,对SLE的特异性98% 可见于药物性狼疮 早期SLE、非活动期SLE检出率高于抗dsDNA,抗RNP与抗rRNP,二者抗原不同，抗RNP的抗原是含尿嘧啶的核糖核蛋白，主要在核内，而抗rRNP的抗原是主要在胞浆内核糖体亚基中的磷酸蛋白 抗RNP与雷诺现象、肺动脉高压相关，是MCTD的特异性抗体； 抗rRNP与NPSLE相关，是SLE的特异性抗体,N Engl J med 358;9,CTD诊断时ANA的检测策略,自身免疫性肝病,生化： 1）转氨酶增高 ALT、AST 2）胆管酶增高 ALP、GGT （胆红素、TBA） 3）排除其他病因： 饮酒、

14、病毒、药物,自身免疫性肝炎- AIH,原发性胆汁性肝硬化 -PBC 原发性硬化性胆管炎-PSC,自身免疫性肝病,AIH抗体谱,PBC抗体谱,ANA a-SMA a-KLM a-SLA,AMA AMA-M2 Gp210 SP100,自身免疫性肝病的抗体谱,AIH 型 ANA、a-SMA、pANCA 型 抗KLM、抗LC1 型 抗SLA/LP PBC AMA-M2 抗gp210、抗SP-100 PSC ANA、a-SMA、 ANCA,自身免疫性肝病抗谱,鼠肝鼠肾-KLM,鼠胃-抗平滑肌抗体；抗肌动蛋白抗体,Hep2-抗核点抗体；鼠肝-ANA,鼠肾-AMA；猴肝-SLA,AMA,抗细胞浆成分：靶抗原

15、-丙酮酸脱氢酶E2（PDC-E2）和X蛋白 AMA-M2 在PBC中阳性率96%，特异性97%； 滴度与疾病严重度和预后不相关 M1M9 AMA-M2、M9-预后好 AMA-M4、M8-预后差,对优思弗效果佳,AMA亚型抗体种类及其疾病相关性,PBC中出现的自身抗体及意义,抗磷脂抗体,肺栓塞,布-加综合征,下腔静脉血栓,肠缺血,肠穿孔,脾梗塞,肾梗塞 肾静脉血栓 肾衰竭,心肌梗塞,Addison,肾上腺,骨梗死,脑梗塞,CRVOCRAO,眼,胰腺炎,流产、早产、宫内发育迟缓、先兆子痫,什么时候想到APS？,静脉血栓、动脉栓塞、病理妊娠 APTT延长（体内高凝、体外不凝）,APTT与纠正实验,即

16、刻、孵育2h均不能被纠正 加入磷脂可纠正,抗磷脂（Phospholipid）抗体,狼疮抗凝物 抗心磷脂抗体 梅毒血清试验假阳性（RPR+，TPPA确证阴性） 2GP1 2GP1（载脂蛋白）与磷脂结合，改变表面结构，暴露抗原决定簇，介导抗磷脂抗体结合到膜磷脂。2GP1是必需的辅助因子，测2GP1可能比测ACL更有意义。 动静脉血栓形成、血小板减少、习惯性流产、神经精神狼疮有关,系统性血管炎,ANCA 血管炎抗体谱：ANCA+AECA,血管大小的定义,大血管-主动脉及一级分支 中等血管：肌性动脉和小动脉 内膜弹力层肌层外膜 小血管毛细血管和后微静脉、微动脉,ANCA,以中性粒细胞和单核细胞胞浆成分为靶抗原 靶抗原：PR3，MPO、乳铁蛋白酶、弹性蛋白酶、组织蛋白酶、杀菌/通透性蛋白 C-ANCA（胞浆型）：主要抗原PR3 P-ANCA（核周型）