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1、HPV的检测及其临床应用,陕 西 省 人 民 医 院 检 验 科 刘 文 康,HPV,乳头瘤病毒科属小DNA病毒 乳头瘤病毒的基因组主要编码三组基因 三个癌基因，包括E5、E6和E7，负责调节癌细胞转化过程； 两个调节基因，包括E1和E2，负责调节转录和病毒基因组的复制； 两个结构蛋白基因，包括L1和L2，组成病毒颗粒,HPV感染,属于常见的性传播感染 直接的皮肤-皮肤接触是传播的最有效途径 病毒不通过血液或体液传播（例如精液）,HPV感染,生殖器HPV感染的潜伏期变化极大。一般来说，生殖器疣在HPV感染3-6月后显现，然而也有研究表明潜伏期有数个月甚至几十年； 绝大多数的HPV感染是一过性的
2、，新发感染大多1-2年内会发生自愈； 仅有少数的HPV感染会保持潜伏性，几年或几十年后会再激活。,多数生殖道HPV感染无临床症状 与HPV相关的宫颈疾病包括：宫颈湿疣、宫颈病变和宫颈癌等 从HPV感染到释放病毒约有3周。但是，HPV感染至出现损伤之间可能数周到数月。病毒感染的早期可能存在免疫逃逸，故没有炎症反应,完整的HPV感染循环,HPV感染颗粒突破下肛殖道表皮 HPV感染颗粒进入表皮细胞的基底层 随着基底层干细胞的子细胞分裂以及在垂直方向上的成熟化，病毒在基底层以上鳞状细胞中复制 成熟的病毒在表面细胞分离时释放到环境中,HPV分型,最重要的分类学单元是型(type) 与宫颈癌相关程度较为清
3、楚的HPV型归为高危型HPV（16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73 ）和疑似高危型HPV（ 26, 53, 66 ） 与尖锐湿疣等良性疾病相关的HPV被归入低危型HPV（ 6, 11, 40, 42, 43, 44, 54, 61, 70, 72, 81，89 ），一般认为这类HPV的感染不会诱导宫颈癌的发生,HPV与宫颈癌的相关性,年轻性活跃的女性HPV感染率最高，感染高峰年龄为1828岁 多属于一过性感染，通过自身免疫将HPV消灭 只有持续感染HPV的妇女,才成为子宫颈癌高发人群 HPV感染到发展成为子宫颈癌需要9-2
4、5年时间 30%发展成为CIN1,10%发展成为CIN2,10%进一步发展成为CIN3，1%发展成为子宫颈癌,宫颈癌前病变,宫颈上皮细胞内瘤变 （CIN）；包括宫颈非典型增生和宫颈原位癌，反映宫颈癌发生、发展的过程。从细胞学分为CINI、III级，包含宫颈鳞状上皮细胞内病变和腺细胞内病变。,宫颈癌现状,女性第二大常见恶性肿瘤 全世界每年新病例数为56.5万 在发展中国家宫颈癌的发生率为发达国家6倍，有50%的病例发生在中国和印度 中国每年新病例为18.15万 中国每年有3万多的妇女死于宫颈癌,发展中国家的新发病例多是晚期患者,未能早期诊断 细胞学检查未能普及 阴道镜应用条件受到限制 民众对宫颈
5、癌的防范意识欠缺,发病年龄,原位癌的发病年龄为35-39岁 浸润癌为40-49岁,宫颈癌的新动向,近年来由于生活方式的改变 发病率: 有上升趋势 发病年龄: 趋向年轻化,HPV 感染和宫颈癌在不同年龄组的发生率,年龄 (Years),HPV 感染率 (%),40-44,15-19,20-24,25-29,30-34,35-39,45-49,50-54,0,5,10,15,20,25,30,0,5,10,15,20,25,30,每10万人中宫颈癌发生率,哪些些妇女更容易患宫颈癌,性生活过早 早孕多产或多次人工流产 自己或性伴侣有多个性伴侣 曾经或正患有生殖道HPV感染 有或曾经患有其它性病 吸烟
6、、吸毒和营养不良 内分泌紊乱或免疫力低下的妇女,现在基本明确宫颈癌的病因就是高危型HPV的持续性感染。 感染HPV病毒到发展成浸润癌需要大约十年的历程，这是重要不可忽视的时间，只要定期进行妇科健康检查，就可以及早发现子宫颈癌癌前病变并加以治疗，就可有效地扼制其癌变;预防子宫颈癌的发生。,宫颈癌可以预防和治愈,引起宫颈癌几个方面因素,HPV致宫颈癌机理,5-10years,HPV感染,持续HPV感染,细胞 分化异常CIN,高度 CIN,30,30,宫颈癌,辅助 致癌剂,免疫因素,HPV E6癌蛋白与宫颈恶性病变的关系,HPV E7癌蛋白的分子生物学特性,宫颈上皮细胞发生异常和瘤变的进化过程,HP
7、V致宫颈癌进展示意图,LSIL LSIL,CIS,CA,810年（100%治愈）,25年（死亡）,正常,低度 病变,高度 病变,原位癌,浸润癌,关于HPV感染,HPV感染多数不发展成为宫颈癌，可以在9-16(8-10)个月消失; 间隔半年2次HPV（）; HPV持续感染; 28%的持续感染者,在2年内发展为CIN I；70% 的持续感染者4年内发展为CINII;,HPV实验室检测,临床常用的HPV检测方法,病理学检查 细胞学检查 免疫组化检测 原位杂交技术检测 聚合酶链反应( PCR)技术 DNA芯片分型检测 杂交捕获DNA分析,病理学检查,鳞状上皮疣状乳头状增生 表皮角化不全 棘层不规则增厚
8、 基底层增生 上皮脚延长 中表层出现灶状分布的挖空细胞等。,细胞学检查,凹空细胞、角化不良及湿疣外底层细胞 细胞学诊断HPV感染敏感性较差,免疫组化检测,检测HPV的衣壳抗原来进一步明确HPV感染 所得阳性反应定位明确,判断可靠 必须在HPV-DNA 复制成熟后才有衣壳装备 敏感性较低,原位分子杂交,用来测定基因或特定核苷酸序列在核酸分子的所在部位，检测重组体DNA） 通过非放射性探针对石蜡组织进行检测,能作定位检测,假阳性率低,但灵敏度不高,大大降低了临床使用价值。,聚合酶链反应( PCR)技术,设计与HPV-DNA互补的一对特异性核苷酸引物,以HPV-DNA为模板以指数增长的速率进行体外扩
9、增 敏感性最高,可对HPV进行分型,测定病毒载量,发现新基因型,对基因进行序列分析 缺点为样品间易交叉污染导致假阳性,杂交捕获DNA分析,标本中的HPV-DNA 与液相中的RNA探针结合,形成特异性的RNA-DNA杂交体,被微孔板内的特异抗体所捕获,然后被所加的发光底物检测,其发光的强度与标本中的DNA 量成比例,因而可对HPV进行半定量检测 效率高,适于大量人群检测,临床上操作简便,DNA裂解 RNA-DNA杂交 抗体捕获 化学发光 计算机判读,裂解 加入探针 杂交 加入二抗和发光剂,hC2方法，特异性强，准确率高，并能做到定量，但不能分出亚型。芯片技术，可在相同的条件下，分出亚型，但不能定
10、量。因此， HPV亚型分类和定量检测研究将成为今后的重要课题。亚型和量化，可能对疾病的演变和转归提供更有利的证据。,宫颈癌的筛查,筛查对象,21岁以上有性生活史或具有性生活三年以上的任何妇女。 高危人群：有多个性伴侣、性生活过早、HIV / HPV感染、机体免疫功能低下、卫生条件差/性保健知识缺乏。 某些情况无需进行筛查，如因良性疾病摘除子宫的妇女。,起始年龄： 在我国经济发达地区为2530岁；经济欠发达地区为3540岁。对于高危妇女人群，筛查起始年龄应适当提前。 终止年龄： 65岁后患子宫颈癌的危险性极低，故一般不主张对65岁以上的妇女进行子宫颈癌筛查。,筛查间隔,1、每年一次细胞学检查，连
11、续2次（-）， 可3年一次 2、连续2次HPV（-），细胞学检查（-） 可58年一次 3、高危人群：最好每年一次 （CIN及以上、特殊职业、30岁以上高危HPV感染者）,筛查方案,根据中国癌症预防与控制规划纲要（2004-2010）推荐，一般可以选择下面两种筛查方案。,醋酸或碘染色后肉眼观察（VIA/VILI）,阳性 阴性 阴道镜+病理 定期筛查（1次/年） 相应治疗 初级筛查方案流程图,医生取材HPV检测+传统巴氏涂片（TBS分级）,HPV（-） HPV（+） HPV （-） HPV （+） 细胞学 ASCUS 细胞学 ASCUS 细胞学 ASC-H 细胞学 ASC-H 阴道镜检查/ 多点活检+ECC 筛查（1次/35年） 随访（1次/年） 相应治疗 一般筛查方案流程图,取材HPV检测+液基细胞学检查（TBS分级）,HPV（-） HPV（+） HPV（-） HPV（+） 细胞学ASCUS 细胞学 ASCUS 细胞学ASC-H 细胞学 ASC-H 阴道镜检查/ 多点活检+ECC 筛查 随访 （1次/35年） （1次/年） 相应治疗 最佳筛查方案流程图,筛查建议,筛查间隔： 每年1次，连续2次细胞学筛查阴性，可延长至3年；若连续2次细胞学联合HC2 HPV筛查均阴性，可延长至5-8年；免疫功能低下者筛查间隔应缩短。 建议：每位妇女三年至少一次宫颈癌前筛查,谢谢大家,
