《医学标书例文.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《医学标书例文.doc（14页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、河南省科技攻关计划项目申 请 书姓 名： Luo Binjie 项目名称： miRNA与膀胱癌诊断，临床治疗的相关研究 单 位： 郑州大学 联系电话： 填 报 说 明 请根据自己的专业及研究方向，针对某具体临床问题，结合所学习临床科研方法的一种或几种写出一份科研设计。完成后，文件以个人姓名命名，发至：。考核成绩依设计书优略评定。截至日期2013年11月8日。一、项目的立项依据和意义（说明国内外相关领域技术发展水平和趋势等）全国肿瘤登记地区膀胱癌发病率为7.49/10万，世界人口标化发病率（世标率）为4.53/10万，膀胱癌居中国男性泌尿生殖系恶性肿瘤发病率第1位, 居中国恶性肿瘤发病率第8位，
2、居中国男性恶性肿瘤发病率第6位 ，全国肿瘤登记人口膀胱癌发病率,呈现逐年增长趋势1。孙思邈千金要方卷一诊候：“古之善为医者，上医医未病之病，中医医欲病之病，下医医已病之病。在医学如此高速发展的今天，我们显然不会满足大多数“发现无痛性肉眼血尿-进行膀胱镜检-再行手术切除膀胱灌注”的这一套最常见的膀胱癌诊治流程。介入科韩新巍教授说过未来医学是微创和介入医学的为主导的，内外科为辅助的医学。显然对miRNA的探求能对膀胱癌的诊治带来前所未有的契机。微小核糖核酸（microRNA ，miRNA）在转录后水平对基因的表达进行调控。miRNA 在膀胱癌的演进过程中发挥着类似于癌基因或抑癌基因的作用。目前研究
3、表明，对miRNA 的调控可为临床膀胱癌的诊治提供一个新的靶点，提高膀胱癌患者的远期生存率和生活质量2。1：关于miRNA: miRNAs 是一类大小为19个25个碱基的单小分子RNA。在细胞核内，它本身不编码蛋白，但是可调节其他基因的翻译表达。miRNA 初级产物在RNA 聚合酶 作用下合成miRNA 转录前体（PrimiRNA） ，然后经RNA 聚合酶 （Drosha 酶）和DGCR 蛋白加工后，形成发卡环结构的miRNA 前体（Precursor miRNA ，premiRNA），最终被转运体Exportin 转运至细胞质，由核酸酶Dicer 剪切形成RNA 诱导的沉默复合体（RNAin
4、duced silencing complex ，RISC）。miRNA 通过与靶mRNA 特异碱基配对而引起靶miRNA 的降解或翻译抑制，在转录后水平调控基因表达，从而调控肿瘤细胞的增殖和凋亡 。细胞可分泌含miRNA 的复合物进入体液，如尿液、血液、唾液、母乳 。一种miRNA可靶向一个或者多个mRNA ，多种miRNA 也可同时靶向一个mRNA。因此，异常表达的miRNA 不仅能致癌而且有肿瘤抑制的功能。2：miRNA与膀胱癌的关系的研究趋势及范围表1：部分膀胱癌相关miRNAs 的差异表达（数据来源于miRNAs 在膀胱癌诊治中的研究进展）miRNA miRNA 表达变化 推测靶基因
5、 miRNA-a 上调 PTEN miRNA- 上调 miRNAa 下调 FOXA miRNA 下调 IncRNA UCA miRNA 下调 FOXM miRNA 下调 PAK miRNA 下调 miRNA 下调 ADAM miRNAb 下调 SIRT，MALAT 表2：miRNA表达水平变化与膀胱尿路上皮癌的关系3表3：miRNA家族的一些机制细分3.国内外相关研究成果 I：miRNA与膀胱癌早期诊断的一些研究发现Tolle 等在血液中和尿液中不同表达的miRNAs 来发现膀胱癌，采用数据库来源于the Sanger database v 的基因芯片分析，在血液中，miRNAbp 、miRN
6、Ap 、miRNAp 在浸润性膀胱癌中高表达，而且miRNAbp 特异度为 ，敏感度为 。在尿液中miRNA 、miRNAbp 在浸润性膀胱癌中高表达，而且miRNAbp 特异度为 ，敏感度为 。由此推断，根据血液、尿液中一些特异的miRNAs 来诊断浸润性膀胱癌成为一种可能4。Zhang等检测 例膀胱癌患者手术标本的癌组织和邻近正常组织miRNA 表达水平，分析它们与临床病理参数和预后评估相关性。结果显示肿瘤组织miRNA 的表达水平显著高于相应的非癌组织（ P ） 。KaplanMeier 分析表明，具有较高miR表达水平的患者与低表达水平患者相比较， 年生存率分别为 和 。其中包括miR
7、NA 过表达，肿瘤病理分级，肿瘤分期和肿瘤数目的多变量Cox 回归分析，miRNA 的过表达与较差存活率独立相关（HR ， CI ： ，P ） 。miRNA 的过表达提示膀胱癌预后不良，并且可以被用来作为警示预后不良的生物标志物5。Feng 等利用Taqman 探针茎 环法PCR 精确测量 对患者的膀胱癌组织、相邻的非肿瘤组织、膀胱癌患者和正常人对照的血浆miRNAa 水平。用miRNAa 模拟和抑制剂转染膀胱癌细胞。结果发现miRNAa 在膀胱癌组织中显著上调，而且miRNAa 的表达水平与癌细胞的侵袭能力相对应。同时，获得或丢失miRNAa 的功能性试验印证了它可能在膀胱癌的发展中起癌基因
8、作用。此外，膀胱癌患者的血浆中检出的miRNAa 支持发展为膀胱癌的潜在诊断标记物。另一组研究者利用互补的反义核酸转染到原先上调的miRNAs，发现其表达明显受到抑制，并检测出肿瘤细胞增殖明显减缓6。 Zhu 等通过小干扰RNA（siRNA）和miRNA 介导的IGFIR 的敲除实验揭示了miRNA 促进癌细胞凋亡，进一步分析发现主要通过影响的IGFIR 信号传导，以抑制IGFIR 的表达，抑制癌细胞增殖和迁移，起到抑癌基因的作用。另一组研究者发现膀胱癌中miRNAa 、miRNA 、miRNA 、miRNA 均体现为抑癌基因的作用。他们采用转染的方式上调其表达，发现癌细胞增殖、分化能力明显受
9、抑制，而且侵袭、迁移能力也减弱，印证了它抑癌基因作用的推测7.（检测出来了说明对于膀胱癌患者是好的） II:miRNA与膀胱癌的治疗 Li 等研究发现，以顺铂为基础的化疗诱导了miRNAa 的启动子去甲基化，增加miRNAa 的表达，反过来增强了肌层侵入性膀胱癌细胞对顺铂的敏感性，降低了癌细胞侵袭性和增殖能力8。Kozinn 等根据miRNAs 的变化来预测是否对吉西他滨有抵抗性，研究结果提示miRNA 、miRNA 、miRNAleti 、miRNAletb 通过调节黏蛋白 ，使吉西他滨产生耐药性。由此设想，通过调控的特定miRNAs 的表达或者影响其上游基因信息传递通路，可以增强膀胱癌化疗
10、的敏感性以及减少其耐药性9。把表达p 基因的腺病毒载体和靶向于CDKNA基因的人工miRNA 转染进入癌细胞可增加癌细胞对阿霉素的化疗敏感性；miRNA 的表达增加可通过靶向DNA 修复酶位点增强肿瘤细胞在辐射中的敏感性10.为解决临床膀胱癌患者对顺铂耐药的问题，Drayton等研究发现SLCA 基因的表达与miRNAa的表达呈负相关，当miRNAa 高表达或者通过siRNA、柳氮磺胺吡啶降低SLCA 基因的活性时，耐药的膀胱癌细胞株的致敏性得以恢复，由此可推测miRNAa 可作为治疗膀胱癌患者对顺铂耐药的一条途径11。4：选取自己感兴趣的mi-RNA家族成员进行研究相关研究表明mi-RNA9
11、9a作为一个肿瘤抑制因子，在膀胱癌中水平降低，有降低尿路上皮癌侵袭性可能。其他相关研究：mi-RNA在人类可以通过靶基因mTOR促进食管鳞状细胞的凋亡12 ，mi-RNA的低表达也能促进口腔鳞癌细胞的增殖13。那么它的高表达是否意味着膀胱癌患者癌细胞同样受到抑制，提示着患者预后较好？或者依据miRNAs 表达的时序性和组织特异性特征，可以探索膀胱癌各个发展阶段中的特定miRNA 表达谱，用于判断膀胱癌恶性程度和临床分期？或者是提前通过测量其相关调控基因产物预测患者患膀胱肿瘤风险？或者是了解它的表达是否能增强治疗膀胱肿瘤药物的敏感性及耐药性等？我选取一个比较小的研究点：研究可以反其道而行之，根据
12、临床上已经确诊的膀胱癌的标本或者细胞株来测量mi-RNA的含量，同时测量一定标本正常人群mi-RNA的含量，来推测膀胱尿路上皮癌各个发展阶段中的特定miRNA 表达谱是否与膀胱癌恶性程度和临床分期存在着某些统计学上的联系。1：韩苏军, 张思维，陈万青，李长岭。中国膀胱癌发病现状及流行趋势分析。中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所，泌尿外科。2：梁敏，王海峰，王剑松。miRNAs 在膀胱癌诊治中的研究进展。医学与哲学2015 年6月第36卷第6B 期总第527期。3孙阳综述,郭剑明审校.miRNA调控与膀胱癌的关系研究进展。International Journal of Urology and N
13、ephmlogy。Jan 201 1V0131 NOI4Tolle A ，Jung M ，Rabenhorst S ，et al Identification of microRNAs in blood and urine as tumour markers for the detection of urinary bladder cancerJ Oncol Rep ，2013 ，30（4） ：1949 1956 5Zhang D Q ，Zhou C K ，Jiang X W ，et al Increased expression of miRNA222 is associated with poor prognosis in bladder cancer J World J Surg Oncol ，2014 ，12 ：241 6张明，魏巍，刘禄成，等反义微小RNA21对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响J 吉林大学学报：医学版，2010 ，36（3
